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World File Search System移液器
数据表 - EZH2-EED 结合检测试剂盒
循环！） 50280 EED，FLAG 标签 10 µg -80°C 52170-A 4x HMT 分析缓冲液 2A 4 ml -20°C 要求但未提供的材料或仪器： Anti-FLAG AlphaLISA ® 受体珠，5 mg/ml（PerkinElmer #AL112C） AlphaScreen ® 谷胱甘肽供体珠，5 mg/ml（PerkinElmer #6765300） Optiplate-384（PerkinElmer #6007290） AlphaScreen ® 微孔板读数仪可调节微量移液器和无菌吸头 应用： 用于研究 EZH2 结合试验、筛选抑制剂和选择性分析。禁忌症： DMSO 浓度高于 0.5%。吸收 AlphaScreen ® 信号发射范围 (520-620 nm) 内的光的绿色和蓝色染料，例如台盼蓝。避免使用强效单线态氧猝灭剂，例如叠氮化钠 (NaN 3 ) 或金属离子 (Fe 2+ 、Fe 3+ 、Cu 2+ 、Zn 2+ 和 Ni 2+ )。>1% RPMI 1640 培养基中存在过量生物素和铁会导致信号减弱。缺乏这些成分的 MEM 不会影响 AlphaScreen ® 检测。稳定性：按说明储存，自收到之日起至少可保存一年。参考文献：Kong, X., et al., J. Med. Chem. 2014; 57 :9512。
基于 3D 颅骨重建的机器人立体定位系统可提高手术准确性和速度
我们开发了下一代机器人立体定位平台，用于小动物，结合了三维 (3D) 颅骨轮廓仪子系统和完整的六自由度 (6DOF) 机器人平台，以提高空间精度和手术速度。3D 颅骨轮廓仪基于结构照明，其中视频投影仪将一系列水平和垂直线图案投射到动物颅骨上，并由两个二维 (2D) 常规 CCD 相机捕捉，以基于几何三角测量重建精确的 3D 颅骨表面。使用重建的 3D 颅骨轮廓，可以使用基于 Stewart 设计的 6DOF 机器人平台引导和重新定位颅骨，以精确对准手术工具，以达到特定的大脑目标。使用机械测量技术对系统进行了评估，并使用琼脂脑模型演示了平台的精确瞄准。麻醉的单角沙鼠也用于该系统，通过使用玻璃移液器注射染料来瞄准梯形体 (MNTB) 的内侧核。切除的脑切片荧光成像证实了瞄准脑核的准确性。结果表明，这种新的立体定位系统可以提高神经科学研究中小规模脑部手术的准确性和速度，从而加速神经科学发现并降低实验动物的流失率。
生物学教学模块：重组DNA克隆
简介/背景：实验室的目的是向学生介绍如何通过质粒转化细菌来克隆感兴趣的基因。将要求学生设计一个实验，以通过确定存在哪些质粒中的三个基因中的哪些不同的质粒来区分三个不同的质粒。Key Concepts and Terms Covered: DNA, RNA, plasmid, vector, heritable information, genetic variation, antibiotic resistance, natural selection, gene transfer, enzyme Materials: per group: DNA Cloning video clip, DNA Cloning PowerPoint and note sheet, Online Lab Tutorials, Physical Lab activity - 2 transformation tubes, 1 packet of glass beads, 4 inoculating loops, 7 1ml-sterile transfer移液器，1条电线接种环，8种无菌培养皿，400毫升无菌LB琼脂，3毫升无菌氯化钙，3毫升无菌LB汤，4ml氨基霉素，4ml氨基霉素，4ml kanamycin，3 lb plates，3 lb plates，2 lb/kanamycin plate pg lb/ampimpim pg pg pgimm pgimm ppim plrein，质粒，200ul Pkan质粒，MM294倾斜培养（大肠杆菌），压碎冰和容器，42度厘米水浴，37度摄影孵化器，水浴，Bunsen燃烧器，废物容器，乙醇，乙醇。
纸质精子 DNA 完整性分析
