基于基因组结构和复制策略的相似性,RNA病毒如今可分为“超类群”,通常涵盖动物病毒和植物病毒(Goldbach & Wellink,1988;Strauss & Strauss,1988)。这一概念也越来越多地体现在病毒分类学中;尤其是引入了分类单元“目”,将很可能拥有共同祖先的病毒科合并在一起(Mayo & Pringle,1998)。对于正链、有包膜的冠状病毒和动脉炎病毒(最近被统一归入巢病毒目,Cavanagh,1997),基于相似的多顺反子基因组结构、共同的转录和(后)翻译策略以及一系列同源复制酶结构域的保守性(den Boon et al.,1991),它们之间建立了密切的系统发育关系。因此,有可能勾勒出nidovirus生命周期的共同轮廓(图1)(详见Lai & Cavanagh,1997;de Vries et al.,1997;Snijder & Meulenberg,1998)。然而,在某些方面,这两个病毒家族彼此之间存在显著差异。例如,最大的冠状病毒基因组,鼠肝炎病毒(MHV),其基因组为31±5kb,约为最小动脉炎病毒基因组,即马动脉炎病毒(EAV)12±7kb RNA的两倍半。此外,这两个病毒家族的结构蛋白没有明显的相关性,导致病毒体的大小和结构存在重要差异(den Boon et al.,1991;Snijder & Spaan,1995;de Vries et al.,1997)。大多数主要的动物正链RNA病毒群体要么产生单个多聚蛋白,要么产生单独的非结构和结构前体多肽,这些多肽随后被病毒编码或宿主编码的蛋白酶裂解,产生功能性亚基(Dougherty & Semler, 1993)。相比之下,在基因组3′-近端区域编码的nido病毒结构蛋白,
引言严重急性呼吸综合征冠状病毒 2 (SARS-CoV-2) 是一种人畜共患病原体,属于 Betacoronavirus 家族,于 2019 年 12 月在中国武汉出现。SARS-CoV-2 迅速席卷全球,引发冠状病毒病 (COVID-19) 大流行,感染超过 2240 万人,导致至少 789,455 人死亡(约翰霍普金斯大学,2020 年 8 月 20 日访问)1。在七种导致人类呼吸道疾病的冠状病毒中,有四种仅引起轻度感染(229E、NL63、OC43 和 HKU1),三种是高致病性(SARS-CoV、MERS 和 SARS-CoV-2)。SARS-CoV-2 最有可能起源于蝙蝠,并通过中间动物宿主传播给人类,就像其他高致病性人类冠状病毒 MERS 和 SARS-CoV 2 一样。 SARS-CoV-2 高传染性和致病性的分子决定因素仍是假设的,但刺突蛋白中获得弗林蛋白酶切割位点以及受体结合域发生突变使得刺突蛋白能够与人血管紧张素转换酶 (ACE2) 结合似乎是关键/重要因素 3 – 5 。这些以及其他可能存在的分子特征使得 SARS-CoV-2 成为三种致病冠状病毒中传播性最强的。与 SARS 不同,在有效疫苗问世之前,SARS-CoV-2 可能不会被消灭甚至无法控制。已发现 ACE2 受体介导 SARS-CoV-2 以及其他冠状病毒(包括 NL63 和 SARS-CoV)进入细胞,SARS-CoV-2 与后者有 76% 的氨基酸同一性 5 。表达 ACE2 的细胞易受 SARS-CoV-2 刺突 (S) 糖蛋白的影响,该糖蛋白从 SARS-CoV-2 病毒体膜表面伸出并充当配体 2 。在人类中,中和抗体和/或 T 细胞免疫反应是针对几种 SARS-CoV-2 蛋白产生的,但主要针对 S 蛋白,这表明 S 蛋白特异性免疫反应在保护中起着重要作用 6 。因此,目前大多数疫苗方法都使用 SARS-CoV S 蛋白或其部分作为疫苗免疫原 7 。
