XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search System电穿孔
荧光 Cas9 mRNA 用于富集 CRISPR-...
图 2：使用荧光 Cas9 mRNA 富集基因敲除 A. 对与 mKate2 Cas9 mRNA 和阳性对照 PPIB crRNA:tracrRNA 共电穿孔并根据 mKate2 荧光进行分选的 K-562 细胞群进行错配检测分析。B. 在次优和最优脂质转染条件下，EGFP Cas9 mRNA 分选的 U2OS 细胞群的 FACS 数据。C. 对 EGFP Cas9 mRNA 分选的 U2OS 细胞群进行错配检测分析
基因组编辑技术基础知识产权...
使您能够编辑基因组中的任何位置图 1. 使用 TALXcell 平台敲除 T 细胞受体 (TCR)。使用 Invitrogen ™ Neon ™ 转染系统通过电穿孔将 TALXcell mRNA 递送至原代人类 T 细胞。使用藻红蛋白 (PE) 偶联的 TCR 抗体通过流式细胞术测量 TCR 敲除效率。TALXcell 平台实现了 94.9% 的 TCR 敲除效率，这与在类似实验中使用 CRISPR-Cas9 观察到的效率相似。
细菌转化.pdf
DNA质粒的转化可能对克隆和蛋白质表达有益。在DNA克隆的初始步骤涉及质粒和基因插入物的限制消化，然后连接到质粒上的插入片段后，在细胞复制质粒的复制之前，仍然存在单链DNA尼克斯，必须由宿主细胞的DNA修复机器修复。细菌菌株（例如常见克隆菌株DH5α）已开发具有特定于克隆应用的特征。3已生成其他细菌菌株，例如BL21菌株，以促进靶基因在纯，完整，转化的质粒上受控的蛋白质表达。4这些细胞应变修饰的例子包括淘汰非必需的蛋白酶以最大化靶基因的蛋白质表达。请记住，可以在转化中使用许多不同类型的细菌菌株，所有这些菌株对不同的应用都有不同的修改。由于转化技术利用了细菌接受基因组DNA的能力，因此已经建立了特定的方法来最大程度地提高基因转移效率。通常，这些技术涉及某种形式的刺激，这些刺激使细菌外膜在短时间内更可渗透，从而可以摄取DNA。当前使用的两种最常见的转化技术是电击细菌菌株的化学胜任细菌菌株的热冲击（电击）。这些细胞的热休克在细胞膜中打开孔，允许进入质粒DNA。在前者中，用氯化钙处理细胞，以使细胞膜更可渗透，并促进质粒DNA附着在细菌细胞膜上。5电穿孔在细菌细胞壁中产生孔，并通过溶液中细胞的电脉冲进入质粒DNA。6平均而言，相对于热震动的转化，电穿孔在质粒摄取中产生较高的效率，并且不需要对细胞的任何化学处理。但是，电穿孔更昂贵，因为它使用电氧化器和专门的比色皿将电荷传递给溶液中的电池。必须根据可用资源和实验的所需转换效率做出方法的选择。转化后，细胞必须在营养丰富培养基中短暂生长（通常使用SOC培养基）中从冲击中恢复过来，然后可以将细胞粘贴在包含适当抗生素的LB琼脂平板上，以选择成功接受的细胞
简单而强大的电转染方案，可在人类 B 细胞中实现有效的异位基因表达和基因组编辑
1. Zhao N、Qi J、Zeng Z、Parekh P、Chang CC、Tung CH 等。使用简单的阳离子聚合物纳米复合物转染难以转染的淋巴瘤/白血病细胞。《Journal of Controlled Release》。2012；159(1)：104-10。2. Meacham JM、Durvasula K、Degertekin FL、Fedorov AG。细胞内递送的物理方法。《Journal of Laboratory Automation》。2014 年 2 月；19(1)：1-18。3. Kaestner L、Scholz A、Lipp P。转染和基因递送的概念和技术方面。《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》。2015 年 3 月；25(6)：1171-6。4. Mosier DE。“逆转录病毒载体的安全注意事项：简要回顾”简介。《Applied Biosafety》。2016；9(2)：68-75。 5. Glover DJ、Lipps HJ、Jans DA。《面向人类安全、非病毒治疗性基因表达》。《自然遗传学评论》。2005 年 4 月 10 日；6(4)：299-310。6. Kim TK、Eberwine JH。《哺乳动物细胞转染：现在和未来》。《分析和生物分析化学》。2010 年；397(8)：3173-8。7. Rols MP。《电通透化：一种将治疗分子递送到细胞中的物理方法》。《生物化学与生物物理学报》（BBA）-生物膜。