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Trastuzumab Deruxtecan 在 HER2 突变型非小细胞肺癌中的应用...
鲍勃·T·李（Bob T. Li），医学博士，MPH，Egbert F. Smit，医学博士，博士MD Saltos，Enriqueta Felip，MD，Ph.D.医学博士Avad Shahidi，医学博士David Planchard和MD的PasiA.Jänne， DESTINY-Lung01 试验研究人员的博士学位*
KRAS 突变型肺癌：靶向分子和免疫途径、治疗优势和限制
摘要：RAS 突变是人类癌症中最常见的致癌突变之一。在 RAS 突变中，KRAS 的频率最高，几乎 30% 的非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者都存在该突变。肺癌是癌症中死亡的首要原因，因为它极具侵袭性且诊断较晚。高死亡率是人们进行大量研究和临床试验以发现针对 KRAS 的适当治疗药物的原因。这些方法包括：直接针对 KRAS；合成致死伴侣抑制剂；针对 KRAS 膜关联和相关代谢重组；自噬抑制剂；下游抑制剂；以及免疫疗法和其他免疫方式，如调节炎症信号转录因子（例如 STAT3）。不幸的是，由于包括共突变在内的多种限制机制，其中大多数的治疗效果有限。在这篇综述中，我们计划总结正在研究的过去和最近的疗法，以及它们的治疗成功率和潜在限制。这将为改进治疗这种致命疾病的新药物的设计提供有用的信息。
奖学金名称：新型膜靶向药物可克服 RAS 突变型 NSCLC 的耐药性
本博士项目旨在开发针对 RAS 突变型非小细胞肺癌 (NSCLC) 的新型疗法，这些癌症从传统靶向治疗中获益有限，或者完全缺乏此类治疗。重点将放在不同于传统抑制剂的创新方法上，例如但不限于抗体药物偶联物 (ADC) 和双特异性抗体。事实上，这些药物已被证明可以延长其他特定亚群患者的寿命并改善生活质量。研究计划将包括确定 RAS 突变型癌症特有的靶点，无论是在未经治疗的情况下，还是在初始治疗后产生耐药性的肿瘤中。此外，该博士项目将包括一个验证流程，以发现和测试新的潜在治疗剂，该流程应在我们机构的研究实验室中进行。本博士提案的一个基本部分是开发方法来表征新开发药物随时间推移的耐药性，目的是为未来的临床试验对患者进行分层。此外，该项目应包括以患者从生物学和临床角度经历的旅程为中心的明确工作流程。
CRISPR/Cas9 基因敲除及随后的野生型和突变型基因拯救的改进策略
将荧光标记 mOrange 插入到流行的 pLentiCrispr-V2 中，以创建包含嘌呤霉素选择和荧光标记的 pLentiCrispr-V2-mOrange (V2mO)，使病毒产生和靶标转导可见。用该质粒和适当的向导 RNA (gRNA) 包装的慢病毒成功敲除了人胃癌细胞系中的 RhoA、Gli1 和 Gal3 基因。Cas9-gRNA 编辑效率可以直接从 Cas9-gRNA 转导细胞中 gRNA 区域周围的短聚合酶链反应产物的 Sanger 电泳图来估计。必须对转导的靶细胞池进行单克隆以建立稳定的敲除克隆。仅当 gRNA 结合的 cDNA 被三个核苷酸修饰而氨基酸序列保持不变时，才能成功将野生型（RhoA 和 Gal3）和突变型（RhoA.Y42C）基因拯救到敲除细胞中。在 Gal3 基因中观察到严格的靶向 CRISPR/Cas9 编辑，但在 RhoA 基因中未观察到，因为 RhoA.Y42C 已经在 gRNA5 结合位点出现核苷酸变化。总之，我们改进的策略增加了这些优势：在流行的慢病毒系统中添加可视化标记、监测慢病毒的生产和转导效率、通过荧光激活细胞分选在靶细胞中分选 Cas9+ 细胞、通过 gRNA 结合位点周围的短 PCR 电泳图直接估计靶细胞池的基因编辑效率、以及在敲除细胞中成功拯救野生型和突变型基因，通过修饰 cDNA 克服 Cas9 编辑。