纤维抗原抑制5型腺病毒的增殖。病毒学杂志1:747-757。2. Ginsberg HS, Bello LJ, Levine A, 1967. 腺病毒感染细胞中宿主大分子生物合成的控制。在《病毒分子生物学》中,(编辑)J. Colter 和 W. Paranchych,Academic Press,第 577 页。3. Levine AJ, Ginsberg HS, 1968. 腺病毒结构蛋白在停止宿主细胞生物合成功能中的作用。病毒学杂志2:430-439。4. Levine AJ, Sinsheimer RL, 1968. 噬菌体 øX174 感染的过程。XIX. 从 14ul5X174 感染细胞中分离和鉴定氯霉素抗性蛋白。 J. Mol. Biol. 32:567-578。5. Levine AJ, Sinsheimer RL, 1969. 感染噬菌体 øX174 的过程。XXV. 用噬菌体 øX174 突变体研究子代复制型 DNA 合成受阻。J. Mol. Biol. 39:619。6. Levine AJ, Sinsheimer RL, 1969. 感染噬菌体 øX174 的过程。XXVII. 在 øX174 感染的细胞中合成病毒特异性氯霉素抗性蛋白。J. Mol. Biol. 39:655。7. Levine AJ, Sinsheimer, RL, 1969. 从 lambda 感染的细胞中分离氯霉素抗性蛋白。Proc. Natl. Acad. Sci. USA 62:1226-1228。8. Levine AJ、Kang HS、Billheimer FE,1970。SV40 感染细胞中的 DNA 复制。I. 复制 SV40 DNA 的分析。J. Mol. Biol. 50:549-568。9. Levine AJ、Teresky AK,1970,SV40 感染细胞中的 DNA 复制。II. SV40 假病毒体的检测和表征。J. Virol. 5:451-457。10. Ritzi E、Levine, AJ,1970。SV40 感染细胞中的 DNA 复制。III. 三种不同猴肾细胞系中 SV40 裂解感染的比较。J. Virol. 5:686-692。 11. Kang HS、Eshback TB、White DA、Levine AJ,1971. SV40 感染的 DNA 复制
* 通讯地址:电话:919-515-5729;电子邮件:jmalonso@ncsu.edu 摘要 病毒载体可以成为表达重组蛋白以及递送基因编辑机制的有用工具。尽管它们很有用,但这些工具的开发和后续优化通常是一个困难而繁琐的过程。因此,尽管已经做了大量工作来创建用于基因编辑和蛋白质表达的有用病毒载体,但对于如何最好地设计这些载体以用于特定应用,人们缺乏了解。例如,通常不清楚加入异源启动子序列或不同的病毒成分是否会改善货物表达或复制子积累。为了解决其中一些障碍,我们设计了一种基于双生病毒 - 甜菜卷叶病毒 (BCTV) 的 GoldenBraid (GB) 兼容病毒载体系统。该系统允许对各种报告构建体进行简单的模块化克隆。利用这种模块化克隆策略,我们比较了各种替代病毒载体架构。有趣的是,天然 BCTV 启动子的表现优于组成型 35S 启动子,而 BCTV 病毒体正义基因的去除则促进了报告基因的表达。有趣的是,这些修改对总复制子积累没有影响。这些结果表明了新的模块化基于 BCTV 的病毒载体在蛋白质表达和基因靶向应用方面的实用性,同时也揭示了可能为未来基于双生病毒的病毒载体架构提供信息的设计原则。我们预计,这种新模块化系统的推出将引发基于复制子的策略在植物蛋白质表达和基因编辑实验中的广泛应用。关键词:病毒载体、基因编辑、甜菜曲顶病毒、双生病毒、GoldenBraid、瞬时表达。简介病毒载体已被证明可用于各种生物技术应用,例如基因组编辑和蛋白质表达。基于双生病毒的病毒载体已用于递送基因组编辑酶,例如锌指核酸酶 (ZFN) 和 Cas9,以及用于同源定向修复 (HDR) 的修复模板 (RT) (Butler 等人,2016 年;Wang 等人,2017 年;Yu 等人,2020 年;Gil-Humanes 等人,2017 年;Dahan-Meir 等人,2018 年,Eini 等人,2022 年)。
