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Cas12a 针对多重基因组的优化
图 1. 现有 Cas12a CRISPRa 技术的评估。A) 采用两种不同的 Cas12a 核酸酶失活突变的 CRISPRa 构建体的比较。通过转导五天后表达 CD4 的细胞百分比来测量激活程度。B) 针对采用直接与 dCas12a (D908A) 连接的 TAD 组合的 12 种 CRISPRa 构建体变体，以基线表达为标准对 CD4 平均荧光强度 (MFI)。C) 示意图描绘了基于流式细胞术的平铺筛选的概览，该筛选用于识别其他活性 Cas12a CRISPRa 指南。D) 根据指南靶位点相对于 CD4、CD26、CD97 和 CD274 的转录起始位点 (TSS) 的位置绘制了每个指南在技术重复中的绝对最小 LFC 的 Z 分数。
V7 2023 年 10 月：Beam PharmaD 奖学金计划
该奖学金计划侧重于培养临床生物标志物和转化科学家所需的技能。了解疾病生物学、药物作用机制以及各种计划的生物分析和生物标志物需求和策略。获得使用不同检测平台（如 MSD、ddPCR、qPCR、流式细胞术等）实施临床药代动力学、药效学、生物标志物和抗药抗体检测的专业知识。参与新技术评估、检测的实际开发和故障排除、数据分析和解释。参与治疗领域的跨职能团队互动。研究员将在小组会议和全公司海报/口头报告中展示工作。研究员可以选择学习转化科学的一些临床药理学方面；跨职能培训可以根据候选人的背景和偏好进行量身定制。
胎盘炎症会导致异常的胚胎心脏发育
方法：在这项研究中，我们通过抗体在时间融合的鼠妊娠期间在关键阶段的母体循环中性粒细胞的抗体消耗来使用体内中性粒细胞驱动的胎盘炎症模型：4.5和7.5。在胚胎第14.5天剔除孕妇小鼠，以评估胎盘和胚胎心脏发育。流式细胞仪，组织学和大量RNA测序的组合用于评估胎盘免疫细胞组成和组织结构。我们还使用流式细胞术和单细胞测序来评估胚胎第14.5天的胚胎心脏免疫细胞以及组织学和基因分析来研究胚胎心脏的结构和发育。在某些情况下，在产后第5天和第28天，后代被剔除，以评估通过超声心动图测量的免疫细胞，结构和心脏功能的产后心脏变化。
比较全自动尿液颗粒分析仪（UF-1000I）与尿路感染测试中定量尿培养和亚硝酸盐反应的比较
基于流式细胞术的自动尿液分析仪，UF-1000i是一种可以测量红细胞（RBC），白细胞（WBC），上皮细胞（EC），铸造和细菌在非液体尿液样品中的装置。在本研究中，将用UF-1000i获得的结果与尿液中常规定量尿培养和亚硝酸盐反应获得的结果进行了比较。此外，我们研究了UF-1000i的散点图是否可以区分球菌和杆菌。UF-1000i和常规定量尿培养的结果良好相关，UF-1000i对细菌的敏感性和特异性分别为96.7％和68.1％。由UF-1000I测量的细菌尿中亚硝酸盐反应的阳性速率为12.7％，并且检测到的大部分物种是大肠杆菌。细菌和球菌的UF-1000i散点图的一致性率分别为94.7％和82.7％。在细菌（> 10 5 /ml）中，散点图模式可以区分球菌和杆菌。
造血干细胞识别射线后
辐射暴露尤其损害造血系统的细胞，诱导全血管减少症和骨髓衰竭。对这些过程的研究，以及开发治疗以防止造血损伤或增强辐射暴露后的恢复，通常需要在辐射后早期对骨髓细胞进行分析。虽然流式细胞术方法的表征很好地鉴定和分析了非辐照环境中的骨髓种群，但在处理辐照组织时会出现多种并发症。是辐射引起的C-KIT丧失，这是小鼠原始造血种群传统门控的中心标记。这些包括造血干细胞（HSC），这些干细胞是血液重建和终身骨髓功能的核心，并且是这些研究中分析的重要靶标。本章概述了HSC识别和分析的技术。
鉴定具有大量平行筛选的高效和组织特异性启动子
迷你启动子在体外比CAG强。（a）使用基于流式细胞术的体外测定法对有希望的迷你启动候选者的活性进行了验证。启动子候选物被克隆在双重孢子质粒中的McLover3上游，该质粒还包含TDTOMATO（RFP）表达盒，该盒被用作内部转染对照。启动子活性被量化为单个活的TDTOMATO+细胞中McLover3和TDTomato的中位荧光强度的比率。（b）使用双报告基因测定法分析，启动子在小鼠N2a和人HuH7细胞中的相对表达。（c）NGS表达（条形码）和独立测定表达（蛋白质荧光）的强相关性表现出对高通量筛选和生物信息学命中选择的预测能力的高信心。
一种新型 Fc 工程化蛋白酶 D 靶向抗体...
