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forprepreptm血液基因组DNA提取小型盒。 ...
在开始以下步骤之前，请阅读重要的笔记。1。将多达200 µL样品（全血，血清，血浆，体液，Buffy Coat）转移到微分离管（未提供）。- 如果样品体积小于200 µL，请添加适当的PBS体积。2。（可选）：如果需要无RNA的基因组DNA，则将4 µL的100 mg/ml RNase A加入样品中，并在室温下孵育2分钟。3。将20 µL蛋白酶K和200 µL Fabg缓冲液加到样品中。通过脉冲涡流彻底混合。- 请勿将蛋白酶K直接添加到Fabg缓冲液中。4。在60ºC下孵育15分钟以裂解样品。在孵育过程中，每3〜5分钟间隔涡流一次。5。简要旋转管以去除IID内部的滴剂。6。将200 µL乙醇（96〜100％）加到样品中。通过脉冲涡流彻底混合10秒。7。简要旋转管以去除IID内部的滴剂。8。将Fabg Mini柱放在收集管上。小心地将混合物（包括任何沉淀物）转移到Fabg Mini柱中。在6,000 x g处离心1分钟，然后将fabg mini柱放在新的收集管上。9。将400 µL W1缓冲液添加到Fabg Mini柱中，并以全速离心30秒，然后丢弃流通液。- 确保在第一次打开时已将乙醇添加到W1缓冲液中。10。- 确保在第一次打开时已将乙醇添加到洗涤缓冲液中。11。12。将750 µL洗涤缓冲液添加到Fabg Mini柱中，并全速离心30秒，然后丢弃流通液。全速离心3分钟以干燥色谱柱。重要步骤！此步骤将避免残留液体抑制随后的酶促反应。将Fabg Mini柱放在洗脱管上。13。将加热洗脱缓冲液或DDH 2 O（pH 7.5-9.0）加入Fabg Mini柱的膜中心。站立fabg mini柱持续3分钟。- 重要步骤！为了有效洗脱，请确保将洗脱溶液分配到膜中心并完全吸收。14。全速离心1分钟以洗脱总DNA。15。将总DNA存储在4°C或-20°C。
优化LX-2细胞系的核反射方案
摘要来自肝脏疾病，非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是一种影响世界上5.3％的人的疾病。NASH患者的肝脏患有炎症，这也称为纤维化，可以是慢性的，并导致肝硬化的发展。为治疗纤维化患者，正在进行研究以开发抗纤维化疗法以抑制纤维化。在这些研究中，重点是开发自身蛋白酶抑制剂以减少纤维化。酶自身蛋白酶在LPA的产生中起重要作用，LPA是细胞外信号分子。lpa可以作为细胞外分子与LPA 1-3受体结合，而LPA 4-6受体则在ATX的指导下优选地通过LPA激活。由于LPA受体参与纤维化，因此希望使用人类肝星状细胞（HSCS）细胞系LX-2研究这些受体在肝纤维化中的差异，并用LPA受体敲除。要创建此基因敲除细胞系，需要使用CRISPR/CAS9转染LX-2细胞进行优化的核反理®方案。在这里，基于转染效率和细胞活力，将核对甲基®程序EW-113和CA-137进行比较。需要用于核对®实验150.000个细胞。为了在离心后获得最小的细胞损失，研究了不同的离心程序（90xg 10分钟，240xg，持续3分钟，300xg持续5分钟）。从实验的结果中，离心程序之间的离心损失最小的离心机损失没有显着差异。从转染效率和细胞活力的结果中，该程序CA-137是最合适的程序，具有最高的细胞活力，并结合了具有CRISPR/CAS9的LX-2细胞的足够高的转染效率。
CD20/TNFR1双靶向抗体增强B细胞淋巴瘤中溶酶体破裂介导的细胞死亡
外周血单核细胞 (PBMC) 是从自愿参与本研究的健康捐赠者身上纯化的，这些捐赠者已获得研究内容的知情同意。所有这些过程均按照延世大学机构审查委员会批准的 IRP 程序 (#4-2016-0600) 进行。将血液与 PBS 以 1:1 的比例混合，并堆积在预先放入 ficoll (HISTOPAQUE-1077, Sigma, 10771) 的试管中。在 25°C 下以 400×g 离心 30 分钟，分离白细胞和红细胞，收集并转移到新试管中。用 PBS 冲洗细胞两次，并在室温下以 300×g 离心 10 分钟。重复此过程两次以完全去除血小板。然后，将 PBMC 重新悬浮在 RPMI 中
一步FFPE RNA提取套件 - 用户指南
首先，FFPE样品进行了优化的非链接，然后进行组织裂解，PAR伴侣和去污剂去除。在短离心后，将下水相转移到新的管中，并用DNase处理以去除基因组DNA。然后将裂解物进行创新的一步纯化技术。样品被加载到保留细胞碎屑和杂质的纯化中，而RNA则通过基质自由迁移到流通液中。该方法仅需要一个快速离心步骤，与传统的二氧化硅方法相比，在整体和动手时间上都显着降低了。由于传统的结合洗流行程序被一步纯化取代，因此也会导致塑料废物的减少。此外，该协议利用了较少的危险试剂。
NB3SN SRF腔从研发到真正的加速器-Jacow.org
