基因选择性转录因子通过与其靶基因调节区域内的特定DNA元件结合(1)。但是,并非完全定义此DNA结合的序列要求。几个参数,例如蛋白质 - 蛋白质相互作用与相邻结合的因素,DNA结构的影响(弯曲等)。),重要的是,结合位点与认知因子的比率确定给定转录因子是否可以有效地与相应的结合位点相互作用。体外和大概也在体内也是如此,对于确定转录因子是否会与其最佳识别序列的变体结合,因此,它的基因调节。在这些考虑因素中提示,我们询问是否存在一种蜂窝机制,该机制是否存在在转录因子活动和可用目标位点的繁琐之间保持平衡。对AP-1家族成员的特征良好转录因子C-Jun进行了实验(2-4)。包含AP-1结合位点的启动子是C-Jun调节的目标。C-Jun的活性受到多种机制的紧密控制,并且对蛋白质的异常调节会导致恶性转化和致癌作用(5)。在这项研究中,我们描述了一种机制,该机制通过改变其磷酸化态的DNA结合活性,取决于细胞中存在的C-Jun结合位点的浓度。这种机制可以用来设置和微调C-Jun与其结合位点的比率。有趣的是,与这种现象有关的磷酸化位点与以前据报道经历信号依赖性去磷酸化相同。
要描述的实验与组蛋白在核功能中的作用有关,特别强调了生物合成反应,这些反应通过引入乙酰基和甲基来改变组蛋白的结构。使用乙酸-C14和蛋氨酸 - 甲基-C'4在孤立的小牛胸腺核中研究了这些反应(参见参见参考文献1)作为前体,将它们的不合格与C14-赖氨酸和其他氨基酸的不合格进行比较,并测试普罗蛋白对不同组蛋白分数的合成的影响。将提供证据,以表明在细胞核中,组蛋白的乙酰化和甲基化很可能发生在多肽链完成后。尤其是乙酰化的组蛋白结构的这种修饰可能会影响组蛋白在体内抑制核糖核酸合成的能力。这种观点得到了以下发现的支持:当孤立的精氨酸组蛋白经过有限的乙酰化时,它们会因小牛胸腺核的DNA依赖性RNA聚合酶的RNA合成抑制剂而失去了许多有效性,因此它们的有效性很大。然而,这种修饰的组蛋白仍然是强烈的碱性蛋白质,它保留了与其得出的母体组蛋白相当的DNA的亲和力。这些发现介绍了组蛋白对核RNA的影响可能涉及的可能性不仅仅涉及对RNA合成的简单抑制,并且可能存在更微妙的机制,这些机制允许抑制和重新激活RNA沿染色体的RNA产生。在过去的几年中,对组蛋白作为染色体活性的调节剂的兴趣已大大提高,因为越来越多的实验证据已经积累了支持组蛋白的作用是抑制染色体
我们描述了一种分析复杂微生物种群遗传多样性的新型分子方法。该技术基于通过变性梯度凝胶电泳 (DGGE) 分离编码 16S rRNA 的聚合酶链式反应扩增基因片段,这些片段的长度相同。对不同微生物群落的 DGGE 分析表明,分离模式中存在多达 10 个可区分的条带,这些条带很可能来自构成这些种群的许多不同物种,从而生成了种群的 DGGE 图谱。我们表明,可以识别仅占总种群 1% 的成分。使用针对硫酸盐还原菌 16S rRNA 的 V3 区特异性的寡核苷酸探针,可以通过杂交分析识别某些微生物种群的特定 DNA 片段。对在有氧条件下生长的细菌生物膜的基因组 DNA 进行分析表明,尽管硫酸盐还原菌具有厌氧性,但它们仍存在于这种环境中。我们获得的结果表明,该技术将有助于我们了解未知微生物种群的遗传多样性。
ganciclovir抗性突变体759R1)100源自人类巨细胞病毒菌株AD169含有两个抗性突变,其中一个是UL97基因,导致受感染细胞中ganciclovir磷酸化的降低[V. V. V.。 Sullivan,C。L. Talarico,S。C. Stanat,M。Davis,D。M. Coen和K. K. Biron,Nature(伦敦)358:162-164,1992]。在本研究中,我们将第二个突变映射到包含DNA聚合酶基因的4.1-kb DNA片段,并表明它赋予了Ganciclovir抗性而不会损害磷酸化。对4.1-kb区域的序列分析显示,在DNA聚合酶的保守区域V中,在987的位置导致了单个核苷酸变化。