酶活性通过用500μl的提取缓冲液进行vig口摇(20%(v/v)甘油,1%triton X-100(v/v),50 mm hepes – koH(ph 7.5),10 mm mgcl 2,1 mm edta,1%triton x-100(v/v),1%Triton X-100(V/V),1%Triton X-100(V/V),1%Triton X-100(V/V),1%Triton X-100(V/V),1%Triton X-100(V/V),1%Triton X-100(V/V),1%Triton X-100(v/v),1%X-100(v/v),1%MM emMM MM E.酸,1 mm苯甲米丁,20μM亮肽素,0.5 mM DTT,1 mM苯基甲基磺酰基氟化物,10%聚乙烯基 - 丙吡咯烷酮(W/V)]。葡萄糖激酶(GK),FRUC TOKINAPE(FK),谷氨酸脱氢酶(GDH),磷酸烯醇丙酮酸羧化酶(PEPC),苹果酸脱氢酶(MDH),丙酮酸激酶(PK),总浓酸酯(CM),米尔酸酯(CS),米尔酸酯(CM),米尔酸酯(CM)通过分光光度法测定NADP依赖性的异戊酸脱氢酶(ICDH)酶,并用机器化的微孔板测定法测定(Gibon等人。,2004)。在25°C孵育后,NAD(P)H的演变在340 nm处被固定在340 nm处。通过循环反应在570 nm处测量了GDH的活性,涉及在存在醇脱氢酶和苯嗪硫代硫酸盐的情况下,涉及3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑四唑。cs ac ac titive。(2003)。通过检查生物标准(番茄叶提取物)的恢复,并确保提取物的稀释对活动的估计没有影响,如Bénard和Gibon(2016)所述,可以通过检查生物标准的恢复(番茄叶提取物)来验证。
fi g u r e 1脂质液滴:代谢,形态和组成。(a)主要代谢途径和中间代谢产物的简化方案参与LDS的生物发生和消耗。有关其他详细信息,请参见文本。fa,脂肪酸; FA-COA,酰基辅酶A; CPT1,肉碱棕榈转移酶I; CAC,柠檬酸周期; FASN,脂肪酸合酶; Oxphos,氧化磷酸化; ACC,乙酰辅酶A羧化酶; GPAT,甘油-3-磷酸酰基转移酶; AGPAT,1-酰基-SN-甘油-3-磷酸酰基转移酶; PAP,磷脂酸磷酸酶; DGAT,二甘油类酰基转移酶-1和-2; ACSL,酰基-COA合成酶; ATGL,脂肪甘油三酸酯脂肪酶; HSL,激素敏感脂肪酶; MAGL,单酰基甘油脂肪酶; NCEH,中性胆固醇酯水解酶。(b)内质网中发生的LD生物发生的示意图(ER)。酯化后,中性脂质积聚在ER双层中,形成透镜结构,该结构在ER双层内经过相位分离并成长为形成新生LD的细胞质。细胞质和ER蛋白被募集到LDS表面,促进其生长并萌芽到成熟的LDS中。附件蛋白在此过程中合作。在上面板(红色:TAG的化学结构)中说明了脂肪酸(FA)到三酰基甘油(TAG)中的酯化。(c)。用油酸处理肝HuH7细胞以诱导LD形成16小时(左图)。plin2(绿色)用特异性抗体定位,并用Lipidtox染色中性脂质。(n)表示细胞的核。箭头标记高放大倍数插图中的LD。THP-1细胞进行TEM分析(右图)。脂质液滴由它们的球形形态,相对较低的电子密度和通过单个磷脂单层界定。(d)代表LDS上主要蛋白质的简化方案。(e)该方案包含一些由病原体在宿主细胞中分泌的毒力因子操纵的LD蛋白(黑色)的例子(红色)(有关详细信息,请参见文本)。