设备制造和操作。纸基精子 DNA 分析设备在 PowerPoint 中设计，并使用固体蜡打印机（ColorQube 8570N，加拿大施乐）打印在硝化纤维素纸上（平均孔径为 0.45 μm，加拿大 Bio-Rad Laboratories Ltd.）。然后将图案化的硝化纤维素纸在 125 ºC 下加热 5 分钟，让蜡扩散穿过纸张厚度并从疏水边界扩散。为了将 ICP 功能添加到纸张中，在样品通道的开始处用移液器吸取 0.5 L 阳离子选择性纳米多孔 Nafion（20% 重量，低级脂肪醇和水，Sigma-Aldrich，美国），然后在去离子水中对膜进行水合 30 分钟。设备在室温下风干并在使用后存放在培养皿中。要使用该设备，需要将 3 μL 样品移液到样品通道中，然后用去离子水使设备饱和。通过在样品通道上施加 150 V/cm 的电压 15 分钟来诱导 ICP。在此步骤之后，使用直立荧光显微镜（Axiophot，德国卡尔蔡司公司）捕获绿色（dsDNA）和红色（ssDNA）荧光图像。捕获的图像在 ImageJ 中处理，并使用 Matlab 中的书面脚本进行数据量化。
1。单细胞定量表达报告（SCQERS）
●将细胞和质粒混合到预燃烧的（ICE）1毫米比色杯以进行电穿孔（例如），非常小心地避免气泡（如果需要时，可以避免使用气泡，以避免气泡，移液器<25 ul）。将比色杯保持在冰上。●电塑料（例如Biorad Gene脉冲器，2 kV，200 𝛀，25 UF）。点击比色杯以消除气泡，并先用吸收纸从比色杯中擦拭冰/水。时间常数应在4.0至4.3 ms范围内。短时常数带有火花，表明出现问题。如果发生这种情况，请重复，减少质粒的量并注意气泡。●成功进行电穿孔后，立即添加475 UL恢复介质（例如SOC），转移到1.5 ml管，并在37℃下摇动。●串行稀释电穿孔，板块在氨苄青霉素板上的转化为0.1％，以评估转化效率。●您可以将电穿孔的细胞保持在4C，直到确认高效率，也可以用氨苄青霉素在LB中过夜（通常在250毫升250 mL烧瓶中，37C，37C，轨道振荡器200 rpm）。●确认高效率后（您应该在0.1％板中看到> 1000个菌落，对应于1m> 1m的转化剂），制作甘油库存以备将来使用，并通过mini或MIDI Prep纯化质粒或MIDI PREP，适用于下游克隆
DNA提取方案 - 苯酚：氯仿
isaamlic。以氯仿和等质醇混合物的含量和苯酚体积的一半和一半的量子和一半。.ex：对于5个样品，等分试样2 ml苯酚（1,250 +备用）和等分试样5 ml Isoamlic混合物 +氯仿（200μLISO +4800μL氯仿）。7。等分试样500μL（有时是样品数量）异丙醇酒精。8。移液器250μl苯酚，然后250μl氯仿 +同含同生醇。通过反转摇动。9。摇动30分钟（75速），然后以最高速度离心5分钟。10。小心地卸下上清液（〜400μl），请勿卸下所有内容，以免删除界面。11。与上一步一样，加入400μl氯仿混合物 +同醇酒精，然后通过反转和离心摇动。12。编程4°C的离心机13。卸下上清液，加入500μl异丙醇，通过反转均匀，以13000 g至15分钟的离心液均匀。14。为离心机编程室温。15。删除上清液，请注意不要去除颗粒，加入1毫升的70％乙醇，通过观察颗粒和离心剂在室温下5分钟到13000 g，一两次均质。16。除霜超纯水。17。除去所有酒精，然后将其干燥约15分钟，然后将沉淀物重新降低150μl的超纯水。在冰箱中过夜，第二天将其保持-20°C
无需仪器的蛋白质微阵列制造，实现准确的亲和力测量
摘要：蛋白质微阵列已成为药物和生物标志物开发以及诊断等各个领域的一种有吸引力的工具。因此，以微阵列形式进行多重结合亲和力测量变得至关重要。基于微阵列的蛋白质测定的制备依赖于探针溶液的精确分配，以有效固定在活性表面上。微阵列制造所需的设备成本过高，并且需要经过培训的人员来操作高复杂性的机器人点样器，这对研究人员来说是重大的不利因素，尤其是对于资源有限的小型实验室而言。在这里，我们提出了一种低成本、无需仪器的分配技术，通过该技术，熟悉微量移液的用户可以手动创建多重蛋白质测定，与机器人点样测定相比，该测定的捕获效率和噪音水平有所提高。在本研究中，我们使用干涉反射成像传感器平台，通过分析与抗 α -乳清蛋白抗体相互作用获得的结合动力学，比较了手动和机器人分配 α -乳清蛋白探针点的效率。我们表明，通过微量移液器手动点样制备的蛋白质阵列达到并超过了通过最先进的机器人点样器制备的蛋白质阵列的性能。与通过平均 75 个机器人点（对应于相同有效传感器表面积）获得的数据相比，这些无需仪器的蛋白质测定具有更高的结合信号（改善了约 4 倍）和结合曲线中的信噪比 (SNR) 提高了约 3 倍。我们展示了以 24 多路复用芯片格式确定抗原-抗体结合系数的潜力，测量误差小于 5%。
