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利用无针注射系统改善 DNA 疫苗输送
摘要：DNA 疫苗与其他类型的疫苗相比具有固有的优势，包括安全性、快速设计和构建、易于制造和快速生产以及热稳定性。然而，通过针头和注射器输送的候选 DNA 疫苗的一个主要缺点是与 DNA 的低效细胞摄取相关的较差的免疫原性。这种摄取至关重要，因为目标疫苗抗原是在细胞内产生的，然后呈递给免疫系统。已经采用了多种技术来增强 DNA 疫苗的免疫原性和保护效力，包括物理输送方法、分子和传统佐剂以及基因序列增强。无针注射系统 (NFIS) 是一种有吸引力的替代方案，因为它可以诱导强大的免疫原性、增强的保护效力并消除针头。这些优势使该领域取得了里程碑式的成就，一种仅通过 NFIS 输送的针对 COVID-19 的 DNA 疫苗被批准在紧急情况下限制使用。在本综述中，我们讨论了 DNA 疫苗的物理递送方法，重点介绍了市售的 NFIS 及其安全性、免疫原性和保护效力。正如所讨论的，与针头和注射器相比，NFIS 递送的预防性 DNA 疫苗往往会诱导不低于电穿孔的免疫原性和增强的反应。
Minitouch 3.8 ERA系统（Minitouch系统...
a。怀孕或渴望保留生育能力的人。消融后的怀孕对母亲和胎儿都可能是危险的。b。谁知道/怀疑的子宫癌或子宫内膜的恶性疾病，例如未解决的腺瘤增生。c。在任何解剖学状态（例如，先前的经典剖宫产史或透壁肌切除术的病史，包括在微米触摸手术之前立即进行的宫腔镜和/或腹腔镜肌瘤切除术）或病理状况（例如，需要长期的医疗治疗），可能导致肌层D的弱化。具有子宫内膜消融和/或切除术的病史（包括在小型触摸程序之前立即执行的子宫内膜消融/切除），无论其执行方式如何。重复消融可能会导致严重的患者受伤。e。患有活跃的生殖器或尿路感染或骨盆炎症性疾病的人。f。患有异常，阻塞或穿孔的腔体的人。在这种空腔中消融可能会导致严重伤害。g。患有宫内植入物的人，例如目前到位的宫内装置（IUD）。h。谁没有诊断为阴道出血。子宫腔长的长度小于4厘米。手机可能无法充分部署，系统可能无法启动能源输送。j。他的子宫/骨盆解剖学异常，例如冷冻骨盆。
生物肥料速率对菠菜的生长和发育的影响（Spinacia oleracea L.）
摘要。印度东北地区拥有多种营养和健康促进的当地蔬菜。其中之一是索拉尼姆·阿西奥皮（Solanum aethiopicum l），具有丰富的营养和生物活性化学物质的来源。它具有多种药理益处，并用于土著医学来治疗各种疾病。尽管如此，农作物在短暂的保质期（3-5天）中非常易腐烂，这显着造成了后票的损失。用于延长作物的保质期的技术是冷冻，干燥和制冷的。该作物可以在低温下储存约10-12 o的C.果实在穿孔的聚乙烯袋中的水平最长。重要的材料包括聚乙烯，聚丙烯和聚苯乙烯通常使用，并且可以涂层以提高作物的保质期。农作物在制造诸如泡菜，脱水产品等增值产品等产品方面具有巨大的潜力。然而，由于缺乏意识和市场有限的市场，与作物的研究很少，因此与作物的产生相关的问题并没有得到平等的关注。考虑到农作物具有许多优势，该作物的普及至关重要，但是适应水果的苦味和风味对消费者来说可能具有挑战性。消费者的态度，观点和愿意支付经过特定收获后程序的产品需要进一步调查。超越这些障碍需要适当的培养技术，加工，增值和营销。
1。单细胞定量表达报告（SCQERS）