噬菌体,侵入细菌细胞的病毒是生物圈中最丰富的生物。噬菌体包括具有双链DNA(最常见),单链DNA,单链RNA和双链RNA(最不常见)的病毒。大多数病毒体(96%)是尾巴的;其他类型是立方体,丝状或多态性。噬菌体基因组是由于高频率的水平遗传交换和重组而多样化和普遍的镶嵌性。噬菌体可能具有裂解或裂解生命周期。它们附着在特定细菌上,并通过酶内olysins和holins杀死,而不会因宿主特异性而影响共生微生物。有一个恒定的“进化武器竞赛”,导致竞争性细菌噬菌体的进化。正在开发许多多种多样和复杂的细菌防御机制,以抑制噬菌体生命周期的各个阶段。同时,噬菌体也发展为克服这些细菌防御。正在开发基于噬菌体的治疗方法,其中单噬菌体,噬菌体鸡尾酒,噬菌体衍生的酶,噬菌体与抗生素结合使用,而转基因噬菌体可能有用。这对于用多药耐药(MDR)病原体以及去除生物膜的感染治疗感染可能很有用。新生儿(2023):10.5005/jp-journals-11002-0078Keywords: Abi-associated enzymes, Abortive infection, Adsorption block, Bacteriophage, Bacteriophage exclusion system, Biofilms, Bradley's classification, Carjivirus communis , Caudovirales, Chromosomal islands, Contractile tails, Cosmids, CrAssphage, CRISPER-cas bacterial immune system, Darwinian principles, Double-stranded DNA, Destruction of phage DNA after injection, Diversity-generating retroelements, dsDNA, Endolysin, Enterobacteria P4-like prophages, ESKAPE, Evolutionary arms race, Glucosyl-hydroxymethylcytosine, Helper proteins, Human phageome, Hydroxymethylcytosine, Infant, Lactococcus phage c2, Lit activator gol peptide, Long non-contractile tails, Lytic cycle, Lysogenic cycle, Metagenomics, Mosaicism, MS2 coat, Mycoplasma phage P1, Myoviridae, Neonate, Newborn, P2-like prophages, Pasteurella phage F108, Penetration block, Phage display, Phagemid, Phage coevolution, Phage cocktail, Phage terminase small subunit, Phage anti-restriction-induced system, Phage ecology, Podoviridae, Polyphage, Prophage, Prokaryote viruses, Prokaryotic argonautes, Pseudolysogenic cycle, Receptor, Receptor-binding proteins, Restriction-modification systems, RexAB system, Retrons, Short tails, Siphoviridae, ssRNA, Temperate phage, Toxin-antitoxin systems, Transduction,有毒的噬菌体。
