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无甘油HS Tth DNA聚合酶产品处理指南
储存和稳定性： 无甘油 HS Tth DNA 聚合酶采用干冰 / 蓝冰运输。到货后储存于 -20°C 下，以获得最佳稳定性。应避免反 复冻融循环。运输过程中解冻不影响产品性能。每次解冻后应混合 / 平衡溶液以避免分相。 有效期： 在外包装盒标签上的有效期内，在推荐条件下储存并正确处理时，试剂盒可保持完整活性。 安全预防措施： 处理试剂前请阅读并理解 SDS （安全数据表）。首次发货时提供 SDS 的纸质版文件，此后可应要求提 供。 质控： 无甘油 HS Tth DNA 聚合酶活性通过使用 RT-qPCR 和 qPCR 测量不同大小片段的扩增对比参考酶来测 定。 Tth DNA 聚合酶及其组分在活性、持续合成能力、效率、灵敏度、无核酸酶污染和无核酸污染等 方面均经过广泛测试。 注： 仅供科研和进一步生产使用。
DNA聚合酶θ
1儿科部，纽约纽约纪念斯隆·凯特林癌症中心； 2马萨诸塞州波士顿的达纳 - 法伯癌症研究所医学肿瘤学系； 3莎拉·坎农（Sarah Cannon）移植和蜂窝疗法计划，德克萨斯州奥斯汀市圣大卫奥斯汀医学中心； 4宾夕法尼亚州匹兹堡的匹兹堡医学中心癌症中心血液学和肿瘤科医学系； 5弗雷德·哈钦森癌症研究中心的血液学和肿瘤学系； 6个细胞免疫疗法计划马萨诸塞州马萨诸塞州波士顿综合医院； 7纽约州布法罗市医学，移植和蜂窝治疗计划Roswell Park综合癌症中心； 8宾夕法尼亚州费城宾夕法尼亚大学佩雷曼医学院的血液学/肿瘤学系和艾布拉姆森癌症中心； 9纽约血液中心临床表现和细胞治疗实验室，纽约，纽约； 10干细胞移植和细胞疗法，德克萨斯州安德森癌症中心，德克萨斯州休斯敦； 11俄亥俄州俄亥俄州俄亥俄州俄亥俄州健康的俄亥俄州健康和骨髓移植计划；俄亥俄州哥伦布； 12基金会获得细胞疗法的基金会，美国东北奥马哈； 13内布拉斯加州大学医学中心的病理学/微生物学； 14贝勒医学院，休斯顿卫理公会医院和德克萨斯州休斯顿休斯顿，德克萨斯州休斯顿
DNA聚合酶θ
基因组稳定性是任何生物体的最高优先事项之一。可以以不同的方式实现，并以一种称为DNA损伤反应（DDR）的一般代谢途径合并。它包括进行DNA修复和DNA损伤耐受性（DDT）的机制。DNA聚合酶是主要在复制过程中合成互补DNA链的酶。目前已经确定了六个DNA聚合酶家族：a，b，c，d，x和y。除了经典的DNA聚合酶外，DNA起初 - 聚合酶primpol属于考古 - 本核原始原则的超家族，于2013年进行了描述。然而，DNA聚合酶的功能不仅限于高纤维复制（来自B家族的真核DNA聚合酶α，δ，ε）； they also play an important role in DDR pathways, including base excision repair (eukaryotic DNA polymerases β , λ from the X family), double-strand break (DSB) repair (eukaryotic DNA polymerases λ , µ from the X family) and DNA translesion synthesis (TLS) (eukaryotic DNA polymerases of the Y family and DNA polymerase ζ from the B family) [ 1 ].尽管在癌细胞中，这些机制通常支持肿瘤进展，从而使它们成为治疗的潜在靶标。属于A家族的真核DNA聚合酶在其功能上有很大不同。也许该组最著名的成员是DNA聚合酶γ，这是线粒体复制中的主要参与者。其他成员的功能，DNA聚合酶θ（polθ）和DNA聚合酶ν（polν），即使polθ和polν催化核与POLγ和Escherichia coli pol I同样同源。在1996年，MUS308基因的果蝇Melanogaster突变等位基因分析对交联药（如光活化的牛corlationen，diepoxybu-tane和Nitrogen Mustard）的交联超敏反应。因此，建议MUS308基因产物应参与DNA修复[2]。使用小鼠模型在2004年稍后证明了POLθ在DSBS修复中的核心作用，即Polθ介导的末端连接（TMEJ）[3]。在TMEJ期间，Polθ对齐切除的3' - 单链DNA末端，基于微型学，填充DNA间隙，并生成带有非同源序列的DSB位点缺失的修复产物。事实证明，polθ细胞功能比以前预期的要多样化。这种独特的酶参与了[4-8]中回顾的许多不同DNA相关途径。在这篇评论中，我们讨论了Polθ的独特属性，其在保护
ROBST DNA聚合酶
使用LAMP技术测量RobstԭԧDNA聚合酶的DNA链位移。使用细菌gDNA作为模板在等温对照下进行测定。将诸如模板，底漆，bu剂和放大器的方法等浓度进行操作。在UV LightAōer琼脂糖凝胶电泳下可视化灯产物。对酶的酶含量进行了12个月的储存测试，并发现该酶是稳定的。
TAQ DNA聚合酶
