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World File Search System疾病基因
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肠神经系统（ENS）提供了胃肠道（GI）的内在神经，该神经（GI）具有数百万个神经元和多种神经元亚型和神经胶质细胞的内在神经。ENS调节基本的肠道功能，例如运动，营养摄取和免疫反应，但有关控制ENS神经元规范和分化的基因的基本信息仍然很大程度上未知。ENS神经元数量和组成的缺陷会导致肠道功能障碍，使GI症状具有使人衰弱的症状，并且与例如Hirschsprung病，炎症性肠道疾病，自闭症谱系障碍和神经退行性疾病，例如帕金森氏病。大多数ENS疾病的遗传基础仍然未知。最近的转录组分析已经确定了许多用于调节ENS神经发生的候选基因。然而，对这些候选基因的功能评估显着滞后，因为它们在ENS神经发生中的作用进行了实验性测试是耗时且昂贵的。在这里，我们在斑马鱼中开发了快速，可扩展的F 0 CRISPR基因组编辑筛选，以确定哪些候选基因控制ENS中的神经元发育。概念验证实验针对已知的ENS调节剂SOX10和RET表观稳定突变体具有高效率和精确度，表明我们的方法可靠地使用F 0指导RNA注射的幼虫来识别ENS神经发生（F 0 Crispants）。然后，我们评估10个转录因子基因在调节ENS神经发生和功能方面的作用。靶向2-3个候选基因的引导RNA的池将Cas9蛋白共同注入到一个单细胞阶段PHOX2BB中：GFP转基因斑马鱼胚胎，以直接评估ENS神经元数量的定性变化与6天旧F 0旧F 0 Crispants相比。然后对表现出降低的ENS神经元数的清晰池的靶基因进行单独测试，以鉴定负责任的基因。我们确定了五个转录因子，这些转录因子显示ENS神经元的降低，表明对肠祖细胞细胞分化为ENS神经元。添加了一个简单有效的测试以进一步评估肠道变化，我们发现两个转录因子基因的功能丧失减少了通过肠道标记的荧光标记食物的肠道转运。总而言之，我们的新颖，多步骤但直接的CRISPR筛选方法在斑马鱼中可以测试ENS发育和疾病基因功能的遗传基础，这些遗传基础将促进对转录组，全基因组关联或其他ENS-OMICS研究而产生的流形候选基因的高通量评估。这种体内清晰的屏幕将有助于更好地理解脊椎动物中的ENS神经元发展调节，以及在ENS疾病中出现的问题。
使用CRISPR Prime编辑
使用CRISPR Prime编辑Steven Erwood 1,2，Teija M.I.的饱和变体解释。bily 2，†，Jason Lequyer 1,3，†，Joyce Yan 2，Nitya Gulati 1,2，Reid A.Brewer 2,4，Liangchi Zhou 2，Laurence Pelletier 1,3，Evgueni A. Ivakine 2,4，*，Ronald D. Cohn 1,2,4,5 1。加拿大多伦多多伦多大学分子遗传学系2.遗传学和基因组生物学计划，加拿大安大略省多伦多的病儿童研究所医院3.Lunenfeld-Tanenbaum研究所，加拿大安大略省多伦多山医院4.加拿大多伦多多伦多大学生理学系5。多伦多大学儿科和生病儿童医院，加拿大多伦多的医院†这些作者在过去十年中向Zhenya.ivakine@sickkids.ca摘要贡献了同样的贡献，在过去的十年中，下一代测序在临床实践中已广泛实施。 然而，由于经常确定具有不确定意义的遗传变异（VU），因此对这种变体的缩放功能解释的需求变得越来越明显。 一种解决此问题的方法是饱和基因组编辑（SGE），它允许对单核苷酸变体进行缩放的多重功能评估。 但是，SGE的当前应用依赖于同源指导的维修（HDR）引入感兴趣的变体，这受到较低的编辑效率和低产品纯度的限制。 此外，我们设计了一种基因组编辑策略，该策略允许基因基因座的单倍体化，该策略允许几乎任何细胞类型中的孤立变体解释。多伦多大学儿科和生病儿童医院，加拿大多伦多的医院†这些作者在过去十年中向Zhenya.ivakine@sickkids.ca摘要贡献了同样的贡献，在过去的十年中，下一代测序在临床实践中已广泛实施。然而，由于经常确定具有不确定意义的遗传变异（VU），因此对这种变体的缩放功能解释的需求变得越来越明显。一种解决此问题的方法是饱和基因组编辑（SGE），它允许对单核苷酸变体进行缩放的多重功能评估。但是，SGE的当前应用依赖于同源指导的维修（HDR）引入感兴趣的变体，这受到较低的编辑效率和低产品纯度的限制。此外，我们设计了一种基因组编辑策略，该策略允许基因基因座的单倍体化，该策略允许几乎任何细胞类型中的孤立变体解释。