AmbientContribMaximum。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。2环境。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。5 AmbientContribsParse。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。8 Ambient -ProfileBimodal。。。。。。。。。。。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>10个环境回复融化。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>11个barcoderanks。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 14个嵌合龙。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div> 。 div>11个barcoderanks。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>14个嵌合龙。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>17个清洁量。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>19 defaultDrops。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>21个倒影器。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。23个空滴定。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。25个kenumyDropsCellranger。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。30 engodesequences。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。33 GET10xmolinFostats。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。34个hasheddrops。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。35 makecountmatrix。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>40个read10xCounts。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>42 read10xmolinfo。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>45个重新效果。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。 div>。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。47 removeAmbience。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。48个交换。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。50 write10xcounts。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。53
摘要背景:具有亚皮质囊肿(MLC)是一种涉及白质的罕见和进行性神经退行性疾病,并未被当前疾病模型充分概括。体细胞重编程,以及基因组工程的进步,可以允许建立用于疾病建模和药物筛查的MLC的体外人类模型。在这项研究中,我们利用细胞重编程和基因编辑技术来开发MLC的诱导多能干细胞(IPSC)模型来概括经典MLC影响的神经系统的细胞环境。方法:外周患者衍生的血液单核细胞(PBMC)的体细胞重编程用于开发MLC的IPSC模型。CRISPR-CAS9基于系统的基因组工程也用于创建该疾病的MLC1敲除模型。以2D细胞培养形式进行了IPSC与神经干细胞(NSC)和星形胶质细胞的分化,然后进行各种细胞和分子生物学方法,以表征疾病模型。结果:由体细胞重编程和基因组工程建立的MLC IPSC的多能性具有很好的特征。IPSC随后与疾病相关的细胞类型分化:神经干细胞(NSC)和星形胶质细胞。 MLC NSC的RNA测序分析揭示了与神经系统疾病和癫痫有关的一组差异表达的基因,这是MLC疾病中常见的临床发现。 该基因集可以作为筛查该疾病潜在治疗性的药物筛查的靶标。IPSC随后与疾病相关的细胞类型分化:神经干细胞(NSC)和星形胶质细胞。MLC NSC的RNA测序分析揭示了与神经系统疾病和癫痫有关的一组差异表达的基因,这是MLC疾病中常见的临床发现。该基因集可以作为筛查该疾病潜在治疗性的药物筛查的靶标。在分化与疾病相关的细胞类型 - 星形胶质细胞后,明确观察到了MLC特征液泡,这在对照组中显然不存在。这种出现概括了该疾病的显着表型标记。结论:通过MLC的IPSC模型的创建和分析,我们的工作解决了对MLC相关细胞模型的迫切需求,用于用于疾病建模和药物筛查测定法。进一步研究可以利用MLC IPSC模型以及生成的转录组数据集和分析,以确定这种衰弱疾病的潜在治疗干预措施。关键字:体细胞重编程,CRISPR-CAS9系统,指示分化引言概括性白细胞脑病带有皮层囊肿(MLC)是一种涉及白质的缓慢进行性退化性脑疾病,它是MLC1或GLC1或GLIAL CAMCAM CAMES跨越的病原变异的结果。这种疾病首先是由荷兰的Marjo van der Knaap博士独立发现的(van der Knaap等,1995),印度阿格拉瓦尔社区中的Bhim Sen Singhal博士(Singhal等,1996)。因此,MLC也被称为Van der Knaap-Singhal疾病(Van der Knaap等,2012)。因果变异的三个主要类别是:MLC1中的常染色体隐性突变,一种常染色体隐性隐性和glialcam中的常染色体显性突变(Capdevila-Nortes等,2013)。MLC1是第一个引起MLC并映射到22QTEL染色体的基因(Topçu等,2000; Leegwater等,2001)。MLC1转化为主要在大脑内的星形胶质细胞中表达的蛋白质(MLC1),尤其是在与血脑屏障的星形细胞末端脚接触(Masaki et al。,2012),在PIA MATER中,以及在Synaptic Cleft(Kater等人2023)中存在的星形胶质细胞。MLC患者的结构特征和观察到的大脑缺陷,例如脑水肿,液体填充囊肿,星形胶质细胞的空泡和降低降低,这表明MLC1可能调节