2006 年 3 月；1758(3)：423-8。8. Jordan ET、Collins M、Terefe J、Ugozzoli L、Rubio T。《优化原代细胞和其他难以转染的细胞中的电穿孔条件》。《生物分子技术杂志》。2008 年； 9. Chicaybam L、Barcelos C、Peixoto B、Carneiro M、Limia CG、Redondo P 等人。一种用于哺乳动物细胞遗传改造的有效电穿孔方案。生物工程与生物技术前沿。2016；4：99。10. Machy P、Lewis F、McMillan L、Jonak ZL。通过电穿孔将基因从靶向脂质体转移到特定淋巴细胞。美国国家科学院院刊。2006；85(21)：8027-31。11. Maurisse R、De Semir D、Emamekhoo H、Bedayat B、Abdolmohammadi A、Parsi H 等人。将 DNA 转染到来自不同谱系的原代和转化哺乳动物细胞中的比较。BMC 生物技术。2010；10。 12. Gahn TA、Sugden B. 电穿孔显著、短暂抑制伯基特淋巴瘤细胞系中 Epstein-Barr 病毒潜伏膜蛋白基因的表达。J Virol。1993；67(11)：6379-86。13. Goldstein S、Fordis CM、Howard BH。电穿孔 G2/M 同步细胞并用丁酸钠处理后，转染效率提高，细胞存活率提高。Nucleic Acids Research。1989；17(10)：3959-71。14. Liew A、André FM、Lesueur LL、De Ménorval MA、O'Brien T、Mir LM。使用方波电脉冲对人类间充质干细胞进行可靠、高效、实用的电基因转移方法。人类基因治疗方法。2013 年 10 月；24(5)：289-97。 15. Kreiss P, Cameron B, Rangara R, Mailhe P, Aguerre-Charriol O, Airiau M 等。质粒 DNA 大小不影响脂质体的理化性质，但可调节基因转移效率。核酸研究。1999；27(19)：3792-8。16. Lesueur LL, Mir LM, André FM。克服体外原代细胞大质粒电转移的特殊毒性。分子疗法 - 核酸。2016；5：e291。17. Germini D、Saada YB、Tsfasman T、Osina K、Robin CC、Lomov N 等人。基于一步法 PCR 的检测方法用于评估基因组 DNA 编辑工具的效率和精度。分子疗法 - 方法与临床开发。2017 年 6 月；5（六月）：43-50。18. Georgakilas AG、Martin OA、Bonner WM。p21：双面基因组守护者。分子医学趋势。2017 年 4 月；23（4）：310-9。
通过PCR协议形式的基因分型
等位基因描述：使用优化的CRISPR CAS9 KI技术创建了鼠标R565Q模型，该技术利用核糖核蛋白（RNP）在存在带有所需KI的合成单链DNA修复模板的情况下创建了。zygotes被电穿孔，并通过同源性修复（HDR）筛选后后代，以确定正确靶向等位基因的存在。Ki核苷酸破坏了PAM位点（NGG），为4和5 bp，与裂解位点并设计为SSODN，以保护HDR衍生的基因座免受CAS9自动切割。关键后代。
小鼠糖尿病诱导 电穿孔介导的基因转移至啮齿动物胚胎组织IACUC标准程序生效日期：2024年5月描述：Elec
1。如果需要进一步的长期研究，糖尿病发生后两到五天（如血糖水平所示）会接受分泌胰岛素的颗粒。 2。 胰岛素颗粒释放约0.1 U /24小时> 30天，在IACUC啮齿动物手术指南之后，使用制造商的套管卡或手术切口将皮下植入皮下植入。 如果对植入物胰岛素颗粒进行切口，请按照与渗透泵植入IACUC标准程序相同的说明，但是您不会植入渗透泵，而是植入胰岛素颗粒。 遵循胰岛素颗粒制造商提供的给药指南。 根据制造商的不同，体重不到25克的小鼠可能只需要一个胰岛素颗粒。血糖不受正常范围内（70-150 mg/dl）内的较大小鼠可能会接受两个胰岛素颗粒。 3。 应在协议中描述替代性胰岛素治疗。糖尿病发生后两到五天（如血糖水平所示）会接受分泌胰岛素的颗粒。2。胰岛素颗粒释放约0.1 U /24小时> 30天，在IACUC啮齿动物手术指南之后，使用制造商的套管卡或手术切口将皮下植入皮下植入。如果对植入物胰岛素颗粒进行切口，请按照与渗透泵植入IACUC标准程序相同的说明，但是您不会植入渗透泵，而是植入胰岛素颗粒。遵循胰岛素颗粒制造商提供的给药指南。根据制造商的不同，体重不到25克的小鼠可能只需要一个胰岛素颗粒。血糖不受正常范围内（70-150 mg/dl）内的较大小鼠可能会接受两个胰岛素颗粒。3。应在协议中描述替代性胰岛素治疗。