在这里，我们对SGE进行了改编的CRISPR质量编辑，并证明了其在理解溶酶体储存障碍尼曼 - 佩克病C1（NPC）的NPC1基因中变体的功能意义的实用性。通过将饱和素编辑（SPE）与临床相关的测定相结合，我们在NPC1单倍体HEK293T细胞中的功能评分和解释了256种变体。为了进一步证明该策略的适用性，我们使用SPE和细胞模型单倍体化在BRCA2基因中的功能上为465个变体分数。我们预计我们的工作将可以翻译成具有适当的细胞测定法的任何基因，从而可以更快，准确地诊断，改善遗传咨询，并最终确切地精确的患者护理。引言精度或个性化药物必然是基于对人群中发现的遗传变异的强烈理解。因此，人类疾病基因中发现的VU的优势是实现
医疗补助按服务收费 (FFS) 费用表，不含修饰语
0001A 肌肉注射严重急性呼吸道综合征冠状病毒 (SARS) 进行免疫接种 $18.59 0001U 红细胞分型 $0.00 0002A 肌肉注射严重急性呼吸道综合征冠状病毒 (SARS) 进行免疫接种 $30.68 0002U 测量尿液中的物质以预测大肠息肉的可能性 $0.00 0003A 肌肉注射单个严重急性呼吸道综合征冠状病毒 (SARS) $0.00 0003U 测量血清中与卵巢癌相关的蛋白质 $570.00 0004A 肌肉注射单一严重急性呼吸道综合征冠状病毒的管理 $43.68 0004M 脊柱侧弯，使用 SALI 对 53 个单核苷酸多态性 (SNPS) 进行 DNA 分析 $0.00 0005U 测试用于检测尿液中与前列腺癌相关的基因 $456.00 0006M 肿瘤学 (肝脏)，利用新鲜肝细胞检测 161 个基因的 mRNA 表达水平 $0.00 0006U 尿液中的处方药监测 $0.00 0007M 肿瘤学 (胃肠道神经内分泌肿瘤)，实时 PCR 表达肛门 $0.00 0007U 检测尿液中是否存在药物 $0.00 0008M 肿瘤学（乳腺），使用杂交捕获法对福尔马林-F 上的 58 个基因进行 mRNA 分析 $0.00 0008U 检测与抗生素耐药性相关的幽门螺杆菌基因 $0.00 0009U 乳腺肿瘤组织的基因分析 $0.00 00100 唾液腺手术麻醉 $22.80 00102 唇缺损整形修复麻醉 $22.80 00103 眼睑重建手术麻醉（例如，眼睑成形术、眼睑下垂 $22.80 00104 电击疗法麻醉 $22.80 0010U 细菌菌株分型 $0.00 0011A 严重急性呼吸道感染肌肉注射免疫 $18.59 0011U 口服液处方药监测 $0.00 00120 外耳、中耳和内耳其他手术麻醉 $22.80 00124 使用内窥镜检查耳朵的麻醉 $22.80 00126 外耳、中耳和内耳手术麻醉包括活检； $22.80 0012A 通过肌肉注射严重急性呼吸道综合征冠状病毒进行免疫接种 $30.68 0012M 肿瘤学（尿路上皮），mRNA，通过实时定量基因表达分析 $456.00 0012U 种系疾病基因分析 $0.00 0013A 肌肉注射单一严重急性呼吸道综合征冠状病毒 $30.68 0013M 肿瘤学（尿路上皮），mRNA，通过实时定量基因表达分析 $456.00 0013U 实体器官肿瘤组织的基因分析$570.00 00140 其他眼部手术麻醉 $22.80 00142 眼部手术麻醉；晶状体手术 $22.80 00144 眼部手术麻醉；角膜移植 $22.80 00145 眼部手术麻醉；玻璃体视网膜手术 $22.80 00147 眼部手术麻醉；虹膜切除术 $22.80 00148 使用内窥镜检查眼内麻醉 $22.80 0014U 用于检测与血液和淋巴系统相关的基因异常的测试 C $0.00 00160 对鼻子和鼻窦的其他程序的麻醉 $22。80 00162 鼻腔和鼻窦大范围手术麻醉 $22.80 00164 鼻腔和鼻窦软组织活检麻醉 $22.80 0016U 血液和淋巴系统相关基因异常检测测试 C $0.00 00170 其他口腔手术麻醉 $22.80 00172 口腔内手术麻醉，包括活检；腭裂修复 $22.80 00174 口腔内手术麻醉，包括活检；切除术 $22.80 00176 口腔大范围手术麻醉 $22.80 0017U 血液和淋巴系统 C 相关基因异常检测测试 $0.00 0018U 肿瘤学（甲状腺），通过 RT-PCR 对 10 个微小 RNA 序列进行微小 RNA 分析，实用 $0.00 00190 面骨或头骨其他手术麻醉 $22.80 00192 面骨或头骨大范围手术麻醉 $22.80 0019U 肿瘤学，RNA，通过全转录组测序进行基因表达，福尔马林固定 $0.00