●将细胞和质粒混合到预燃烧的（ICE）1毫米比色杯以进行电穿孔（例如），非常小心地避免气泡（如果需要时，可以避免使用气泡，以避免气泡，移液器<25 ul）。将比色杯保持在冰上。●电塑料（例如Biorad Gene脉冲器，2 kV，200 𝛀，25 UF）。点击比色杯以消除气泡，并先用吸收纸从比色杯中擦拭冰/水。时间常数应在4.0至4.3 ms范围内。短时常数带有火花，表明出现问题。如果发生这种情况，请重复，减少质粒的量并注意气泡。●成功进行电穿孔后，立即添加475 UL恢复介质（例如SOC），转移到1.5 ml管，并在37℃下摇动。●串行稀释电穿孔，板块在氨苄青霉素板上的转化为0.1％，以评估转化效率。●您可以将电穿孔的细胞保持在4C，直到确认高效率，也可以用氨苄青霉素在LB中过夜（通常在250毫升250 mL烧瓶中，37C，37C，轨道振荡器200 rpm）。●确认高效率后（您应该在0.1％板中看到> 1000个菌落，对应于1m> 1m的转化剂），制作甘油库存以备将来使用，并通过mini或MIDI Prep纯化质粒或MIDI PREP，适用于下游克隆
通过将CRISPR/CAS9系统电穿孔到Zygotes的一步生成多个基因编辑的猪，以减少异种抗原生物合成
摘要：异种抗原引起过度急性排斥并限制了种间异种移植的成功。因此，参与异种抗原生物合成的基因，例如GGTA1，CMAH和B4GALNT2，是改善异种移植结果的关键靶标。在这项研究中，我们引入了一种CRISPR/CAS9系统，同时使用电穿孔来靶向GGTA1，CMAH和B4GALNT2，以一步一代生成多个基因编辑的猪而没有异种抗原。首先，我们优化了针对GGTA1和CMAH的引导RNA（GRNA）相对于基因编辑的效率，并将电穿孔的胚胎与优化的GRNA和CAS9转移到受体Gilts中。接下来，当GGTA1，CMAH和B4GALNT2同时靶向GGTA1，CMAH和B4GALNT2时，我们优化了CAS9蛋白的浓度，并使用优化的条件同时靶向基因。我们实现了GGTA1 / CMAH双重编辑的猪和GGTA1 / CMAH / B4GALNT2三重编辑的猪的一步生成。免疫组织学分析表明异种抗原的下调。然而，这些多个基因编辑的猪是遗传镶嵌物，未能敲除一些异种抗原。尽管应解决镶嵌性，但电穿孔技术可能会成为旨在改善猪至人类异种移植的猪中一步生成多个基因修饰的主要方法。
一种新的研究相干G波段振荡的方法
g-band振荡（GBO）是由快速加速的中间神经元（FSI）生成的，对于认知功能至关重要。异常，并且与认知障碍密切相关。但是，基本机制知之甚少。研究GBO在离体制备中的GBO由于需求量很高而具有挑战性，并且需要连续的牛至递送到组织。结果，通常会在非常年轻的动物或最大化氧气供应但妥协空间分辨率的实验设置中研究GBO。因此，对GBO在不同的大脑结构内部和不同动物中的脑组织之间的相互作用有一个深刻的了解。为了解决这些局限性，我们开发了一种新的方法，用于使用60频道的，穿孔的微电极阵列（PMEAS）研究成熟动物的离体海马切片中的GBO。pmeas增强了电生理记录中的氧气递送并增加了空间分辨率，从而实现了离散大脑结构内GBO同步的全面分析。我们发现，在海马内的神经途径上横断了Schaffer侧支，损害了CA1和CA3子场之间的GBO相干性。此外，我们通过研究表现出抑制性突触功能障碍的ANK3突变小鼠模型中的GBO相干性来验证我们的方法。我们发现，在这些突变小鼠的CA3子场中，GBO相干性保持完整，但在CA1子场内和之间受损。总体而言，我们的方法具有表征Animal模型的离体脑部切片中GBO的巨大潜力，从而增强了我们对精神疾病中网络功能障碍的理解。
重新组合：使用同源重组的细菌基因工程
