水传播植物的致病真菌和卵菌是温室生产系统中的主要威胁。对这些病原体的早期检测和量化将使我们能够及时治疗所需的经济和生物阈值,从而改善有效的疾病管理。在这里,我们使用了牛津纳米孢子的扩增子来分析从用于生长番茄,黄瓜和Aeschynanthus sp的温室收集的灌溉水中的微生物群落。真菌和卵形群落的特征是使用放大整体内部转录垫片(ITS)区域的引物。为了评估小兵测序的灵敏度,我们将串行稀释的模拟DNA刺激到图书馆制备之前从温室水样品中分离的DNA中。真菌和卵骨读数的相对丰盛在温室灌溉水中和来自番茄番茄的设置中的水样中与众不同。在相应的连续稀释样品中衍生出的源自真菌和卵形模拟群落的序列读数是成比例的,因此确认了最小值扩增子测序对环境监测的适用性。通过使用尖峰标准来测试使用小兵测试定量的可靠性,我们发现样品中尖峰ins的检测受到了真菌或卵形DNA的背景量的高度影响。我们观察到,与较长的尖峰(> 790bp)相比,我们大多数稀释液的长度较短(538bp)的尖峰在我们的大部分稀释液中产生。此外,相对于稀释序列,序列读数不均匀,并且在具有最高DNA浓度的背景样品中最不可检索,这表明性能的动态范围狭窄。我们建议对小兵测序进行连续的基准测试,以改善未来快速植物性诊断和监测的定量元编码工作。
•自动采样和种植系统:Diluflow Pro扩张器,智能稀释剂W,Diluwel和dilumat,均匀的Bagmixer SW,脉冲液,胶状器和Smasher,用于连续稀释稀释稀释稀释稀释稀释液和连续稀释剂的系统;螺旋播,易生螺旋稀释和涡流2W•快速计数方法:体外和易发盘(经过认证的参考微生物); Petrifilm(斑块和高级阅读器),干platos,紧凑型干燥(板和读取器);快速YM琼脂,Quanti-P/A Clostcult; Colilert-18,Enterolert-DW,Pseudalert和Quanti-Tray; milliflex量子;简单;扫描1200,球体和Quantica 500殖民地。
该测试涉及将特定数量的细菌引入抗菌治疗的塑料上,并在未经治疗的情况下引入塑料样品。两个塑料测试斑块均覆盖以防止蒸发并在95°F和90%的相对湿度(促进细菌生长的条件)24小时内孵育。在塑料表面孵育结束时,使用一系列稀释液和琼脂孵育和定殖对细菌进行计数。该结果据报道是在处理过的抗菌和未处理样品之间的细菌减少。使用金黄色葡萄球菌(金黄色葡萄球菌)和大肠杆菌(大肠杆菌)作为两种细菌分类(革兰氏阳性和革兰氏阴性)的代表的ISO标准参考,但也可以测试不同的微生物。
1. 描述 VFC 计划要求。2. 描述 VFC 计费实践。3. 描述 VFC 疫苗管理实践。4. 描述缅因州免疫计划执行的 VFC 相关现场访问的目的 5. 定义和解释冷链管理。6. 描述疫苗储存和处理的常规和紧急程序的组成部分。7. 描述主要和备用协调员以及其他工作人员在疫苗储存和处理中的作用。8. 描述正确的疫苗储存和温度监测设备。9. 描述常规推荐疫苗的正确疫苗和稀释液储存、处理和处置。10. 确定疫苗储存不当时应采取的措施。
1. 描述 VFC 计划要求。2. 描述 VFC 计费实践。3. 描述 VFC 疫苗管理实践。4. 描述缅因州免疫计划执行的 VFC 相关现场访问的目的 5. 定义和解释冷链管理。6. 描述疫苗储存和处理的常规和紧急程序的组成部分。7. 描述主要和备用协调员以及其他工作人员在疫苗储存和处理中的作用。8. 描述正确的疫苗储存和温度监测设备。9. 描述常规推荐疫苗的正确疫苗和稀释液储存、处理和处置。10. 确定疫苗储存不当时应采取的措施。
AcrIIA3 可恢复 CRISPR3 免疫菌株对噬菌体 2972 的敏感性。 (A)将 10 倍稀释的噬菌体 2972(从左到右为 10 0 至 10 ‐ − 7)点在噬菌体敏感菌株 S. thermophilus DGCC7710 及其 CRISPR 免疫衍生物上,这些菌株携带空载体 pTRKL2 (EV) 或表达 AcrIIA3 (AcrIIA3 CHPC640 ) 或 AcrIIA5 (AcrIIA5 D1126 ) 的载体。我们在干覆盖层上点了 5 μl 每种噬菌体稀释液。显示了至少三个生物学重复的代表性图像。 (B)与仅携带空载体的菌株相比,携带 Acr(未免疫、免疫或 CRISPR 免疫)的菌株噬菌体 2972 滴度的恢复倍数。误差线显示平均值±SD(n=3个生物学重复)。
此处介绍的菌株先前是在2016年从ADE土壤和两个不同的普通豆品种的实验中分离出来的,表现出对土壤传播病原体的抗氧体的抗性水平。该实验是在圣保罗大学农业核能中心进行的(22°42'27.60“ S,47°38'41.17” W)(4)。植物,并摇动根以去除松散的粘附土壤。用无菌刷子收集牢固的土壤,并被认为是根际土壤。用于微生物分离,将1 g根际土壤与9 ml盐水溶液(8.5 g L-1 NaCl)混合。串行稀释液(10 -1至10 -6),然后转移到国王中板上(5)。在25°C孵育48小时后,使用条纹板法分离了菌落。从分离株中提取总DNA。
如果将抑制剂化合物溶于水中,则使化合物的溶液比1倍测定缓冲液中的最终浓度高5倍(因为您将在25 µL反应中添加5 µL)。然后,从该溶液到您首选的浓度中的1倍测定缓冲液中进行一系列稀释液。如果将抑制剂化合物溶解在DMSO中,则比您要在DMSO中测试的最高浓度高100倍。然后在1倍测定缓冲液中进行20倍稀释(在此步骤中,化合物浓度比最终浓度高5倍,而DMSO浓度为5%)。然后,从该溶液到您首选的浓度中的5%DMSO中的5%的DMSO稀释。由于将5 µL的化合物溶液添加到25 µL反应中,因此所有反应中DMSO的最终浓度均为1%。3。准备DNA pol theta溶液。
图2。生物生物的现成1 kb DNA梯子以两倍的稀释液在1%琼脂糖凝胶上加载,范围从200 ng到3.125 ng总梯子。标记了每个车道中1500 bp带(由箭头标记)的质量。将凝胶用Dnazure®蓝色核酸凝胶染色染色30分钟,然后使用白色LED灯开发可见的蓝色DNA波段30分钟。左:使用带有白光转换器板和Visi-Blue™滤光片的UV Transilluminator在UVP Geldoc-It®成像系统上成像的可见蓝带。右:在700 nm通道中的Li-Cor®Odyssey®近红外成像系统上成像的近红外荧光。将凝胶面朝下成像,增益设置为8。dnazure®染色带也在Odyssey®800nm通道中的荧光(未显示)。此凝胶在获取这些图像之前,将其存储在台式上的染色缓冲液中六周。