突变型 p53 DNA 结合的尿素变性、锌结合和 DNA 结合试验
请引用本文：Ha, J. 等人（2021 年）。突变型 p53 DNA 结合域和全长蛋白的尿素变性、锌结合和 DNA 结合试验。Bio-protocol 11(20): e4188。DOI：10.21769/BioProtoc.4188。
伴有环状铁粒幼细胞的突变型骨髓增生异常综合征
致癌突变会使转录程序失调，导致突变细胞依赖某些分子调节剂或信号通路。癌细胞所依赖的调节剂或通路因细胞类型和受突变影响的细胞状态动态而异 (1)。一些可以诱导基于特定细胞身份的形态学和临床表型的血液学改变的最佳例子是剪接因子 SF3B1 (SF3B1 MT) 中的热点突变。SF3B1 MT 是骨髓增生异常综合征 (MDS) 中高度复发的起始事件，出现在最原始的造血干细胞 (HSC；参考文献 2) 中。尽管在不同的造血细胞类型中发现 (3)，SF3B1 MT 优先使红系祖细胞失调，并且是 MDS 亚型的标志，该亚型的特征是骨髓 (BM) 中环状铁粒幼细胞 (RS) 的积累，即 MDS-RS (4-7)。多项研究已经剖析了 SF3B1 MT 调节 MDS-RS 中 RNA 剪接的分子机制。SF3B1 MT 诱导的与血红素生物合成和线粒体铁转运有关的基因异常剪接导致红系细胞中铁的异常沉积，从而导致
已发表版本引文 (APA)：Awada, G., & Neyns, B. (2022)。BRAFV600 突变以外的遗传变异黑色素瘤：治疗和新药
最新发现对于 NRAS Q61 突变型黑色素瘤患者，下游 MEK 抑制已显示出一些尽管较低活性。早期试验中，MEK 抑制剂与新型 RAF 二聚体抑制剂（如贝伐非尼）或 CDK4/6 抑制剂联合使用对 NRAS 突变型黑色素瘤具有良好的活性。对于非 V600 BRAF 突变型黑色素瘤患者，尽管缺乏大规模前瞻性试验，但 MEK 抑制（联合或不联合 BRAF 抑制）似乎都是有效的。由于非 V600 BRAF 突变体以二聚体的形式发出信号，因此新型 RAF 二聚体抑制剂也在这种环境下接受研究。MEK 抑制正在 NF1 突变型黑色素瘤中进行研究。最后，对于 BRAF / NRAS / NF1 野生型黑色素瘤患者，伊马替尼或尼洛替尼可对 cKIT 突变型黑色素瘤有效。尽管临床前数据表明具有协同作用，但 MEK 抑制剂考比替尼与免疫检查点抑制剂阿特珠单抗的组合并不优于免疫检查点抑制剂派姆单抗。
了解谱系可塑性是 EGFR 突变型非小细胞肺癌靶向治疗失败的途径
表皮生长因子受体基因 (EGFR) 的体细胞变异会导致激酶信号异常激活，大约 15% 的非小细胞肺癌 (NSCLC) 会出现这种情况。确诊为 EGFR 突变型 NSCLC 的患者对 EGFR 酪氨酸激酶抑制剂 (EGFR TKI) 有良好的初始临床反应，但肿瘤复发很常见并且发展很快。过去十年，人们对 EGFR TKI 获得性耐药机制进行了广泛研究。在理解治疗失败的两种主要途径方面取得了巨大进展：EGFR 基因的其他基因组变异和替代激酶信号激活（所谓的“旁路激活”）。多种旨在克服这些 EGFR TKI 耐药模式的药物已获得 FDA 批准或正在临床开发中。表型转化是一种不太常见且不太清楚的 EGFR TKI 耐药机制，尚待临床解决。在获得性 EGFR TKI 耐药性的情况下，表型转化包括上皮-间质转化 (EMT)、肺腺癌 (LUAD) 向鳞状细胞癌 (SCC) 或小细胞肺癌 (SCLC) 的转化。