Viklund，Eric，David N. Seidman，David Burk和Sam Posen。 “使用离心枪抛光剂改善NB3SN空腔性能。” 超导科学与技术37，第1期。 2（2024）：025009。 Viklund，Eric等。 “使用重新配置方法中NB3SN SRF腔中的愈合梯度降解”。 ARXIV预印型ARXIV：2405.00211（2024）。Viklund，Eric，David N. Seidman，David Burk和Sam Posen。“使用离心枪抛光剂改善NB3SN空腔性能。”超导科学与技术37，第1期。2（2024）：025009。Viklund，Eric等。“使用重新配置方法中NB3SN SRF腔中的愈合梯度降解”。ARXIV预印型ARXIV：2405.00211（2024）。
土壤基因组DNA提取试剂盒
在吸附柱中部加入50~200μLElution Buffer或无菌水，室温放置2~5分钟，12000rpm离心1分钟。收集 DNA 溶液并将 DNA 储存于 -20°C。注：1）若后续实验对pH或EDTA敏感，可用无菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响。若用水作为洗脱液，则pH应为7.0～8.5（可用NaOH调节水的pH值至此范围），pH值低于7.0洗脱效率不会高。 2) 将洗脱缓冲液放入65-70°C水浴中预热。离心前在室温下孵育 5 分钟以提高产量；用另外50-200 μL洗脱缓冲液或无菌水洗脱可能会增加产量。 3) 如果想提高DNA最终浓度，可以将所得溶液加入到吸附柱中，室温下放置2-5分钟，12000 rpm 离心1分钟；如果洗脱体积少于200 μL，可能会增加最终的DNA浓度，但可能会降低总产量。如果DNA量少于1μg，建议用50μL洗脱缓冲液或无菌水洗脱。 4) 由于保存在水中的DNA会受到酸性水解的影响，如果需要长期保存，建议用Elution Buffer洗脱后保存于-20℃。
jprice@whoi.edu 版本 3.3 2006 年 1 月 10 日
地球固定且因此旋转的参考系几乎总是用于分析地球物理流动。转换为稳定旋转的参考系的运动方程包括两个涉及旋转矢量的项：离心项和科里奥利项。在地球固定参考系的特殊情况下，离心项恰好被重力质量吸引所抵消，并从运动方程中消失。当我们求解从地球固定参考系看到的加速度时，科里奥利项被解释为力。旋转参考系的视角放弃了全局动量守恒和不变性的性质，转而采用伽利略变换。然而，它可以大大简化地球物理流动的分析，因为只需要考虑相对较小的相对速度，即风和洋流。
redalyc。
酵母菌作物在搅拌（120 rpm）中生长16小时，或直到28°C的超过1亿个细胞/ml，在5 ml YPED中（1％酵母提取物，2％肽，葡萄糖2％）。 div>通过离心（eppendorf微离心）在微输出管中收集到8000 rpm的细胞，持续5分钟。 div>随后，这些细胞以0.5 ml的山梨糖醇1M溶液（EDTA 0.1M，（pH 5）重新悬浮），其中包含50个单位（U）的β-葡萄糖醛酸酶酶（Sigma-Aldrich）。 div>将带有酶的悬浮液在37ºC的水浴中孵育60分钟，定期搅拌（有时通过将细胞放入蒸馏水中并验证到光学显微镜以减小细胞密度来监督细胞壁的丢失）。 div>
从果蝇Melanogaster制备基因组DNA
从果蝇中的基因组DNA制备该方案可以从40-100 mg的成年蝇（蝇重约1 mg）中分离出高度纯的基因组DNA。首先，在核保持完整的条件下，蝇是在缓冲液中磨碎的，然后使用SDS将DNA从断裂的组织中释放出来。接下来，进行常规的苯酚提取（去除蛋白质）和氯仿提取（去除苯酚），并用乙醇沉淀核酸。离心后（去除脂质和小细胞分子），将核酸沉淀溶解并用rnasea（降解RNA）和蛋白酶K（降解rNASEA和其他蛋白质）串行消化。其他苯酚/氯仿沉淀和乙醇沉淀产生高度纯化的基因组DNA。我们的目标是完整的基因组DNA - 避免通过过度的移液和涡旋剪切DNA。1。将50个成年果蝇放入装有微型植物的1.5 mL微管中，并在500 µl的缓冲液中彻底磨碎A。用500 µl的缓冲液B冲洗杵，将冲洗液加入匀浆中；通过反转微管轻轻混合。在37°C下孵育1小时2。切断P1000微量移动尖端的尖端，然后使用它将匀浆（500 µL）的一半转移到第二个微管中。苯酚通过在每个管，帽和混合物中添加相等的体积（500 µL）Te饱和苯酚来提取样品。离心5分钟。3。使用截止P200尖端将透明顶层（水相）绘制为两个新的微管（每个微管）。避免绘制接口材料。离心5分钟。4。5。通过在每个管，帽和混合物中添加等体积（500 µl）苯酚的苯酚来重新提取样品。使用截止P200尖端将透明顶层（水相）绘制为两个新的微管（每个微管）。避免绘制接口材料。氯仿通过在每个管，帽和混合物中添加等体积（500 µl）的氯仿提取样品。离心1分钟。使用截止尖端将透明顶层（水相）绘制为两个新的微管（每个微管）。将NaCl添加到0.1m的最终浓度。乙醇通过在每个微管中添加2卷（〜850 µl）的EtOH来沉淀您的样品；轻轻混合。观察核酸的沉淀。将微管放在-20°C过夜以鼓励沉淀。6。离心10分钟。丢弃上清液；短暂地干燥SpeedVac中的颗粒（将显示使用）。7。如下，将样品组合到单个微管中。然后，使用截止P200尖端将500 µl TE缓冲液加到一个管中