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World File Search System疟原虫
临床上无症状的间日疟原虫感染。......
50 毫升毛细血管血样（n = 295）在现场保存在液氮中，随后储存在 -20°C 下，用于在自动化 QIASymphony 平台（Qiagen）上使用 QIAsymphony DNA Investigator 试剂盒（德国希尔登 Qiagen）提取寄生虫 DNA。最终 DNA 洗脱体积为 100 µL。使用基于 SYBR Green 的属特异性定量 PCR 进行疟疾分子筛查。引物对（PCBF，5'-ATG CTT TAT TAT GGA TTG GAT GTC-3' 和 PCBR，5'-CAG ACC GTA AGG TTA TAA TTA TGT-3'）靶向人类感染疟原虫的细胞色素b（cytb）基因的保守序列（21），检测阈值为每微升 0.2 个扩增子拷贝（相当于每毫升约 4 个疟原虫，假设每个单核血液阶段疟原虫平均有 50 个线粒体基因组拷贝）。20 微升反应体系含有 5 微升 DNA 溶液、7.5 微升
CRISPR/Cas9 和疟原虫的基因筛选
引起疟疾的疟原虫每个基因组约 30 Mb，编码约 5000 个基因，但大多数基因的功能仍不清楚。这是因为从序列同源性中获取的功能注释很少，而且与许多模型生物相比，其遗传可处理性较低。近年来，技术突破使得在疟原虫中进行正向和反向基因组规模筛选成为可能。此外，成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 9 (CRISPR/Cas9) 技术的应用大大提高了单基因水平的基因编辑效率。在这里，我们回顾了疟原虫基因筛选的出现，以分析寄生虫基因在基因组规模上的功能及其对理解寄生虫生物学的影响。 CRISPR/Cas9 筛选彻底改变了人类和模型生物的研究，但由于需要更复杂的 CRISPR/Cas9 基因靶向载体库，因此尚未在疟疾寄生虫中实施。因此，我们向读者介绍了相关顶复门弓形虫中基于 CRISPR 的筛选，并讨论了如何调整这些方法来开发基于 CRISPR/Cas9 的疟疾寄生虫基因组规模遗传筛选。此外，由于超过一半的疟原虫基因是正常无性血液阶段繁殖所必需的，并且无法使用敲除方法进行靶向，我们讨论了如何使用 CRISPR/Cas9 来扩大条件基因敲除方法，以系统地为必需基因分配功能。
抑制疟原虫知识分析入侵...
已知疟原虫分泌的蛋白质具有改变的血小板蛋白重复（SPATR），在疟疾寄生虫入侵宿主红细胞中起着重要作用。该蛋白具有免疫原性，被认为是针对疟疾寄生虫感染的潜在疫苗候选者之一。到目前为止，仅在P. knowlesi spatr（PKSPATR）上进行了少数免疫学研究，这些研究都没有研究该蛋白质的免疫保护性能。在本研究中，在体外蛋白石侵袭抑制测定中评估了抗PKSPATR抗体抑制人类红细胞侵袭的能力。从用重组PKSPATR免疫的兔子的血清中收集抗体。由梅罗洛氏浸润抑制测定法结果显示，浓度依赖性方式（浓度范围：0.375 - 3.00 mg/ml）的显着抗体浸润抑制活性，抑制率范围为20％至32％。未来的研究，例如抗PKSPATR抗体抑制对人肝细胞侵袭的抑制作用，需要进行评估PKSPATR作为Knowlesi疟疾疫苗候选者的潜力。
疟疾：按蚊唾液对疟原虫感染的影响
疟疾是由按蚊传播的疟原虫引起的。当受感染的雌蚊吸食脊椎动物宿主的血液时，疟原虫子孢子会随唾液释放。沉积在皮肤中的子孢子必须进入血管才能开始前往肝脏的旅程。从蚊子体内移出后，子孢子会与皮肤中许多媒介唾液成分相关或接近。最近的研究阐明了按蚊唾液及其成分如何影响皮肤疟原虫感染早期的宿主-病原体相互作用。在这里，我们讨论了按蚊唾液成分如何调节局部宿主反应并影响疟原虫的感染性。我们假设针对蚊子唾液蛋白的治疗策略可以在控制疟疾和其他媒介传播疾病方面发挥作用。
靶向疟原虫作为疟疾治疗的潜在靶标
疟疾是一种寄生疾病，代表了全球公共卫生问题。质子属的原生动物负责引起人类疟疾。 疟原虫具有复杂的生命周期，需要翻译后的修饰（PTMS）在时间和空间上控制细胞活性，并调节关键蛋白质的水平和细胞机制，以维持效率高的感染和免疫逃避。 sumoylation是由小型泛素样蛋白与蛋白质底物上赖氨酸残基的共价连接形成的PTM。 该PTM是可逆的，是由三种酶的顺序作用触发的：E1激活，E2-共轭和E3连接酶。 在另一端，酵母中的泛素样蛋白特异性蛋白酶和哺乳动物中的哨兵特异性蛋白酶负责处理SUMO肽和对sumoypy的部分偶联。 进一步的研究对于理解疟原虫中SUMO的分子机制和细胞功能是必要的。 抗药性疟疾寄生虫的出现促使通过新颖的作用机理发现了新靶标和抗疟药。 