埃博拉病毒是人类和灵长类动物中严重致死性病毒疾病的病毒剂。它们长,丝状,包裹和非细分病毒,属于家族的RNA基因组,属于Fileviridae。埃博拉病毒属由六种不同的物种组成:Bundibugyo,Bombali,Tai Forest(以前是科特迪瓦),雷斯顿,苏丹和扎伊尔,尽管雷斯顿和孟加拉埃博拉病毒并未被认为是人们的疾病。它们是管状病毒体,通常直径为80 nm,长度为800 nm。基因组长约19 kb,由7个线性排列的基因组成,以3'-np-vp35-vp35-vp40-gp-vp30-vp23-vp24-l组成。Zaire Ebolavirus的第一次记录爆发发生在Zaire,1976年。同年,苏丹埃博拉病毒被发现,尽管最初被认为与扎伊尔物种相同。埃博拉病毒主要通过与感染动物的血液,分泌物,器官或其他体液的血液,分泌物,器官或其他体液传播给人类。然后,它通过与感染者的血液或分泌物直接接触,通过人类对人类的传播传播到社区。最初,它通常是在受感染者的家庭和朋友之间传播的。卫生保健工人在治疗埃博拉病人时经常被感染,并且在医院环境中的暴发很常见。通过感染精液传播可在临床恢复后长达七个星期发生。被感染个体的分解物体可以在死亡后3至4天保持感染。埃博拉血血热的孵育期通常为5至20天。感染的临床体征包括发烧,头痛,喉咙痛,关节和肌肉酸痛,腹泻和无力。这是一种高温出血性疾病,病例竞争率在25%至90%之间。在严重的出血热病例中,血管可能会损害血管以及大量的内部和外部出血或出血。Zaire Ebolavirus在所有埃博拉病毒中的病例型率最高。在某些流行病中最多可达90%,在27年内,平均病例死亡率约为83%。扎伊尔埃博拉病毒的暴发比其他任何物种都多。近年来,已经开发出治疗疗法和疫苗,可能会提高患者的存活率。埃博拉疫情继续定期出现;在2022年,宣布了6例扎伊尔埃博拉病毒感染,死亡率为100%。在2022年还报道了164例苏丹埃博拉病毒,死亡率为34%。
目标本文档旨在作为对英国移植专业人员的实体器官移植(SOT)中人类疱疹病毒8(HHV-8)生物学生物学的简明更新。为已故捐助者引入HHV-8筛查计划已经在社区内有必要为专家意见告知的临床医生提供共识文件,同时承认没有足够的证据来制定准则。这是一项共识的陈述,旨在补充但不取代本地和地区专家临床建议。人类疱疹病毒8(HHV-8)HHV-8是一种大型的双链DNA病毒,在1994年在卡波西肉瘤中被发现为病因(1)。像其他疱疹病毒一样,HHV-8经历裂解和潜在阶段,建立了终身感染,即一旦建立了感染,它就会生命。在裂解阶段,宿主细胞的复制和裂解大大增加。激活病毒编码的“裂解开关”基因RTA导致HHV-8进入裂解阶段,其中表达了病毒编码的基因(至少85个基因和miRNA),并将宿主细胞机械重新定向到后代病毒体的制造和组装。裂解相促进了新细胞的感染和新宿主的向前感染。HHV-8被认为主要感染内皮细胞,单核细胞和B淋巴细胞。大多数非SOT传播被认为是通过唾液发生的,但是在SOT接受者中,与同种异体相关的传播被认为主要是由乘客单核细胞发生的(2)。移植后,HHV -8血清转化具有这解释了肝,肺和小肠移植受者的血清转化率明显更高。正如疱疹病毒感染中所预期的,实验和临床数据表明,T淋巴细胞的宿主免疫对于HHV-8的控制和调节很重要。尽管HHV-8对于引起某些恶性肿瘤是必要的,但也必须有其他共同因素,因为在非免疫抑制个体中很少有临床疾病。流行病学HHV-8血清阳性(抗体阳性)通常表明先前获得了病毒的感染和运输,通常是无症状的。在健康无症状个体的血浆或血清中病毒DNA的检测并不常见,因为HHV-8与细胞相关。血浆中HHV-8 DNA的检测与病毒复制状态有关,病毒载量与疾病表现水平之间存在相关性。然而,在没有可检测的病毒血症的情况下,可能会发生疾病(例如局部化的kaposi的肉瘤)。与其他疱疹病毒不同,HHV-8血清阳性在全球范围内差异很大。HHV-8的血清阳性接近撒哈拉以南非洲的50%,意大利南部的血清阳性接近约25%。非流行地区,例如美国(美国)和西欧报告,普通人群的血清阳性率为0至6%。在某些亚组中观察到较高的血清阳性,例如与男性发生性关系的男性(MSM)和静脉吸毒者(3);这些是非流行地区传播的重要途径。在美国,估计有3-7%的献血者是血清阳性的,但检测到HHV -8 DNA的速率最低(未测试的684个供体)(4)。