要进行重新组合，需要表达噬菌体重组系统的细菌菌株。噬菌体可以从其自己的启动子或异源调节启动子中表达。从其内源性噬菌体启动子中表达基因的基因赋予了紧密调控和坐标表达的优势，从而导致更高的重组频率。这是一个重要的优势，因为在许多情况下，高重组频率对于获得所需的重组至关重要。该单元的作者通常使用位于大肠杆菌染色体上的有缺陷的预言，最近将该预言的关键要素转移到了许多不同的质粒中（Thomason等，2005；另请参见评论）。在此预言系统中，噬菌体重组功能受到肉毒噬菌温度敏感的C I 857抑制剂的控制。在低温（30至34 C）下，重组基因会严重抑制，但是当细菌培养的温度转移到42 C时，它们会从P L启动子中高水平表达。在Datsenko和Wanner（2000）的质粒构建体中，重组基因位于质粒上，并从阿拉伯糖启动子表示。DATSENKO和WANNER质粒以及某些作者的质粒构建体具有DNA复制的温度敏感性。基于质粒的系统具有迁移率的优势 - 它们可以在不同的大肠杆菌菌株中转移到鼠伤寒沙门氏菌和其他革兰氏阴性细菌。但是，如果重新组合针对质量，则使用位于细菌染色体上的预言系统更容易。在诱导重组函数后，将修饰的DNA（DS）（DS）PCR产物或合成单链（SS）寡核苷酸（Oligo）引入到预防菌株中，通过电穿孔引入预防菌株中。通过选择或筛选存活电穿孔的细胞种群获得重新组件。一旦获得了所需的构建体，就可以通过另一个重组去除预言。或者，染色体上的工程等位基因可以通过P1转导将不同的宿主移动到另一个宿主中。具有温度敏感复制起源的质粒可能会因在适当温度下的生长而从重组菌株中丢失。
o r i g i n a l r e s a r c h靶向PD-L1 mAb的靶向纳米泡与阿霉素在肝癌中的协同肿瘤抑制剂
目的：超声纳米泡（NBS）可以杀死肿瘤细胞，这些细胞是通过超声进行气蚀和声音穿孔的作用介导的，而作为新型药物载体，生物材料修饰的NBS在目标区域释放了药物。在这项工作中，同时准备由生物素 - 链霉毒素桥接的超声NB，以配备编程的死亡配体1个单克隆抗体（PD-L1 MAB）和阿霉素（DOX）和阿霉素（dox），这些抗体（dox）是免疫检查点抑制剂（ICIS）和化学疗法，且索状的囊肿，伴随性疗法，且体外疗法，伴随性疗法，伴随性疗法，伴随性疗法，并替代了Synygize Synergiender to Synergiender to Synergized Synergiender to Synergiender to Synergiender， （SDT）。方法：PD-L1 mAb/dox NB，使用桥接亲和生物素（BRAB）技术作为桥梁，是通过薄膜水合和机械振荡制备的，用于靶向靶向生物素化的PD-L1 mAb和dox。在体外和体内进行了PD-L1 mAb/dox NB的PD-L1 mAb/dox NB的药物旋转研究。在H22 HEPATOMA模型的皮下移植肿瘤中研究了超声介导的PD-L1 mAb/dox-NB的抗肿瘤作用，并研究了协同肿瘤抑制的机理。结果：体外靶向实验的数据，对比增强的超声成像（CEU），小动物成像系统（IVIS）的体内成像以及冷冻切片表明PD-L1 MAB/DOX-NBS在肿瘤中具有良好的靶向聚集。通过观察肿瘤抑制率，组织细胞凋亡以及与凋亡相关的基因和蛋白质表达，PD-L1 MAB/DOX-NBS组显示出最佳的免疫疗法作用，其肿瘤体积和质量抑制率分别为69.64％和75.97％（P <0.01）。因此，阻止PD-1/PD-L1途径可以改善免疫细胞的肿瘤杀伤能力。与DOX诱导的肿瘤细胞凋亡和免疫原性细胞死亡（ICD）结合时，抗肿瘤免疫细胞因子进一步增强。结论：总之，超声介导的PD-L1 mAb/dox-NB显示出明显的协同抗肿瘤作用，为HCC提供了潜在的合并免疫疗法策略。关键字：超声靶向纳米泡破坏，肿瘤免疫治疗，免疫检查点抑制剂，免疫原性细胞死亡，药物输送
产品特征摘要
