用于使用........................................................................................................................................................................
图3。MGCL₂,KCL和TMAC对在60°C的延长温度下在靶标的90%放大的影响。使用Platinum II TAQ热启动DNA聚合酶在Proflex PCR系统上从金黄色葡萄球菌中扩增了富含的目标序列。每个20 µL反应包含10 ng的金黄色葡萄球菌和其他(a)1、1.5、2或2.5 mmmgcl₂,(b)30、50、70或90 mm kcl或(c)50、70、70、90、90、90、90或110 mm tmac。热循环条件:94°C时2分钟;在94°C,最佳退火温度下15秒的15秒循环(表4),在60°C下为30秒/kb。PCR产品以2%E-Gel 48含Sybr安全染色的琼脂糖凝胶运行。车道M:E-GEL 1 KB Plus Express DNA梯子。
蛋白质的来源:从大肠杆菌的菌株中纯化,该菌株过表达了噬菌体T4的基因32蛋白。分子量:33,506 Daltons质量控制分析:使用带有单链,荧光标记的寡核苷酸标记的凝胶移位测定法测量了单链DNA的DNA结合。Serial dilutions of the enzyme were made in 1X T4 GP32 reaction buffer(50mM Potassium Acetate, 20mM Tris Acetate, 10mM Magnesium Acetate, 1mM DTT pH 7.9) and added to 10 µL reactions containing a 5'-FAM labeled oligonucleotide substrate, and 1X T4 GP32 Reaction Buffer.在37°C下孵育20分钟,将其浸入冰上,并在15%的TBE-TEREA凝胶上耗尽。DNA结合能力被视为在TBE-rea凝胶上寡核苷酸的表观分子量中的带移。蛋白浓度(OD 280)由OD 280吸光度确定。物理纯度,然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。
此外,TTx DNA 聚合酶具有 5'-3' 外切酶活性,因此可用于使用探针分析(如 TaqMan ® 分析)的实时 PCR。该酶含有中和抗体,因此允许进行热启动 PCR。特点 - 卓越的 DNA 扩增效率基于 TTx DNA 聚合酶优化了反应组成。TTx DNA 聚合酶比通用酶(如 Taq DNA 聚合酶和 Tth DNA 聚合酶)具有更高的延伸能力,TTx DNA 聚合酶即使在快速循环条件下也能实现高效的 PCR。 - 耐受 PCR 抑制剂该试剂盒可有效从粗样品(例如生物样本、食品、土壤提取物等)中进行扩增。从全血进行扩增时,无需纯化核酸,直接将其加入反应溶液中即可实现充分的扩增。 - dUTP 的利用 本试剂盒含有 dUTP 而不是 dTTP,用于 rTth/TTx (DNA) 的 2x 缓冲液。因此,通过添加尿嘧啶-N-糖基化酶 (UNG) 可以降低假阳性检测率。 *本试剂盒不提供 UNG。本试剂盒包含以下成分,可用于 250 次反应,总反应体积为 20 μL。所有试剂应储存在 -20°C 下。