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心肌细胞中的瞬时细胞周期诱导治疗亚急性缺血性心力衰竭
*通讯：tamer m a Mohamed，博士，路易斯维尔大学分子心脏病学研究所，119f室，南普雷斯顿街580号，肯塔基州路易斯维尔，肯塔基州40202，美国，电话：5028528428＃这些作者同样为作者贡献R.R.E.A.做出了贡献。和A.M.S. ：分子和细胞数据，手稿写作以及手稿的最终批准的实验设计，收集和分析； Q.O. ：心脏切割，染色和成像； X-L.T。 ：猪和大鼠手术，病毒注射，超声心动图；多发性硬化症。 和K.M.K. ：超声心动图和MRI分析； Y.G.，Y.H.和Y.N. ：小鼠手术和病毒注射。 L.M.，P.K.L.和B.G.H. ：代谢分析； K.C.和R.T。：生物信息学分析； B.M.A. 和J.S. ：电生理分析； H.R.J.，A.S.，Z.I.和S.H. ：组织学和分析，包括染色，成像和定量。 D.J.C. 在血浆中设计并进行了毒性测定。 A.S.E. ：MRI成像定量； K.N.I和D.S. ：构思，设计并提供了早期实验的资金； R.B. ：大鼠和猪实验的设计和监督； T.M.A.M. ：整体工作的概念和设计，并提供了资金。 所有作者都为手稿撰写和最终批准做出了贡献。和A.M.S.：分子和细胞数据，手稿写作以及手稿的最终批准的实验设计，收集和分析； Q.O.：心脏切割，染色和成像； X-L.T。：猪和大鼠手术，病毒注射，超声心动图；多发性硬化症。和K.M.K.：超声心动图和MRI分析； Y.G.，Y.H.和Y.N.：小鼠手术和病毒注射。L.M.，P.K.L.和B.G.H. ：代谢分析； K.C.和R.T。：生物信息学分析； B.M.A. 和J.S. ：电生理分析； H.R.J.，A.S.，Z.I.和S.H. ：组织学和分析，包括染色，成像和定量。 D.J.C. 在血浆中设计并进行了毒性测定。 A.S.E. ：MRI成像定量； K.N.I和D.S. ：构思，设计并提供了早期实验的资金； R.B. ：大鼠和猪实验的设计和监督； T.M.A.M. ：整体工作的概念和设计，并提供了资金。 所有作者都为手稿撰写和最终批准做出了贡献。L.M.，P.K.L.和B.G.H.：代谢分析； K.C.和R.T。：生物信息学分析； B.M.A.和J.S.：电生理分析； H.R.J.，A.S.，Z.I.和S.H.：组织学和分析，包括染色，成像和定量。D.J.C. 在血浆中设计并进行了毒性测定。 A.S.E. ：MRI成像定量； K.N.I和D.S. ：构思，设计并提供了早期实验的资金； R.B. ：大鼠和猪实验的设计和监督； T.M.A.M. ：整体工作的概念和设计，并提供了资金。 所有作者都为手稿撰写和最终批准做出了贡献。D.J.C.在血浆中设计并进行了毒性测定。A.S.E. ：MRI成像定量； K.N.I和D.S. ：构思，设计并提供了早期实验的资金； R.B. ：大鼠和猪实验的设计和监督； T.M.A.M. ：整体工作的概念和设计，并提供了资金。 所有作者都为手稿撰写和最终批准做出了贡献。A.S.E.：MRI成像定量； K.N.I和D.S.：构思，设计并提供了早期实验的资金； R.B.：大鼠和猪实验的设计和监督； T.M.A.M.：整体工作的概念和设计，并提供了资金。所有作者都为手稿撰写和最终批准做出了贡献。
拮抗瞬时受体电位黑素瘤素-2......