关键词:轨道式振荡生物反应器 (OSB)、禽类 AGE1.CR.pIX 悬浮细胞、流感病毒、动物疱疹病毒、腺相关病毒 (AAV)、人胚胎肾 (HEK) 293 细胞、一次性灌注至高细胞密度、制造。悬浮细胞的预培养在摇瓶中成功完成。特别是新开发的设计细胞在高摇动频率下在摇瓶中传代多达 100 次,然后完美适应在具有 pH 控制和最大氧气供应(通常高于 80% pO 2 )的 CO 2 培养箱中生长。当它们随后被转移到搅拌槽生物反应器进行扩大时,特定细胞生长率通常较低,并且细胞对通过酸/碱添加和由于潜水器放气(气泡)而产生的剪切应力的 pH 控制变得敏感。禽类 AGE1.CR.pIX 和人类 HEK 293 细胞也出现了这种情况。为了避免这些问题,评估了在振荡模式下的扩大规模。这里我们介绍了 SB10-X OSB 生物反应器在袋子设计和控制单元改进方面的最新进展。引入了一种新的控制策略,从而可以更快、更精确地控制 pH 和 DO。此外,还优化了灌注袋,以便可以轻松连接一个或两个 TFF ATF 系统。这两项发展都带来了更强大的 SB10-X 系统,可以轻松执行批量、补料分批或灌注运行。在 10 L 一次性标准袋中,在化学定义的培养基 CD-U3(Biochrom-Merck,德国)中以 70 rpm 的摇动频率培养 Avian AGE1.CR.pIX 细胞(ProBioGen AG,德国)。对于灌注,使用了交替切向流系统(ATF2,Repligen,500 kDa 截止值)。感染流感病毒 A/PR/8/34 (H1N1) 后,MOI 为 0.001,工作体积从 5 升增加到 9 升,同时保持灌注。使用不同的填充体积评估 25 和 50 x 10 6 细胞/毫升的细胞浓度,以了解顶部空间通气的影响。总体而言,可以获得 3500 个病毒体/细胞的非常高的细胞特异性病毒产量,导致 HA 滴度高达 3.7 log 10(HA 单位/100 µL),感染滴度高达 8.8 x 10 9 TCID 50 /毫升。基于重组 AAV 的载体不仅是基因治疗目的的合适载体,而且还能够诱导针对各种抗原的强烈、主要是细胞的免疫反应。到目前为止,AAV 生产主要使用瞬时转染的贴壁人类 HEK 293 细胞(例如在细胞堆栈中),这对大规模 AAV 生产来说是一个重大挑战。在这里,我们测试了内部适应悬浮生长的 HEK 293 细胞,以通过一种允许简单扩大规模的过程生产 AAV9 的能力。因此,HEK 293 悬浮细胞在 5 L 化学定义的无血清培养基中培养,细胞密度为 1 x 10 6 个细胞/毫升,使用 SB10-X OSB 生物反应器,摇动频率为 65 rpm。24 小时后以 70 rpm 的振荡频率进行聚乙烯亚胺 (PEI) 介导的三重转染(包括 GFP 报告基因)。最后,转染后 48 小时,收获细胞和上清液进行 AAV 分离,并测定裂解物中 DNase I 抗性载体颗粒 (DRP) 的数量。由于转染效率高(基于 GFP 报告基因的转染率 >90%)且 SB10-X 系统中整个批处理过程性能良好,因此达到了 1.4 x 10 12 DRP/ml 或 7 x 10 15 DRP/批(5 L)范围内的制造相关 AAV 滴度。总之,在轨道上生产病毒可能是创新疫苗制造的一种有吸引力的替代方案。
Debabrata Das, Prakriti Das, Aranya Das and Santa Ana Das DOI: https://doi.org/10.22271/fish.2022.v10.i4b.2697 Abstract At this digital era author finds that digitally in aquatic and terrestrial environments Total Dissolved Solids, TDS and Cation Exchange Capacity, CEC both have significant roles in in渔业和人类具有阴性与生长和繁殖力相关。目前的交流指出,这是脂肪酸和尊敬卫生生物分子合成的最小单位,可能与CEC和TDS负相关。异戊二烯在各种渔业和人类中都具有巨大的抗病毒作用,因此,环境可以根据环境在合成脂肪酸中发挥重要作用。鱼类脂肪酸和磷脂的需求很高,因此鱼本身和其他动物的免疫力。经常发现脂肪酸生物分子可以视为渔业和每种人类的抗病毒生物分子。