重组病毒构建为含有DNA聚合酶突变,但不显示与原始突变体759RD100(22倍)相对于Ganciclovir的中间电阻(4至6倍);重组病毒还表现出对ganciclovir循环磷酸盐(7倍),1-(二羟基-2-二羟基甲基) - 环胞嘧啶(12倍)和磷酸二甲基烷基衍生物(S)-1-(S)-1-(3-羟基-2-磷酸磷酸盐)的抗性。 (S)-1-(3-羟基-2-磷酸甲氧基)胞嘧啶(8至10倍)。但是,重组病毒仍然容易受到某些相关化合物的影响。这些结果表明,人类巨细胞病毒DNA聚合酶是Ganciclovir的抗病毒活性的选择性靶标,Ganciclovir是其某些衍生物和磷酸氧基烷基衍生物的选择。支持区域V在底物识别中的作用;并提出由于聚合酶突变而导致人类巨细胞病毒对这些化合物的临床抗性的可能性。
摘要 通过聚合酶链式反应,可以从基因组 DNA 中酶促扩增单拷贝序列。通过使用两种不同摩尔量的扩增引物,只需一个步骤即可扩增单拷贝基因并产生所选链的过量单链 DNA,用于直接测序或用作杂交探针。此外,可以使用等位基因特异性寡核苷酸在扩增反应中或作为测序引物直接测序杂合子中的单个等位基因。通过使用这些方法,我们研究了 HLA-DQA 基因座的等位基因多样性及其与血清学定义的 HLA-DR 和 -DQ 类型的关联。该分析揭示了总共八个等位基因和三个额外的单倍型。该方法在筛查人类基因突变方面具有广泛的应用,并有助于将基因的酶促扩增与自动测序联系起来。
目前,使用猪污染的食物成分和或加工食品已成为当前的关注和加强问题。这种情况鼓励开发准确的方法,以特别检测猪污染的存在。本研究使用两种样品:(1)新鲜猪肉作为阳性内部控制和(2)用猪肉(碎肉,肉丸,咸牛肉和香肠)制成的加工肉类产品,这些产品使用DNA标记进行了测试。使用猪肉处理的样品是确定加工对DNA片段的影响,并在所使用的检测过程中测试提取方法的刚性。本研究旨在使用定量聚合酶链反应(QPCR)方法检测猪DNA片段。研究首先使用RNA提取试剂盒,DNA提取试剂盒和盐提取方法提取新鲜的猪肉和加工产品,然后使用分光光度计测量DNA/RNA的纯度和浓度。RNA提取物被转化为互补DNA(cDNA),并与使用QPCR分析的DNA提取物(SUS SCROFA)。结果表明,获得的RNA和DNA提取物的浓度为71.1-296,025 ng/ul,纯度不同。在CT 23-28 ng/ul范围内,所有加工产品和阳性内部的样品都是放大的对照,在这种情况下,肉的加工不会影响分析的加工产品的DNA,因此可以检测到DNA片段。关键字:beta aktin,循环阈值,新鲜猪肉,DNA猪肉,qpcrqPCR DNA在工作时间上比cDNA qPCR更有效,因为它不需要RNA的转录阶段。
描述DNA序列中的误差是由环境因素引起的,或在复制过程中由DNA聚合酶造成的。如果未检查,这些错误可能会累积遗传损害,以使细胞无法再起作用。因此,DNA修复过程涉及切除受损序列的机制以及适当序列的重新合成和连接。在哺乳动物细胞中,该校对功能在50kDa亚基的异二聚体(POL)δδ二个亚基的DNA聚合酶(POL)δ中取决于,在PCNA(增殖细胞核抗原)和125KDA催化亚基的存在下刺激POLδ活性。催化亚基具有3'至5'的核酸外切酶活性,将polδ与polα和polβ区分开。 polδ也是DNA复制的核心,在复制叉处的铅链合成中起作用。该催化亚基被G1依赖性激酶 - 周期蛋白复合物磷酸化,并通过其N末端249氨基酸与CDK2相互作用。但是,磷酸化对POLδ活性几乎没有影响。因此,DNA聚合酶ä对于DNA复制至关重要,并且在DNA切除修复过程中替换受损序列的能力是独一无二的。