摘要。黑色素瘤仍然是最具侵袭性和破坏性的皮肤癌，需要开发新的治疗方法。本研究旨在确定拮抗瞬时受体电位黑素瘤素 2 (TRPM2) 离子通道对原发性人类恶性黑色素瘤细胞的影响。使用抗真菌剂克霉唑拮抗 TRPM2 导致细胞增殖减少，以及所有研究的黑色素瘤细胞系中细胞死亡率呈剂量依赖性增加。使用 TRPM2 敲低验证了 TRPM2 通道的靶向性，其中与克霉唑治疗相比，使用 TRPM2 小干扰 RNA 治疗导致所有黑色素瘤细胞系的细胞死亡率相似。在非癌性人类角质形成细胞中拮抗或敲低 TRPM2 后观察到对增殖和细胞死亡的最小影响。此外，在这些黑色素瘤细胞中探索了 TRPM2 的特征，结果表明，TRPM2 定位于质膜，作为非癌细胞中的非特异性离子通道，在所分析的所有人类黑色素瘤细胞系中均表现出核定位。对这些黑色素瘤细胞系的进一步表征证实，每种细胞系都表达一种或多种已确定的多药耐药性
通过瞬时 RNAi 表达操控大麻素生物合成
大麻 (Cannabis sativa L.) 可产生独特的植物大麻素，可用于制药。迄今为止，尚无针对大麻素生物合成基因的体内工程改造的报道，以更详细地阐明这些基因在这些具有医学重要性的化合物的合成中的作用。本文报道的是首次使用农杆菌浸润 RNAi 调节大麻素生物合成基因。用对应于 THCAS、CBDAS 和 CBCAS 基因序列的不同 RNAi 构建体转染的 Cannbio-2 C. sativa 菌株的真空浸润叶段使用实时定量 PCR 显示所有大麻素生物合成基因均显著下调。使用 RNAi 会发生显著的脱靶，导致高度同源转录本的下调。使用 pRNAi-GG-CBDAS-UNIVERSAL 观察到 THCAS (92%)、CBDAS (97%) 和 CBCAS (70%) 的显著 (p < 0.05) 下调。转染 pRNAi-GG- CBCAS 后，观察到 CBCAS (76%) 显著 (p < 0.05) 上调和 THCAS (13%) 不显著上调，表明相关基因能够合成多种大麻素。使用这种方法，可以进一步阐明对大麻素生物合成基因之间关系的理解。这种 RNAi 方法使功能基因组学筛选成为可能，可用于进一步的反向遗传学研究以及设计大麻菌株，其中目标大麻素生物合成基因过度表达和/或下调。诸如此类的功能基因组学筛选将进一步深入了解大麻中大麻素生物合成的基因调控。
镰刀菌A3/5的瞬时表达
标记避免了与体外产生的不稳定 sgRNA 相关的困难，使其成为一种产生无转基因改良 F. venenatum 菌株的有吸引力的系统。我们的结果表明，在大多数分离株中，在没有选择的情况下载体会丢失，表现为无法在潮霉素选择培养基上生长。在少数分离株中观察到的持续潮霉素抗性表明载体元素可能整合到染色体中（包括用于抗潮霉素的 hph 基因），或残留的染色体外载体（这可能是由于某些分离株中的初始拷贝数较高）。从一个转化菌落中回收潮霉素抗性和易感单孢子分离株表明在孢子形成之前，部分但不是所有细胞核中的残留载体会丢失。通过持续培养，预计最终所有细胞核都会丢失
通过供体的体内 - 线性化和DNA聚合酶θ/DNA-PK的瞬时抑制，在小鼠胚胎干细胞中有效双重敲门
（未通过同行评审认证）是作者/资助者。保留所有权利。未经许可就不允许重复使用。此预印本版的版权持有人于2021年5月30日发布。 https://doi.org/10.1101/2021.05.30.446338 doi：Biorxiv Preprint
现实世界的瞬时立体声深度估计...
立体声或基于多视图事件的数据集：DVS立体声[Andreopoulos，Alexander等。（2018）]MvSec[Zhu，Alex Zihao等。（2018）]DSEC[GEHRIG，MATHIAS等。（2021）]DHP19[Calabrese等。（2019）]
在表面安装的金属有机框架上润湿前瞬时热量释放的原位跟踪
在很大程度上是由宿主 - 具型人的互动驱动的，例如H键形成和范德华力等。[4–7]是一种标准的研究实践，可以研究这种瞬态热量释放，以了解MOF的吸附热和动力学行为，并将不同程度的与Adsorbates相互作用的不同程度与环境化。[8-10]然而，由于在相应的传感器设备中探索MOF瞬时热量，由于对周围环境的热量耗散，因此是一个未知的领域。作为多孔材料，纤维素纤维纸（CFP）能够自发地运输水，伴随着湿面较弱的临时温度升高。[11,15]由界面能量差异和在干向沟道跨界区域发生的界面能量差异和电静态吸引力引起的毛细力是关键因素。[11–14]这种毛细管驱动的旋转水含水研究表明，可以通过简单使用温度计来监测吸附和化学相互作用产生的瞬态热量。然而，在CFP润湿前部的温度升高相对较小（<4 K），在转化为电流传感设备的背景下没有选择性。[10,14,15]这主要是由于两个因素：