Rotea™ 到氙气的工作流程优化
近年来，细胞和基因治疗的开发和应用取得了实质性进展。然而，大多数临床研究仍维持病毒载体系统的使用。与病毒载体相比，非病毒递送系统具有降低的细胞毒性、免疫原性和诱变性，是一种有吸引力的替代方案。电穿孔是非病毒方法之一，由于其使用简单、易于大规模生产且缺乏特异性免疫反应而特别适合。自体T细胞治疗过程具有许多接触点和非常劳动密集的工作流程，具有许多开放流程和复杂性。由于这些挑战，制造实践使基因疗法难以扩大规模并满足大量患者群体的治疗需求。赛默飞世尔科技一直致力于将整个流程整合并优化为一个工作流程，以更好地服务于细胞治疗行业。Gibco ™ CTS Rotea 系统是一种灵活/高效的系统，可以分离出具有高活力和回收率的细胞。新推出的 Gibco CTS Xenon 电穿孔系统在体外基因改造步骤中提供可靠的细胞疗法开发和制造，具有高细胞活力和效率。通过将 Rotea 和 Xenon 系统结合到一个工作流程中，这个封闭、模块化和半自动化的系统将有助于克服一些挑战，并最终更快地为患者提供治疗。此外，该系统可应用于不同类型的免疫/干细胞，这些细胞在各种适应症的治疗中呈现增加的趋势。
协议
协议＃：PI具有38年的尿素发育性大肠杆菌和其他BSL-2细菌物种的经验。过去，PI遵循了有关BSL-2生物安全预防措施的NIH指南。PI使用BSL-2细菌进行了38年的分子操作经验。重组质粒的构建用于创建大肠杆菌重组质粒，毒力因子基因将在4014 PSSC中的大肠杆菌菌株NU149或UTI89 DNA中放大PCR。每种PCR产物的设计将具有限制性核酸内切酶位点，将DNA侧翼的固定在PPP2-6，PCRISPPATHBRICK或PMMB91中。将使用适当的限制性核酸内切酶切割DNA，并与质粒DNA连接，还可以用适当的限制性核酸内切酶切割。连接的DNA将转化为大肠杆菌DH5α细胞，为PPP2-6和PCRISPPHATHBRICK质粒选择PMMB91质粒或氯霉素的氨苄西林抗性。含有正确的毒力因子基因的转化子将通过限制性核酸内切酶消化验证。验证后，将纯化的质粒DNA被电穿孔到大肠杆菌NU149或UTI89中。电穿孔比色杯可单一使用，并将其放入高压釜袋中。菌落将在含有氯霉素或氨苄青霉素的Luria琼脂板（LA）板上选择。使用后，板将被丢入高压釜袋中，用于使用高压灭菌。先前的研究表明，大肠杆菌可以自然对氯霉素和氨苄青霉素产生抗性。
热爱创新
PSC 和神经元细胞培养 Essential 8 培养基 500 mL A1517001 StemFlex 培养基 500 mL A3349401 StemScale PSC 悬浮培养基 1 L A4965001 B-27 Plus 添加剂 10 mL A3582801 Neurobasal Plus 培养基 500 mL A3582901 蛋白表达系统 Expi293 表达系统试剂盒 1 套 A14635 ExpiCHO 表达系统试剂盒 1 套 A29133 ExpiSf 表达系统入门试剂盒 1 套 A38841 Expi293 GnTI 表达系统试剂盒 1 套 A39250 Expi293 诱导表达系统 1 套 A39251 Expi293 诱导 GnTI 表达系统试剂盒 1 套 A39252 CTS 产品 CTS Essential 8 培养基 500 mL A2656101 CTS 氙气电穿孔系统1 个系统 A50301 CTS Rotea 逆流离心系统 1 个系统 A44769 CTS NK-Xpander 培养基 500 mL A5019001 CTS AIM V 培养基，不含酚红，不含抗生素 2 L A4672701 CTS AIM V SFM 1,000 mL 0870112DK CTS LV-MAX 慢病毒生产系统 1 套 A35684 CTS OpTmizer Pro SFM 1 L A4966101 CTS 病毒生产培养基 1 L A5144001 CTS 病毒生产细胞 2.0 1.5 mL A48400 CTS AAV-MAX 转染试剂盒 用于 1 L 生产 A5427701 CTS AAV-MAX 裂解缓冲液 100 mL A5152101 转染产品 Lipofectamine 3000 转染试剂0.1 毫升 L3000001 Neon NxT 电穿孔系统入门包 1 套件 NEON1SK 根据您的需求在 thermofisher.com/transfectionselect 查找转染产品