在真核细胞中,有两个含有基因组的细胞器,线粒体和质体,分别来自α-局势杆菌和蓝细菌。在两个细胞器中,基因组必须通过核编码的,细胞器定位的DNA聚合酶(DNAPS)维持。尽管DNAP在DNA复制和修复中起着核心作用,但直到最近才能完全了解Organlel定位DNAP的演变。尤其是,尚未发现最初用于内共生细菌中的DNAP,并没有发现导致线粒体和质体的DNAP。最近,我们在真核生物中对DNAP的全面搜索揭示了细胞器局部DNAP的多样性和分布。并导致发现RDXPOLA,这是一种候选DNAP,是α-局势杆菌中使用的DNAP的直接后代,引起了线粒体。在这里,我们概述了真核生物中细胞器定位的DNAP,以及根据发现RDXPOLA的发现,用于线粒体 - 定位DNAP的早期进化场景。
SPV的抽象准确和快速诊断对于控制利比亚疾病的快速传播至关重要。本研究旨在优化和开发利比亚阿尔扎维耶市绵羊农场绵羊病毒鉴定的PCR分析。总共收集了120个口头拭子样品,如下:临床怀疑的绵羊痘(n = 67),临床怀疑具有传染性的外生体(n = 18)和健康的绵羊(n = 35)。对收集的样品进行DNA提取,然后进行针对p32基因的聚合酶链反应,该反应用特定的引物。所有67个临床怀疑的绵羊痘样品的SPV呈阳性,并产生预期的扩增子大小为390 bp。所有临床上怀疑的传染性胚膜(CE)样品和健康样品均为阴性。当前基于p32基因的PCR分析的结果表现出良好的敏感性和特异性,可用于分子诊断绵羊痘病毒疾病。关键字。绵羊痘病毒,p32 Gene,PCR,Alzawiyah City,Libya。引言绵羊病是绵羊中最严重,最感染的病毒疾病[1]。在临床上,Sheepox病毒(SPV)可以通过发烧,厌食症,抑郁症,肺部病变发展,无羊毛区域的痘病变的出现以及表面淋巴结肿胀来识别。[2]。SPV是严重的绵羊皮肤病。SPV属于Poxviridae家族的Capripoxvirus(CAPV)属。该属的成员,还包括引起皮肤肿块和山羊痘的病毒,感染绵羊,山羊和牛,并引起经济上重要的疾病(LSDV)[3,4]。绵羊痘病毒是动物的最重要的蛇毒,在OIE的A组疾病中列出[5]。由于对绵羊的羊毛和皮革损害,牛奶产量降低,堕胎率降低,体重增加和高死亡率降低,可能会造成严重的生产损失[6-8]。即使在许多国家中消除了这种疾病,但仍有从北非,中东,西亚,印度和中国在内的世界各地据报道[8,9]。在利比亚,该疾病通常具有enzootic外观。它威胁着农业部门的发展,造成了与羔羊死亡率有关的经济损失,成人的繁殖和生产下降[10]。SPV的诊断通常基于高度特征的临床体征,病毒的分离,中和 - 中和血清学测定[11,12]和聚合酶链反应(PCR)分析[13,11]。用于识别SPV的常规病毒学和血清学测定是耗时,费力的,大多数的特异性低[14]。但是,包括PCR分析在内的分子方法是潜在的工具,可以用作传统实验室技术检测SPV的替代或互补测试。被证明是可靠,敏感,快速和特定的方法,这些方法通常用于世界上许多病毒的检测和表征,包括卡皮托病毒[15,16,12]。[17]。这项研究的目的是创建一种快速,敏感的方法,用于在短时间内检测现场样本中的SPV,从而实用和高效。此外,对于识别SPV的识别,需要进行快速,特异性和敏感测试,因为在现场样品中及时检测SPV对于成功的SPV控制至关重要,并且降低了可能由流行病引起的潜在严重经济损害。方法样本该研究是在利比亚黎波里的利比亚生物技术研究中心(BTRC)的基因工程系进行的。当前的研究总共收集了120件口腔拭子,从可疑的绵羊痘病例中获得了67件,从可疑的绵羊传染性ecthyma(CE)中获得了18例,以及各种羊群中的健康绵羊(阴性对照)的35例。在2013年5月至2014年4月之间,标本是从利比亚阿尔扎维亚市的绵羊群中收集的。使用由英国的公司Isohelix提供的颊拭子管进行了口服拭子样品。随后将这些样品运输到基因工程
此预印本版的版权持有人于2025年3月11日发布。 https://doi.org/10.1101/2025.03.11.25323491 doi:medrxiv preprint