光活化的DCAS9-实际融合蛋白的位点特异性靶向产生氧化DNA损伤的瞬时局部区域
DNA修复需要对局部染色质结构进行重组，以促进并修复DNA。研究特定染色质结构域中的DNA双链断裂（DSB）修复已通过使用序列特异性核酸内切酶产生焦油的断裂来帮助。在这里，我们描述了一种结合Killerred的新方法，该方法是一种光敏剂，该光敏剂在暴露于光线时会产生活性氧（ROS），以及CRISPR/CAS9系统的基因组侵蚀性。将Killerr的融合到催化无效的CAS9（DCAS9）产生DCAS9-KR，然后可以将其靶向具有适当的指导RNA的任何所需的基因组区域。用绿光激活DCAS9-KR会产生活性氧的局部增加，从而导致“聚集”的氧化损伤，包括DNA断裂和碱基损伤。迅速（几分钟之内）激活DCAS9-KR会增加γH2AX和KU70/80复合物的募集。重要的是，这种损害在终止光线暴露后的10分钟内修复，表明DCAS9-KR产生的DNA损伤既快速又瞬时。此外，维修是专门通过NHEJ进行的，没有基于HR的机制可检测到的贡献。令人惊讶的是，修复的DNA损伤区域的测序没有发现目标区域中突变或indels的增加，这意味着NHEJ在低水平的条件下具有高忠诚度，损害有限。DCAS9-KR用于产生靶向损伤的方法与使用核酸内切酶相比具有很大的优势，因为可以通过控制光线暴露来控制DNA损伤的持续时间和强度。此外，与进行多个切割修复周期的核核酸酶不同，DCAS9-KR会产生一系列的损害，更类似于在急性暴露于活性氧或环境毒素中急性暴露时造成的损害类型。DCAS9-KR是一个有前途的系统，可在聚类的DNA病变上诱导DNA损伤并测量位点特异性修复动力学。
一种高效的农杆菌介导方法，用于多种植物的瞬时基因表达和功能研究
尽管稳定转化技术的应用使人们对于基因功能有了更深入的了解，但将其应用在高通量研究中仍然十分困难。农杆菌浸润法已经被广泛应用于本氏烟等物种中，用于快速检测基因表达和蛋白质相互作用分析，但该技术在其他植物物种中效果并不理想，包括拟南芥。由于目前在模式植物拟南芥中缺乏高效的高通量瞬时表达系统，我们开发了一种高效、可重复、适用于在拟南芥和其他 7 种植物中瞬时表达多种功能蛋白的方法，包括甘蓝、风疹菜、盐芥、盐芥、马铃薯、辣椒和本氏烟。该方法的有效性已在三个独立的研究机构中得到独立验证，表明该技术的稳健性。此外，除了展示该技术在一系列物种中的实用性之外，我们还介绍了一个案例研究，采用该方法评估拟南芥蔗糖生物合成途径中的蛋白质-蛋白质相互作用。
CRISPR/Cas 与核糖核蛋白复合物和瞬时选择端粒载体可在灰葡萄孢菌中实现高效的无标记和多重基因组编辑
CRISPR/Cas 已成为多种生物体中遗传操作的最先进的技术，能够以前所未有的效率进行有针对性的遗传改变。本文中，我们报告了在重要的坏死性植物病原体灰霉病中首次建立强大的 CRISPR/Cas 编辑，该方法基于将优化的 Cas9-sgRNA 核糖核蛋白复合物 (RNP) 引入原生质体。通过开发一种将 RNP 递送与含端粒的瞬时稳定载体共转化相结合的新策略，进一步提高了编辑产量，从而允许临时选择和方便地筛选无标记编辑事件。我们证明，与现有的基于 CRISPR/Cas 的丝状真菌方法（包括模型植物病原体稻瘟病菌）相比，这种方法提供了更高的编辑率。编辑菌株的基因组测序显示很少有额外的突变，也没有 RNP 介导的脱靶证据。端粒载体介导编辑的高性能通过随机诱变 sdhB 基因的 272 个密码子得到证实，该基因是琥珀酸脱氢酶抑制剂 (SDHI) 杀菌剂抗性的主要决定因素，方法是将 272 个密码子批量替换为编码所有 20 种氨基酸的密码子。在没有选择的情况下，所有交换的频率都相似，但 SDHI 选择允许识别新的氨基酸替换，这些替换赋予了对不同 SDHI 杀菌剂的不同抗性水平。基于 RNP 的共转化效率提高且易于操作，有望加速 B . cinerea 和其他真菌的分子研究。