不良影响：老年人对NSAID的不良反应频率增加，尤其是胃肠道出血和穿孔，这可能是致命的（请参阅第4.2节）。呼吸道：支气管痉挛可能是在支气管哮喘或过敏性疾病史的患者中引起的。其他NSAID：应避免使用Nurofen 200mg涂层的片剂，其中包括环氧酶-2选择性抑制剂，包括伴随的NSAID。SLE和混合结缔组织疾病：由于无菌性脑膜炎的风险增加，全身性红斑狼疮和混合结缔组织疾病（请参阅第4.8节）。肾脏：作为肾功能的肾功能障碍可能会恶化（请参阅第4.3和4.8节）。肝功能障碍：肝功能障碍（请参阅第4.3和4.8节）。女性生育能力受损：有限的证据表明，抑制环氧酶/前列腺素合成的药物可能会导致女性生育能力损害，从而影响排卵。这对于撤离治疗是可逆的。胃肠道效应：NSAID应谨慎对患有胃肠道疾病史（溃疡性结肠炎，克罗恩病）的患者进行谨慎，因为其病情可能会加剧（请参阅第4.8节 - 不良影响）。gi出血，溃疡或穿孔可能是致命的，在治疗期间的任何时间都有所有NSAID报告，有或没有任何警告症状或以前的严重GI事件史。这些患者应开始以最低剂量的可用剂量进行治疗。随着NSAID剂量的增加，胃肠道出血，溃疡或穿孔的风险更高，患有溃疡病史的患者，尤其是在出血或穿孔中复杂的话（请参阅第4.3节），以及老年人。与保护剂的组合疗法（例如米索前列醇或质子泵抑制剂）应考虑这些患者，以及需要伴随的低剂量阿司匹林或其他可能增加胃肠道风险的药物的患者（见下文和4.5）。具有GI毒性史的患者，尤其是在老年人时应报告任何异常的腹部症状（尤其是GI出血），尤其是在治疗的初始阶段。应谨慎接受接受伴随药物的患者，这些患者可能会增加溃疡或出血的风险，例如口服皮质类固醇，例如WARFARIN，选择性5-羟色胺再摄取抑制剂或抗植物剂，例如Apperin，例如第4.5节）。在接受Nurofen 200mg涂层片剂的患者发生GI出血或溃疡时，应撤回该治疗。心血管和脑血管影响：在开始治疗高血压和/或心力衰竭的患者之前，需要谨慎（与医生或药剂师进行讨论），因为已经报道了与NSAID治疗有关的液体保留，高血压和水肿。
CRISPR-CAS9核糖核蛋白的包装递送加速基因组编辑
图1：用荧光相关光谱（FCS）量化CAS9 RNP核浓度a）工作流的实验示意图，以量化编辑所需的CAS9 RNP核浓度。b）Cas9 rnp或gRNA的扩散时间，在每个细胞中，在Hela细胞中传递，并在24小时（2.0 vs 1.0 ms，p值= 0.0004）时测量每个点，代表用两种组件扩散拟合模拟的单个细胞中平均扩散时间（图。s1）。fcs在MS中提供的扩散时间，每个FCS条件中提供至少两个生物学重复（平均值±SEM）。c）用Cas9 RNP电穿孔的HeLa细胞的FCS分析。Cas9 RNP的核浓度是剂量的函数（每个细胞Cas9）。 每个点表示单个细胞中的浓度。 fcs值在NM中提供，每个FCS条件至少有两个生物学重复（平均值±SEM）。 通过将FCS跟踪与两个组件3D扩散方程拟合（有关详细信息，请参见方法），从而得出了所有浓度值和扩散时间。 d）（左轴）CAS9 RNP与剂量的平均核浓度显示出很强的线性相关性。 （r 2 = 0.96）。 （右轴）由FCS计算出的核浓度值和HeLa核的体积（690μm3）估计的Cas9数量（46）。 e）HELA，U2OS和HEK293T细胞的核浓度的FCS分析。 fcs值在NM中提供，每个FCS条件至少有两个生物学重复（平均值±SEM）。Cas9 RNP的核浓度是剂量的函数（每个细胞Cas9）。每个点表示单个细胞中的浓度。fcs值在NM中提供，每个FCS条件至少有两个生物学重复（平均值±SEM）。通过将FCS跟踪与两个组件3D扩散方程拟合（有关详细信息，请参见方法），从而得出了所有浓度值和扩散时间。d）（左轴）CAS9 RNP与剂量的平均核浓度显示出很强的线性相关性。（r 2 = 0.96）。（右轴）由FCS计算出的核浓度值和HeLa核的体积（690μm3）估计的Cas9数量（46）。e）HELA，U2OS和HEK293T细胞的核浓度的FCS分析。fcs值在NM中提供，每个FCS条件至少有两个生物学重复（平均值±SEM）。在补充表2中报告了FC的精确值，包括实验和生物学重复，平均值和SEM