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World File Search System电穿孔
在子宫内电穿孔中，多d缩的基因组 -
位于小鼠大脑皮层中的原生质星形胶质细胞（PRA）紧密并置，在成人阶段形成了明显连续的三维基质。到目前为止，没有免疫染色策略可以将它们单一单一的策略和在成熟动物和皮质生成过程中的形态进行分割。皮质PRA起源于背胸膜中的祖细胞，可以轻松地使用整合载体的子宫电穿孔来靶向。这里提出了一项方案，该方案将这些细胞用可抑制基因组融合的颜色（魔术）标记策略标记，该策略依赖于PiggyBac/ tol2换位和CRE/ LOX重组以随机表达明显的荧光蛋白（蓝色，氰基，黄色和红色），以特定于特异性的亚细胞界面。这种多色命运映射策略使在胶片发生开始之前与颜色标记物的结合可以标记附近的皮质祖细胞，并跟踪其后代，包括星形胶质细胞，从胚胎到各个细胞水平的成人阶段。半parse标记通过调整电穿孔矢量的浓度和颜色对比度的浓度，该颜色可通过多种基因组整合的颜色标记（魔术标记或MM）提供，使星体胶质细胞个性化并将其领土和复杂的形态单一单一单一单一单独化。是一个全面的实验工作流程，包括电穿孔程序的详细信息，通过共聚焦显微镜进行多通道图像堆栈以及计算机辅助的三维分割，这将使实验者能够评估单个PRA的体积和形态。总而言之，魔术标记的电穿孔提供了一种方便的方法，可以单独标记许多星形胶质细胞并在不同的发育阶段访问其解剖特征。该技术对于分析各种小鼠模型中的皮质星形胶质细胞形态特性将是有用的，而无需诉诸于具有转基因报告基因的复杂杂交。
海鞘胚胎体内转录试验的批量 DNA 电穿孔
请引用本文：Darras, S . (2021)。海鞘胚胎体内转录试验的批量 DNA 电穿孔。Bio-protocol 11(18): e4160。DOI：10.21769/BioProtoc.4160。
使用 CRISPR 试剂对人类 B 细胞系进行电穿孔
图 1. 最佳条件基于细胞存活率和靶向敲除率。根据上述方案，每次电穿孔用含有靶向人 CD19 的 crRNA 的 RNP（从针对不同 B 细胞系中细胞内和细胞外标志物的 30 多种 crRNA 筛选中选择）转染 100 万个 Ramos 细胞。（A）电穿孔后的第二天，用 2.5 μg/mL 碘化丙啶（BioLegend，产品目录号 421301）对部分细胞染色，并通过流式细胞术进行分析。（B）电穿孔五天后，用 2.5 μg/mL Alexa Fluor ® 647 抗人 CD19（BioLegend，产品目录号 302220，克隆 HIB19）加碘化丙啶对部分细胞染色，并通过流式细胞术进行分析。对照 = 未经电穿孔的细胞：RNP 混合物。数据由德国弗莱堡大学的 Marco Cavallari 博士提供。
Neon NxT 电穿孔系统用户指南（出版号 MAN0026677 B.0）
系统组件....................... ... 11 Neon™ NxT 单通道移液器工作站..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 单通道移液器..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 8 通道移液器工作站..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................13 Neon™ NxT 8 通道移液器工作站.................................................................................................................................................................................. .................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 15 Neon™ NxT 8 通道移液器.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 16 Neon™ NxT 套件.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. 16 Neon™ NxT 套件.................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................. ..................................................................................................................................................................................................................................................................................................18 Neon™ NxT 尖端..................