SCLC 转化或神经内分泌分化与 TP53 和 RB1 信号失活有关。然而，允许谱系转换的确切机制需要进一步研究。最近的报告表明，LUAD 和 SCLC 具有共同的细胞起源，并且在适当的条件下会发生转分化。目前，EGFR 突变型 SCLC 的治疗靶向选择仅限于传统的基因毒性化疗。同样，EMT 相关耐药性的基础尚不清楚。EMT 是一个复杂的过程，其特征是一系列中间状态，上皮和间质因子的表达各不相同。在获得性 EGFR TKI 耐药性的情况下，EMT 经常与旁路激活同时发生，因此很难确定 EMT 对治疗失败的确切贡献。EMT 相关耐药性的可逆性表明其表观遗传起源，并在疾病进展过程中发生其他调整，例如基因改变和旁路激活。本综述将讨论与表型转化相关的 EGFR TKI 耐药性的机制基础，以及在 EGFR 突变型 NSCLC 中解决此类靶向治疗耐药性的挑战和机遇。
曲美替尼和低剂量达拉非尼治疗晚期经治 NRASQ61R/K/L 突变型黑色素瘤患者的 2 期临床试验 (TraMel-WT)
简单总结：MEK 抑制剂单药治疗对晚期 NRAS Q61R/K/L 突变型黑色素瘤有效，但伴有剂量限制性皮肤毒性。BRAF 抑制剂与 MEK 抑制剂以全剂量联合使用（如 BRAF V600E/K 突变型黑色素瘤）的皮肤毒性较低。我们假设，对于接受免疫检查点抑制剂治疗后病情进展的晚期 NRAS Q61R/K/L 突变型黑色素瘤患者，低剂量的 BRAF 抑制剂达拉非尼可以减轻全剂量 MEK 抑制剂曲美替尼相关的皮肤毒性。这项两阶段 2 期试验的结果表明，添加低剂量的达拉非尼可有效减轻曲美替尼相关的皮肤毒性。然而，这种组合对晚期 NRAS Q61R/K/L 突变型黑色素瘤患者疗效不够。低剂量达拉非尼加全剂量曲美替尼的组合可能对治疗 MEK 抑制剂敏感型肿瘤更有益处。
单细胞转录组分析揭示EGFR突变肺腺癌中的抑制性肿瘤免疫微环境
摘要 背景 免疫治疗对表皮生长因子受体 (EGFR) 突变型非小细胞肺癌 (NSCLC) 患者的疗效较差。据报道，程序性细胞死亡配体 1 (PD-L1) 表达和肿瘤突变负荷 (TMB) 较低是潜在机制。作为影响免疫治疗疗效的另一个重要因素，迄今为止尚未全面了解该 NSCLC 亚组的肿瘤微环境 (TME) 特征。因此，我们发起了这项研究，从细胞组成和功能角度描述 EGFR 突变型肺腺癌 (LUAD) 的具体 TME，以更好地了解这种最常见 NSCLC 亚型的免疫状况。方法我们使用单细胞转录组测序和多重免疫组织化学来研究 EGFR 突变型和 EGFR 野生型 LUAD 的免疫微环境并确定免疫治疗的疗效。我们分析了来自九个未接受治疗样本的单细胞，并使用生物信息学方法将它们与之前从单细胞角度报道的三个免疫治疗后样本进行了比较。结果我们发现 EGFR 突变的恶性上皮细胞具有与无反应者的上皮细胞相似的特征。EGFR 突变的 LUAD 缺乏 CD8 + 组织驻留记忆 (TRM) 细胞，该细胞可通过分泌 CXCL13 促进三级淋巴结构的生成。此外，能够在 TME 中募集、保留和扩增 CD8 + TRM 细胞的其他细胞类型，在 EGFR 突变的 LUAD 中也是缺乏的。此外，与 EGFR 野生型 LUAD 相比，EGFR 突变的 LUAD 通过程序性细胞死亡-1 (PD-1) 和 PD-L1 或其他免疫检查点的 T 细胞与其他细胞类型之间的串扰明显较少。结论：我们的研究结果在单细胞水平上全面揭示了EGFR突变型LUAD的免疫状况。基于研究结果，许多细胞成分可能通过影响CD8 + TRM对EGFR突变型LUAD的特定TME产生负面影响。CD8 + TRM的缺乏可能是导致EGFR突变型LUAD抑制性TME的关键因素。