摘要 简介 三阴性乳腺癌 (TNBC) 预后较差。针对经常具有免疫原性的 TNBC，增强抗体诱导的自然杀伤 (NK) 细胞抗肿瘤活性的免疫疗法正在兴起。天冬氨酸蛋白酶组织蛋白酶 D (cath-D) 是一种具有促肿瘤活性的肿瘤细胞相关细胞外蛋白，是 TNBC 的不良预后标志物，是基于抗体的疗法诱导 NK 细胞介导的抗体依赖性细胞毒性 (ADCC) 的主要靶点。本研究调查了 Fc 工程化抗 cath-D 抗体是否会触发 ADCC、它们对抗肿瘤功效和肿瘤浸润 NK 细胞的影响以及它们与 TNBC 联合治疗的相关性。方法 通过蛋白质印迹、免疫荧光和免疫组织化学评估 TNBC 样本中的 Cath-D 表达和定位。通过 ELISA 分析了增强（F1M1-Fc + ）或阻止（F1M1-Fc − ）对 CD16a 的亲和力的人抗 cath-D F1M1 和 Fc 工程抗体变体与分泌的人和鼠 cath-D 的结合，并通过表面等离子体共振和流式细胞术分析了与 CD16a 的结合。通过流式细胞术研究 NK 细胞活化，通过乳酸脱氢酶释放研究 ADCC。使用裸鼠中的 TNBC 细胞异种移植研究了 F1M1 Fc 变体的抗肿瘤功效。通过免疫表型分析和 RT-qPCR 分析了 MDA-MB-231 细胞异种移植中的 NK 细胞募集、激活和细胞毒活性。使用抗唾液酸 GM1 抗体耗尽 NK 细胞。在 TNBC 患者来源的异种移植 (PDX) 和 TNBC SUM159 细胞异种移植中以及与紫杉醇或恩杂鲁胺联合使用时评估了 F1M1- Fc + 抗肿瘤作用。结果 TNBC 细胞表面的 Cath-D 表达可用于诱导 ADCC。F1M1 Fc 变体识别人类和小鼠 cath-D。F1M1-Fc + 激活
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摘要背景癌症免疫学领域正在迅速朝着创新的治疗策略迈进，导致需要反映对癌症免疫反应的强大和预测性临床前平台。表征良好的临床前模型对于肿瘤学和免疫肿瘤空间中预测性生物标志物的发展至关重要。在当前的研究中，黄金标准临床前模型正在完善并与新的图像分析工具相结合以满足这些要求。方法在人源化/shi-scid/il-2rnull小鼠中传播了14个非小细胞肺癌患者衍生的异种移植模型（NSCLC PDX）面板。这些模型具有相关的表型和分子特征的全面表征，包括流式细胞术，免疫组织化学，组织学，整个外显子组测序和细胞因子分泌。的结果模型反映了热肿瘤（<5％的TIL）的热（> 5％肿瘤浸润淋巴细胞/TIL），其细胞因子谱，分子遗传像差，基质含量和程序性细胞死亡配体1个状态有显着差异。治疗实验包括抗细胞毒性T-淋巴细胞相关蛋白4，抗编程细胞死亡1或单个小鼠试验格式中所有14个模型中其组合的组合显示出明显的性肿瘤生长响应和空间免疫细胞模式，这些模式通过计算机化的全面滑动图像的计算机化分析来监测。图像分析为首次定性评估PDX模型保留其原始人类捐助者的组织学特征的程度。结论通过计算病理学，免疫组织化学，流式细胞仪和蛋白质组学的结合，PDX模型在人性化的环境中进行了深层表型，从而可以对创新的临床前模型进行详尽的分析，并为免疫肿瘤学药物的转化生物标志物开发开发转换生物标志物。
a兼式抗抗抗元素介导的序列介导的 -
背景：肝细胞癌（HCC）是癌症相关死亡的主要原因之一。Sorafenib是该疾病的一线疗法，与降低的治疗功效有关，可以通过与selumetinib结合来克服这种疗效。在这种情况下，这项工作的主要目标是开发一个新的纳米系统，该系统由含有靶向配体GalNAC的脂质双层涂层的聚合物核心组成，以专门有效地将两种药物分配到HCC细胞中，以显着提高其治疗效率。方法：混合纳米系统（HNP）的物理化学表征及其成分是通过动态光散射，ZETA电位，基质辅助激光解吸电离的电离 - 飞行质量光谱的时间 - 飞行质量光谱的时间和透射电子微观。细胞结合，摄取和HNP的特异性通过流式细胞和共聚焦显微镜评估。通过Alamar Blue Assay评估了治疗活性：通过：细胞活力；使用FITC-ANNEXIN V通过流式细胞术进行细胞死亡；胱天蛋白酶活性通过发光；通过流式细胞仪的线粒体膜电位；通过蛋白质印迹和分子靶水平。结果：获得的数据表明，这些混合纳米系统具有两种药物的较高稳定性和载荷能力，以及合适的理化特性，即在大小和表面电荷方面。此外，生成的制剂允许绕过耐药性并具有高特异性，从而促进了HCC细胞中的大细胞死亡水平，但不能在非肿瘤细胞中。通过增加的编程细胞死亡来实现共同载体药物的抗肿瘤作用的增强，这与线粒体膜电位的强烈降低相关，caspase 3/7和caspase 9的活性显着增加，并大量增加附属蛋白V-v-p-p-p-p-p-py-py-py-PORSISTIS的细胞。结论：开发的配方产生了较高且协同的抗肿瘤作用，揭示了改善针对HCC治疗方法的转化潜力。关键字：肝细胞癌，混合纳米系统，药物输送，Galnac，Sorafenib，Selumetinib