在这种情况下，由疟疾寄生虫中的Sumoylation调节的保守生物学过程，例如基因表达调节，氧化应激反应，泛素化和蛋白酶体途径，建议PF SUMO作为一种新的潜在药物靶标。负责引起人类疟疾。疟原虫具有复杂的生命周期，需要翻译后的修饰（PTMS）在时间和空间上控制细胞活性，并调节关键蛋白质的水平和细胞机制，以维持效率高的感染和免疫逃避。sumoylation是由小型泛素样蛋白与蛋白质底物上赖氨酸残基的共价连接形成的PTM。该PTM是可逆的，是由三种酶的顺序作用触发的：E1激活，E2-共轭和E3连接酶。在另一端，酵母中的泛素样蛋白特异性蛋白酶和哺乳动物中的哨兵特异性蛋白酶负责处理SUMO肽和对sumoypy的部分偶联。进一步的研究对于理解疟原虫中SUMO的分子机制和细胞功能是必要的。抗药性疟疾寄生虫的出现促使通过新颖的作用机理发现了新靶标和抗疟药。在这种情况下，由疟疾寄生虫中的Sumoylation调节的保守生物学过程，例如基因表达调节，氧化应激反应，泛素化和蛋白酶体途径，建议PF SUMO作为一种新的潜在药物靶标。这种微型审查的重点是当前对疟原虫协调的多步生命周期作用机理的理解，并将它们作为寄生虫特异性抑制剂的发展和对疟疾疾病的治疗干预的有吸引力的新靶蛋白进行了讨论。
比较3D恶性疟原虫配子细胞的超微结构
尽管疟疾人寄生虫具有巨大的重要性，但其超微结构的一些基本特征仍然晦涩难懂。在这里，我们采用高分辨率体积电子显微镜检查和比较了恶性疟原虫的可传染性男性和女性性血统的超微结构，以及更深入研究的无性血液阶段，重新审视了3D中先前描述的现象。这样做，我们通过示例在配子细胞中表现出多个线粒体的存在来挑战单个线粒体的广泛接受概念。我们还提供了配子细胞特异性细胞抑制剂或细胞口的证据。此外，我们生成了寄生虫内质网（ER）和高尔基体设备的第一个3D重建，以及在感染的红细胞中诱导的配子细胞诱导的外质结构。评估细胞器之间的互连性，我们发现了细胞核，线粒体和apicoplast之间的频繁结构作用。我们提供了证据，表明ER是与众多细胞器和配子细胞的三叶骨膜的混杂相互作用。这些体积电子显微镜资源的公共可用性将有助于其他具有不同研究问题和专业知识的其他人的重新介入。总的来说，我们以纳米尺度重建了恶性疟原虫配子细胞的3D超微结构，并阐明了这些致命的寄生虫的独特细胞器生物学。
疟原虫激酶组的更新和阐明
疟疾是一种由疟原虫引起的热带疾病，通过受感染的按蚊叮咬传播。蛋白激酶 (PK) 在疟疾病原体的生命周期中起着关键作用，使这些蛋白质成为抗疟药物研发活动的有吸引力的靶标。作为了解寄生虫信号传导功能的努力的一部分，我们报告了对八种疟原虫 PK 的生物信息学流程分析的结果。到目前为止，还没有进行过 P. malariae 和 P. ovale 激酶组组装。我们对预测的激酶进行了分类、整理和注释，以更新迄今为止发表的 P. falciparum、P. vivax、P. yoelii、P. berghei、P. chabaudi 和 P. knowlesi 激酶组，并首次报告了 P. malariae 和 P. ovale 的激酶组。总体而言，在所有疟原虫属激酶组中鉴定出 76 至 97 种 PK。大多数激酶被分配到九个主要激酶组中的七个：AGC、CAMK、CMGC、CK1、STE、TKL、OTHER；以及疟原虫特异性组 FIKK。约 30% 的激酶已深入分类为组、科和亚科级别，只有约 10% 仍未分类。此外，更新和比较间日疟原虫和恶性疟原虫的激酶组可以优先选择激酶作为潜在的药物靶标，可用于探索发现抗疟新药。通过这种综合方法，我们选出了 37 种蛋白激酶作为潜在靶点，并鉴定出对无性疟原虫 (3D7 和 Dd2 菌株) 阶段具有中等体外活性的试验化合物，这些化合物可作为未来寻找有效抗疟药物的起点。2022 年由 Elsevier BV 代表计算和结构生物技术研究网络出版。这是一篇根据 CC BY-NC-ND 许可协议开放获取的文章 ( http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ )。
研究恶性疟原虫蛋白质功能的系统
疟疾是由疟原虫感染引起的，仍然是全球关注的重大健康问题。几十年来，遗传难治性和有限的工具阻碍了我们研究恶性疟原虫（与最严重的疟疾病例相关的寄生虫）中必需蛋白质和途径的能力。然而，近年来，我们在基因操纵恶性疟原虫和有条件控制蛋白质表达/功能的能力方面取得了重大飞跃。恶性疟原虫中使用的条件敲低系统针对中心法则的所有 3 个组成部分，使研究人员能够有条件地控制基因表达、翻译和蛋白质功能。在这里，我们回顾了一些已调整或开发用于恶性疟原虫的常见敲低系统。使用条件敲低方法所做的大部分工作是在无性生殖的血液阶段寄生虫中进行的，但我们也会重点介绍它们在生命周期其他部分的用途，并讨论在红细胞内阶段之外应用这些系统的新方法。随着这些工具的使用，该领域对寄生虫生物学的了解不断增加，并且正在发现抗疟药物开发的有希望的新途径。