浮游生群中的脂肪酸合成的基本单位称为异戊二烯合成,这种纳米颗粒在热带渔业的水生环境的上表面上更加普遍,因此,所有顶级喂食器种类,因此,所有顶级喂食器都在鳄鱼,catla catla,catla catla,tilapia spp,tilapia spp,puntius spp spp spp spp spp spp s p。热带气候。 尽管我们可能知道,脂肪生物分子可能是环境异戊二烯,异丙素等,而是在鱼类中作为磷脂的合成,或者以半自然渔业中物种的饲料补充物积累。 生态技术关系可能会说细菌自然可以控制或预防病原体。浮游生群中的脂肪酸合成的基本单位称为异戊二烯合成,这种纳米颗粒在热带渔业的水生环境的上表面上更加普遍,因此,所有顶级喂食器种类,因此,所有顶级喂食器都在鳄鱼,catla catla,catla catla,tilapia spp,tilapia spp,puntius spp spp spp spp spp spp s p。热带气候。 尽管我们可能知道,脂肪生物分子可能是环境异戊二烯,异丙素等,而是在鱼类中作为磷脂的合成,或者以半自然渔业中物种的饲料补充物积累。 生态技术关系可能会说细菌自然可以控制或预防病原体。浮游生群中的脂肪酸合成的基本单位称为异戊二烯合成,这种纳米颗粒在热带渔业的水生环境的上表面上更加普遍,因此,所有顶级喂食器种类,因此,所有顶级喂食器都在鳄鱼,catla catla,catla catla,tilapia spp,tilapia spp,puntius spp spp spp spp spp spp s p。热带气候。 尽管我们可能知道,脂肪生物分子可能是环境异戊二烯,异丙素等,而是在鱼类中作为磷脂的合成,或者以半自然渔业中物种的饲料补充物积累。 生态技术关系可能会说细菌自然可以控制或预防病原体。浮游生群中的脂肪酸合成的基本单位称为异戊二烯合成,这种纳米颗粒在热带渔业的水生环境的上表面上更加普遍,因此,所有顶级喂食器种类,因此,所有顶级喂食器都在鳄鱼,catla catla,catla catla,tilapia spp,tilapia spp,puntius spp spp spp spp spp spp s p。热带气候。尽管我们可能知道,脂肪生物分子可能是环境异戊二烯,异丙素等,而是在鱼类中作为磷脂的合成,或者以半自然渔业中物种的饲料补充物积累。生态技术关系可能会说细菌自然可以控制或预防病原体。在第二和第三个实例中,从鱼类中提取生物分子的脂肪酸可能会在科学上可能在不绝对的鱼类捕捉而进行科学上,并且每个非食性食客群落可能会变得更加愉快地从渔业中获得脂肪酸,从而成为包括抗病毒作用在内的有价值的药物。生态技术揭示了与环境氮源成比例的细菌,病原体或病毒的自然盛行,并且在分子生物学和阿育吠陀研究的研究中发现了与简单的异戊二烯呈负相称。当环境可用的硝酸盐变得更多,脂肪或异戊二烯或碳酸化合物时,病原体会更加普遍。当情况逆转时,可能会逆转致病控制或预防。细菌,当可用的硝酸盐变得较少,脂肪或异戊二烯时,病原体可能会受到限制,或者在环境中占用更多时碳氢化合物化合物。我们可能知道病原体可以是土壤,空气,也可以是渔业水传播的水传播病原体,并描述了大肠菌菌的病原体。这种陈述的现象更多地在环境中具有可用氮的病原体在每个环境中也可能是正确的。也是异戊二烯和简单的碳氢化合物,在所有相同指定的环境中都可以占上风。关键字:环境生物分子,CEC,鳄鱼鱼,Catla Catla,catla catla,罗非鱼SPP,Puntius spp简介大多数病原体都是空气生成的,因为空气可能包含最大的氮衍生物,例如NO2,NO3,NO3等,以及对环境的感应元素,使其对环境有足够的水分viz的环境。相对湿度超过60%。空气中的这种可用氮会增加,并且可能形成第3号,而2个氮气在亚土壤厌氧条件下有助于病原体。大气可用的氮可能与土壤和水环境中可用的氮化合物有关系,并且病原体可能占上风。作者微生物或致病性控制或预防可以使用异戊二烯,最简单的碳氢化合物可能在异戊二烯或碳氢化合物或脂肪泡沫衍生物中可能在空气或水中30 ppm左右或可能在土壤环境中发现30 ppm的脂肪泡沫衍生物时可能存在零病原体。在异戊二烯旁边,阿育吠陀完全可以破坏所有邪恶的蛋白质,病毒体,微生物仅仅是外蛋白,与多细胞不同,可以很容易地通过植物酸(pH <6.5)或植物生物碱(pH> 8.0)和植物中的植物变性。