8-OHdG DNA 损伤定量直接试剂盒（比色法）
用途：EpiQuik™ 8-OHdG DNA 损伤定量直接试剂盒（比色法）适用于直接使用从任何物种（例如哺乳动物、植物、真菌、细菌和病毒）中分离的 DNA 检测氧化 DNA 损伤（8-OHdG）状态，这些 DNA 以多种形式存在，包括但不限于培养细胞、新鲜和冷冻组织、石蜡包埋组织和体液样本。输入 DNA：每次检测的 DNA 量可以为 100 ng 至 300 ng。为了获得最佳定量，输入 DNA 量应为 300 ng，因为基础 8-OHdG 通常少于总 DNA 的 0.01%。起始材料：起始材料可以包括各种组织或细胞样本，例如来自烧瓶或微孔板培养细胞的细胞、新鲜和冷冻组织、石蜡包埋组织、血液、体液样本等。内部控制：该试剂盒提供阴性和阳性 DNA 对照。可以绘制标准曲线（范围：5 至 200 pg 的 8-OHdG）或使用单一数量的 8-OHdG 作为阳性对照。因为 8-OHdG 含量在不同组织、正常和患病状态以及治疗和未治疗条件下会有所不同，所以建议运行重复样本以确保产生的信号得到验证。该试剂盒将允许用户量化 8-OHdG 的绝对量并确定两个不同 DNA 样本的相对 8-OHdG 状态。注意事项：为避免交叉污染，请小心地将样品或溶液移液到试纸条孔中。使用防气溶胶移液器吸头，并在每次液体转移之间更换吸头。在整个过程中都要戴手套。如果手套和样品接触，请立即更换手套。
无需仪器的蛋白质微阵列制造以实现精确的...
摘要：蛋白质微阵列已成为药物和生物标志物开发以及诊断等各个领域的一种有吸引力的工具。因此，微阵列格式的多重结合亲和力测量变得至关重要。基于微阵列的蛋白质测定的制备依赖于探针溶液的精确分配，以实现在活性表面上的有效固定。设备成本过高，需要经过培训的人员来操作高复杂性的机器人点样器进行微阵列制造，这对研究人员来说是重大的障碍，尤其是对于资源有限的小型实验室。在这里，我们提出了一种低成本、无需仪器的分配技术，通过该技术，熟悉微量移液的用户可以通过手动创建多重蛋白质测定，与机器人点样测定相比，该测定显示出更好的捕获效率和噪音水平。在本研究中，我们使用干涉反射成像传感器平台，通过分析与抗 α-乳清蛋白抗体相互作用获得的结合动力学，比较了手动和机器人分配 α-乳清蛋白探针点的效率。我们表明，通过微量移液器手动点样制备的蛋白质阵列性能达到甚至超过了最先进的机器人点样器制备的蛋白质阵列的性能。与通过平均 75 个机器人点（对应于相同有效传感器表面积）获得的数据相比，这些无需仪器的蛋白质测定具有更高的结合信号（约 4 倍改善）和结合曲线中约 3 倍更好的信噪比 (SNR)。我们展示了在 24 复用芯片格式中确定抗原抗体结合系数的潜力，测量误差小于 5%。
脂质纳米粒子：一种用于临床应用的新型基因传递技术
脂质纳米粒 (LNP) 是一种新兴的药物制剂，可包覆核酸和蛋白质等生物分子，以及由两者制成的复合物 [ 1 – 3 ]。LNP 呈球形，在电子显微镜下可见。治疗性 LNP 的直径小于 100 纳米，由脂质和核酸等有效载荷组成。LNP 的最初想法源于脂质体，这是一种由磷脂和胆固醇制成的简单得多的脂质囊泡，体积比 LNP 大。脂质体是根据脂质双层理论基于细胞膜建模的。脂质体已用于研究水溶液中脂质的物理化学，并已研究其未来临床用途。为了制备脂质体，通常用旋转蒸发器干燥脂质，悬浮在水溶液中，然后用超声处理以获得呈乳状悬浮液的多层囊泡。现代的 LNP 更加复杂，主要由四种不同的脂质制成（表 1）。LNP 的制备程序可能与这些类似，但根据最近的研究结果进行了优化 [ 4 ]。在 LNP 制备过程中，脂质和 RNA 分别溶解在乙醇和酸性水溶液中。接下来，它们用工业用的自动化微流体设备或研究用的移液器混合。然后，通过透析去除乙醇。在大多数工业应用中，需要进行几种色谱纯化程序来提高最终 LNP 产品的真实性。根据 RNA 包封率、LNP 的直径、其 Zeta 电位和其他生物物理参数来检查最终的 LNP 成分。Zeta 电位表示 LNP 的稳定性。为了优化这些获得的参数，使用多分散性指数 (PDI) 来测量包括 LNP 在内的大分子的异质性；小于 0.1 的值通常被认为是优化条件。在配制 LNP 时，脂质的使用量远远超过 RNA（重量比约为 10:1）。