单位定义：TAQ DNA聚合酶的一个单位定义为将10 nmol的脱氧核糖核苷酸纳入DE-81的多核苷酸分数，在70°C下在DE-81上吸附到多核苷酸级分中，在以下测定条件下测量：67 mm tris-Hcl 8.8（pH 8.8 at 25°C） 2-甲醇，50 mM NaCl，0.1 mg/ml BSA，0.75 mM活性小腿胸腺DNA，每个DNTP的0.2 mM，0.4 MBQ/ml [3 H] -DTTP。
DNA聚合酶I
蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。物理纯度，然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定，在37°C下孵育4小时4小时。双链外切核酸酶在50 µL反应中确定，该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。双链核酸内切酶在50 µL反应中确定，该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。e.coli 16S rDNA污染使用5 µL R含量的酶溶液的样品变性并在Taqman QPCR测定中筛选，以使用污染的大肠杆菌基因组DNA，使用寡核苷酸引物污染了与16S rRNA locus相对应的寡核苷酸引物。提供：25mm Tris-HCl，1mm DTT，0.1mm EDTA，50％甘油（25°C时pH 7.4）。提供：10倍蓝色缓冲区（B0110）：500mm NaCl，100mm Tris-HCl，100mm MGCL 2，10mm DTT（25 c）pH 7.9 pH 7.9）。用法说明：5´-overhang（1）
TAQ DNA聚合酶
建议的存储和稳定性长期存储在-20°C。在标签上陈述了-20°C时的产品到期。选项：在+4°C下存储长达6个月。质量控制TAQ DNA聚合酶的污染活性测试，没有核酸内切酶活性的痕迹，缺口活性或核酸外切酶活性。单位定义一个单位定义为在标准测定条件下，在72°C下，在30分钟内将10 nmol的DNTP纳入酸性dntP的聚合酶量。协议该协议是确保使用TAQ DNA聚合酶时确保最佳PCR的指南。最佳反应条件，例如孵育时间，温度和模板DNA量可能会有所不同，必须单独确定。1。解冻10x缓冲液，DNTP混合和底漆溶液。必须完全解冻溶液（一些缓冲液需要达到室温）并在使用前彻底混合以避免局部盐浓度。将所有组件放在冰上。聚合酶在甘油中提供，不需要解冻。始终将其保持在-20°C。2。与用于DNA制备或产品分析的区域中建立了反应混合物。始终在冰上工作。
TAQ-B DNA聚合酶
蛋白质的来源：一种重组大肠杆菌菌株，携带来自嗜热有机体Thermus aquaticus YT-1的TAQ DNA聚合酶基因。单位定义：1个单位定义为将在75°C的30分钟内将10 nmol的DNTP纳入酸 - 不溶性材料的酶。分子量：93,910 Daltons质量控制分析：使用2倍连续稀释方法测量单位活动。在1X反应缓冲液中制成酶的稀释液，并将其添加到含有小腿胸腺DNA，25 mM TAPS（pH 9.3），50 mM KCl，2.0mm MGCL2，1 mM DTT，3H-DTTP和100 µm DNTP的50 µL反应中。 在75°C下孵育10分钟，浸入冰上，并使用Sambrook和Russell的方法进行分析（Molecular Cloning，V3，2001，pp。 A8.25-A8.26）。 蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。 通过浓缩和稀释酶溶液的SDS-PAGE评估物理纯度，然后进行银色染色检测。 通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。 单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定，在37°C下孵育4小时4小时。 双链外切核酸酶在50 µL反应中确定，该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。 双链核酸内切酶在50 µL反应中确定，该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。在1X反应缓冲液中制成酶的稀释液，并将其添加到含有小腿胸腺DNA，25 mM TAPS（pH 9.3），50 mM KCl，2.0mm MGCL2，1 mM DTT，3H-DTTP和100 µm DNTP的50 µL反应中。在75°C下孵育10分钟，浸入冰上，并使用Sambrook和Russell的方法进行分析（Molecular Cloning，V3，2001，pp。A8.25-A8.26）。蛋白浓度（OD 280）由OD 280吸光度确定。物理纯度，然后进行银色染色检测。通过比较浓缩样品中污染物带的聚集质量与稀释样品中蛋白蛋白蛋白带的质量来评估纯度。单链核酸酶在含有放射性标记的单链DNA底物的50 µL反应中确定，在37°C下孵育4小时4小时。双链外切核酸酶在50 µL反应中确定，该反应含有放射性标记的双链DNA底物和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。双链核酸内切酶在50 µL反应中确定，该反应含有0.5 µg质粒DNA和10 µL的酶溶液在37°C下孵育4小时。