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World File Search System盒式磁带
内含子编辑可以使谱系特异性表达与HSPC基因治疗相关的治疗剂
基因编辑的造血茎和祖细胞（HSPC）的自体移植可以在不久的将来作为选择的多种遗传疾病（包括溶酶体储存疾病（LSD））的选择。HSPC的传统基因治疗方法基于慢病毒载体对转基因的整合，而最近靶向的盒式磁带的整合通常由设计器核酸酶支持。无论哪种情况，转基因的表达通常都由外源无处不在的启动子维持，该启动子可能会改变或失调周围的原始癌基因和/或肿瘤抑制器的表达。此外，普遍存在的启动子在干细胞水平上诱导所需转基因的表达，这可能会影响其功能性，因为已建议将半乳糖脑脑苷酶（Krabbe）或葡萄糖脑苷酶（Gaucher）的过表达表达。，我们基于将剪接功能的盒式集成到谱系特异性基因座的内含子中的集成基于HSPCS的新型基因编辑系统。这种方法旨在防止转基因在干细胞水平上的表达，仅在细胞分化后触发转基因表达。作为概念证明，我们编辑了CD11b在HSPC中的内含子，并诱导转基因（用于治疗I型I型的GFP或IDUA）在体外分化和体内髓细胞塑料插入后的髓样含量I型）中的髓样特异性表达。我们证明了这种方法对CD20和CD4基因的可运输能力。
2024 年 11 月 14 日 081-68W-0402 进行静脉注射...
条件：在操作环境中，您已收到医疗命令，要求使用泵为需要静脉 (IV) 输液的患者提供液体。您有患者的临床记录、蠕动泵、静脉输液杆、静脉输液溶液、无菌蠕动管或盒式磁带（如果需要）、酒精垫、胶带、10 毫升无菌生理盐水冲洗液、检查手套、笔和标准表格 (SF) 510、SF 600 或电子病历。您有医务人员的医嘱、药物（使用六项权利）和患者。您已对患者进行了护理洗手并采取了适当的身体物质隔离 (BSI) 预防措施。此任务不应在 MOPP 4 中进行训练。标准：按照 (IAW) Lippincott 的临床技能视觉百科全书操作静脉输液泵，同时遵守所有警告和注意事项，使用 GO/NO-GO 检查表，不得出现错误。 特殊条件：在训练此任务时，领导者应结合使用陆军理论的八个相互关联的作战变量的场景/情况：政治；军事；经济；社会；信息；基础设施；物理环境，时间，（PMESII-PT）以教育士兵了解作战环境 (OE) 意识，强化价值观，并解决当前的陆军问题，以完善士兵对陆军作战的理解。PMESII-PT 变量几乎在每场冲突中都是预期的，并作为 OE 的基石。它们可以相互关联、重叠并共同作为理解 OE 的基础。安全风险：低 MOPP 4：从不
便利性资本主义
在1990年代后期和整个2000年代研究了音乐文件共享（Skågeby，2008年）之后，有一件事是，自随后的普遍采用音乐流媒体以来，有一件事使我着迷：我们很快就批评了我们在选择的音乐流媒体服务的辩护。虽然是轶事，但在我看来，任何暗示“虚假的资本主义流程”立即被忽略了，相反，关于易于获得“全部音乐”音乐供应的争论。建议算法制度（Jarke等，2024）或“软件物流”（Eriksson，2019年）可能决定文化的流通不如被认为是“现在的方式”而被认为所接受的；现在，我们甚至已经从所谓的“自由和竞争性”的资本主义市场回归了数字封建制度（Arditi，2023年），那里有一些数据孤立的服务为我们提供的所有音乐访问提供了更多的挫败感，但最终也使人们感到沮丧，但最终也接受并进行了内部化的便利。算法和资本主义政权现在是如此紧密地编织在一起，无处不在，以至于其他任何东西（未来和过去）似乎不必要，烦人和过于费力。