8001001 ),旋涡振荡 30 秒混匀,室温静置 5 分钟后再进入步骤 3 的操作。 3. 加入 15 ml Buffer L7 ,盖紧管盖,用力上下摇晃混合均匀。 4. 加入 8 ml Buffer EX ,盖紧管盖,用力上下摇晃混合均匀。≥ 12,000 g 离心 5 分钟。 5. 在一个洁净的 50 ml 离心管中加入 8 ml 异丙醇备用。 6. 吸取步骤 4 中的所有离心上清液(约 25 ml )转移到步骤 5 备用的 50 ml 离心管 中,盖紧管盖,混匀上清液和异丙醇。
4. 14,000 × g 离心 2 分钟,转移 500 ul 上清液到新的 2 ml 离心管,加入 500 μL Buffer AL 和 600 μL 异丙醇和 15 µL MB Mix ,室温
■离心机不适用于爆炸性或放射性,或生物学或化学污染的气氛。■用户必须在离心有毒,放射性或用致病性微生物污染的物质的危险物质或混合物时采取适当的动作。制造商通常建议仅使用带有特殊螺钉盖的离心管来进行危险物质。使用可密封的离心管与生物安全系统进行风险3和4的材料。■制造商不建议用易燃或爆炸材料离心。■制造商不建议使用具有高能量化学反应的材料离心。
0.5 g称重为聚丙烯离心管(50 mL体积),并使用离子 - 脱位树脂类型的DNA提取和纯化试剂盒(Qiagen Genomic-TIP)提取DNA并纯化DNA。在样品中加入7.5 ml的G2缓冲液 *1和20μL-淀粉酶 *2,与涡旋混合器剧烈混合,并在37°C下孵育1小时。加入7.5 mL的G2缓冲液,200μl蛋白酶K*3和20μlRNASEA*4,搅拌直至样品保持在管的底部,并在50°C下孵育1小时。同时,将离心管反转2-3次以混合样品。接下来,在4°C下在5,000 x g处离心15分钟,然后将所得的上清液(在2 mL部分中)转移到五个2 ml管(总计10毫升) *5中,在4°C下在20,000 x g处离心15分钟。从每2毫升管中收集1 ml上清液,以提前用1 mL qBT缓冲液 *1平衡的Qiagen Genomic-TIP 20/g,并提前加载(总计5 mL)。然后用QC缓冲液 *1洗涤尖端3次,然后转移到新的离心管和预热的QF缓冲液
I.不要将样品带入离心管中。将散装样品带入烧杯,烧瓶等。II。 技术官员将在加载离心机之前评估散装样品的等分试样(约10毫升)。II。技术官员将在加载离心机之前评估散装样品的等分试样(约10毫升)。
U= (mm w )ach - 势能;mm w – 置换溶剂(水)的额外质量;h – 离心管底部以上高度;ac – 离心机加速度。测量蛋白质密度下降 1/e 10(指数项消失)时的高度 SH10
1. 将 5 ml 血液收集到含有 EDTA 的真空采血管 (Becton Dickinson) 中并混合。2. 用溶液 1 (10 mM Tris pH 7.6;10 mM KCl;10 mM MgCl2) 定容至 10 ml。3. 加入 120 μl Nonidet P40 (BDH) 以裂解细胞。颠倒几次以充分混合。4. 以 2000 rpm 的速度旋转核沉淀 10 分钟。5. 倒出上清液,不要移出沉淀。沉淀可以冷冻保存。6. 将沉淀轻轻地重新悬浮在 800 μl 溶液 2 (10 mM Tris pH 7.6;10 mM KCl;10 mM MgCl2;0.5 M NaCl;0.5% SDS;2 mM EDTA) 中。溶液 2 会裂解细胞核,所以要小心不要剪切 DNA。转移到 1.5 ml 的微量离心管中。7. 加入 400 μl 蒸馏苯酚(饱和于 1 M Tris pH 8.0)并混匀。8. 以 12000 rpm 的速度离心 1 分钟。将上层相转移到干净的微量离心管中。不要担心转移少量界面。9. 加入 200 μl 苯酚和 200 μl 氯仿:异戊醇(24:1)。颠倒混匀。10. 以 12000 rpm 的速度旋转 1 分钟。将上层相转移到干净的微量离心管中。11. 加入 700 μl 氯仿:异戊醇并按上述方法提取。12. 将上层水相转移到一个小的干净容器中。避免去除界面。加入 2 倍体积的冰冷乙醇并混合以沉淀 DNA*。 13. 使用密封的吸液管尖端将 DNA 纤维转移到含有 1 ml 70% 乙醇的微量离心管中。充分混合以清洗 DNA。14. 全速旋转 5 分钟。倒掉乙醇并在真空吸尘器中干燥沉淀物。在 65°C 的无菌水中重新悬浮 DNA。不要过度干燥基因组 DNA,否则将很难重新悬浮。
1。根据表4获取裂解样品。2。彻底混合裂解溶液。3。在每个1.5 mL微输出管或包含样品的板的孔中添加一卷裂解溶液。基于样本类型和样品数量的体积,请参见表4。4。移液管上下以混合裂解溶液和每个管子中的样品。5。盖管或用粘合剂盖密封板,然后短暂离心管或板。