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................................18 Neon™ NxT 1 通道管.................. ... ........................................................................................................................................................................................................................................................................19 Neon™ NxT 8 通道管.......................................................................................................................................................................................................................................................................19
细胞治疗应用的基因修饰
细胞 从 3 名健康人类供体的新鲜白细胞分离物中分离出的 PBMC 电穿孔期间的细胞浓度 5 x 10 7 个细胞/mL 有效载荷 CTS TrueCut Cas9 蛋白 120 µg/mL 定制 TRAC sgRNA 30 µg/mL 线性 CAR 供体 dsDNA 240 µg/mL 电穿孔方案 氖系统电穿孔方案 #24 1,600 V；10 毫秒；3 个脉冲 CTS 氙气系统电穿孔方案 2,300 V；3 毫秒；4 个脉冲
微秒电穿孔对宫颈癌细胞的孔径，活力和线粒体膜电位的影响
通过应用适当的振幅和参数的电场脉冲来提高膜渗透率。此方法称为“电抛液”或“电穿孔”（EP）。使用EP应用，在正常细胞条件下无法穿越膜的颗粒可以通过膜。强烈和短期的电脉冲导致细胞膜上的跨膜电位（TMP）上升（1-5）。当TMP达到临界值时，水孔的形成将允许通过膜进行分子过渡。尽管无法完全表达分子水平的精确机制，但在观察到最高TMP的膜区域已经证明了分子流量（6-8）。EP的有效性取决于应用的电脉冲参数（持续时间，强度脉冲形状和脉冲数）。基于这些参数的影响，EP可以是可逆的或不可逆的（9-11）。可逆EP在医学和生物技术领域中有许多应用，包括电疗疗法和电化学疗法（ECT）（5,12）。不可逆的EP用于肿瘤消融（由于其非热作用）和灭菌目的（11-13）。
电化学疗法和电穿孔在转移性黑色素瘤靶向治疗中的其他临床应用
1 肿瘤皮肤病学系-“Elias”急诊大学医院，“Carol Davila”医药大学，罗马尼亚布加勒斯特 020021；corina-ioana.cucu@drd.umfcd.ro (CIC)；calin.giurcaneanu@umfcd.ro (CG)；olguta.orzan@umfcd.ro (OAO)；cristina.popescu@drd.umfcd.ro (CB)；mara.mihai@umfcd.ro (MMM) 2 布加勒斯特大学生物学院微生物学和免疫学系，罗马尼亚布加勒斯特 030018； alina.m.holban@bio.unibuc.ro 3 布加勒斯特大学研究所，050657 布加勒斯特，罗马尼亚 4 布加勒斯特理工大学应用化学与材料科学学院氧化物材料与纳米材料科学与工程系，1-7 Polizu 街，011061 布加勒斯特，罗马尼亚；grumezescu@yahoo.com 5 卡罗尔达维拉医药大学生物物理与细胞生物技术系，020021 布加勒斯特，罗马尼亚；bogdan.matei@umfcd.ro 6 卡罗尔达维拉医药大学“Elias”急诊大学医院物理与康复医学系，020021 布加勒斯特，罗马尼亚； marius_drm1987@yahoo.com 7 “Titu Maiorescu”大学医学院，22 Dambrovnicului，031593 布加勒斯特，罗马尼亚； costin.caruntu@gmail.com * 通讯：liliana.popa@umfcd.ro；电话：+40-727-173-767
利用光合微生物进行合成生物学
图 2 用于对光合微生物进行遗传工程改造的常见遗传转化技术示意图。 (A) 对于绿藻 (衣藻) 和真气藻 (微绿球藻)：电穿孔和基因枪轰击可用于衣藻和微绿球藻的叶绿体靶向转化，而电穿孔或用玻璃珠涡旋可用于修饰衣藻的核基因组。细菌接合或农杆菌介导的转移也可用于将 DNA 引入这些细胞。 (B) 对于蓝藻：自然转化或接合可用于转移 DNA 以整合到染色体中或作为复制质粒。质粒也可以通过电穿孔转移。 (C) 对于硅藻：电穿孔和细菌接合是可用于将 DNA 引入硅藻的技术的例子。也可以使用农杆菌介导的转移或基因枪轰击
使用Cupriavidus Necator H16提供了提高非模型细菌电穿孔效率的路线图
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