说过，采用旧格式和“容器技术”（例如，乙烯基唱片，盒式磁带，可能也是CD复兴）的一种激增，可以将其解释为具有音乐流的非物质性的疲劳（Mall，Mall，Mall，2021，Rahm-skågebeby，20221）。再次，也许这些模拟实践中的许多是有时对资本主义的抵制。但是，正如Palm（2019）所说，模拟格式通常仍通过数字平台传播，这意味着要集中精力的斗争可以说是在公司和独立文化之间（而不是新旧格式）。毕竟，新的乙烯基记录或录音带也是唱片公司的另一个收入来源。那么，资本主义算法模式的文化循环和便利性模式之间的这种联系可能是什么因素？
稳定表达 Cas9 和 T7 RNA 聚合酶的利什曼原虫 (Viannia) braziliensis 的有效基因组编辑
直到 2015 年，阐明利什曼原虫蛋白质功能的功能丧失研究都依赖于通过同源重组进行基因破坏。随后，CRISPR/Cas9 革命影响到了这些原生动物寄生虫，只需一轮转染即可实现有效的基因组编辑。此外，LeishGEdit 的开发（一种基于 PCR 的工具包，用于使用 CRISPR/Cas9 生成敲除和标记系）使基因组编辑更加直接有效。在此系统中，质粒 pTB007 被递送至利什曼原虫，在 b-微管蛋白基因座中进行游离表达或整合，并稳定表达 T7 RNA 聚合酶和 Cas9。在南美洲，尤其是在巴西，利什曼原虫 (Viannia) braziliensis 是皮肤利什曼病最常见的病原体。与利什曼原虫相比，L. braziliensis b-微管蛋白基因座表现出显著的序列差异，这阻碍了 pTB007 的有效整合和 Cas9 的稳定表达。为了克服这一限制，pTB007 中存在的 L. major b-微管蛋白序列被利什曼原虫 (Viannia) b-微管蛋白保守序列取代，从而产生了 pTB007_Viannia 质粒。这一修改使 pTB007_Viannia 盒式磁带成功整合到 L. braziliensis M2903 基因组中，并且计算机预测表明这也可以在其他 Viannia 物种中实现。通过敲除鞭毛蛋白 PF16 来评估 Cas9 的活性，这导致这些转染子中出现不动表型。内源性PF16也成功被mNeonGreen标记，并采用基因座互补策略将PF16基因的C端标记拷贝返回到原始基因座，从而恢复游泳能力。
通过耦合Cre-lox和CRISPR的细菌基因组编辑...
过去十年是微生物学的黄金时代，其标志是发现新型细菌数量的前所未有的增加。却获得对这些生物的生物学知识并没有跟上测序努力的步伐。要解锁这种遗传潜力，迫切需要通用（即特定于非物种的）基因工具盒。最近，我们开发了一种方法，称为底盘独立的重组酶 - 介绍的基因组工程（CARGAGE），从而使大型复杂基因簇的整合和表达直接直接进入多种细菌的染色体中。在这里，我们通过合并CRISPR-CAS9来扩展这项技术，从而允许多种细菌物种进行精确的基因组编辑。为此，我们开发了一个载有一个野生型和两个突变的LOX位点的着陆板，以通过旋转重组酶介导的盒式盒式磁带（RMCE）在两个位置整合外源DNA。第一个RMCE事件是整合Cas9和DNA修复蛋白基因的恢复，第二个RMCE事件使定制的SGRNA和修复模板可以集成。在此工作流程之后，我们在四个不同的γ-细菌特征中获得了精确的基因组编辑。我们还表明，插入的着陆垫和整个编辑机器可以在编辑后无稀有地删除。我们在这里报告了单个降落垫转座子的构建，并证明了其在多种物种之间的功能。降落垫和附件向量的模块化设计允许以类似方式设计和组装其他生物体的基因组编辑平台。我们认为，这种方法将大大扩展可容纳遗传操作的细菌清单，并提供了提高我们对微生物世界的理解的手段。