TAQ DNA聚合酶是一种重组94 kDa DNA聚合酶,该聚合酶在带有克隆的Thermu Aquaticus DNA聚合酶基因的大肠杆菌菌株中表达。它具有5'-3'聚合酶和外切核酸酶活性,并且没有可检测到的3'-5'外切核酸酶活性。TAQ DNA聚合酶的延伸速率为1-2 kb/ min。此外,它具有3'腺苷酸化活性。因此,PCR产品可直接用于TA-CLONing程序。
重要的考虑因素和PCR优化,最佳条件将从反应到反应,并取决于所使用的模板/引物。5x mytaq反应缓冲液:5x MyTAQ反应缓冲液包括5mm DNTP,15mm MGCL 2,稳定器和增强剂。每个组件的浓度已得到广泛优化,从而减少了进一步优化的需求。其他PCR增强剂,例如HISPEC,Polymate或Betaine等。。引物:正向和反向引物通常以0.2-0.6M的最终浓度使用。我们建议使用0.4M作为最终浓度(即每50 le反应体积的每个引物的下午20点)。 过高的底漆浓度可以降低启动的特异性,从而导致非特异性产物。 设计底漆时,我们建议使用Primer-Design软件,例如Primer3(http://frodo.wi.mit.edu/primer3)或可单位的10mm和3mm和3mm的阳离子阳离子浓度,或者单位阳离子浓度和分别为10mm和3mm。 引物应具有约60°C模板的熔化温度(TM):反应中的模板量主要取决于所使用的DNA类型。 对于低结构复杂性(例如质粒DNA)的模板,我们建议使用50pg-10ng DNA每50°L反应体积。 对于真核基因组DNA,我们建议每50 l反应的起始量为200ng DNA,这可以在5ng-5ng-500ng之间变化。 避免在含EDTA的解决方案中重新悬浮模板(例如)很重要 te buffer)由于EDTA螯合免费Mg 2+。每50 le反应体积的每个引物的下午20点)。过高的底漆浓度可以降低启动的特异性,从而导致非特异性产物。设计底漆时,我们建议使用Primer-Design软件,例如Primer3(http://frodo.wi.mit.edu/primer3)或可单位的10mm和3mm和3mm的阳离子阳离子浓度,或者单位阳离子浓度和分别为10mm和3mm。引物应具有约60°C模板的熔化温度(TM):反应中的模板量主要取决于所使用的DNA类型。对于低结构复杂性(例如质粒DNA)的模板,我们建议使用50pg-10ng DNA每50°L反应体积。对于真核基因组DNA,我们建议每50 l反应的起始量为200ng DNA,这可以在5ng-5ng-500ng之间变化。避免在含EDTA的解决方案中重新悬浮模板(例如te buffer)由于EDTA螯合免费Mg 2+。初始变性:对于非复合模板,例如质粒DNA或cDNA,建议在95°C下1分钟的初始变性步骤。对于更复杂的模板,例如真核基因组DNA,为了促进DNA的完全融化,需要更长的初始变性时间至3分钟。变性:我们的协议建议在95°C下进行15S循环变性步骤,这也适用于富含GC的模板,但是对于低GC含量(40-45%)模板,可以将变性时间降低到5s。退火温度和时间:最佳退火温度取决于底漆序列,通常比对下的TM低2-5°C。我们建议运行温度梯度以确定最佳退火温度,另外55°C可以用作起点。取决于反应,退火时间也可以减少到5s。
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产品名称 DNA Pol μ 兔多克隆抗体 宿主物种 兔 应用 WB;ELISA 物种交叉反应 人;大鼠;小鼠; 建议稀释度 Western Blot:1/500 - 1/2000。ELISA:1/40000。尚未在其他应用中测试。 免疫原 来自 DNA Pol μ 的合成肽。AA 范围:210-290 特异性 DNA Pol μ 多克隆抗体检测内源水平的 DNA Pol μ 蛋白。 制剂 含有 50% 甘油、0.5% BSA 和 0.02% 叠氮化钠的 PBS 液体。 储藏 储存于 -20°C。避免反复冻融循环。 蛋白质名称 DNA 指导的 DNA/RNA 聚合酶 mu 基因名称 POLM 细胞定位 细胞核。 纯化 使用表位特异性免疫原,通过亲和层析法从兔抗血清中亲和纯化抗体。克隆性 多克隆 浓度 1 mg/ml 观察到的条带 54kD 人类基因 ID 27434 人类 Swiss-Prot 编号 Q9NP87 别名 POLM;polmu;DNA 引导的 DNA/RNA 聚合酶 mu;Pol Mu;末端转移酶 背景催化活性:脱氧核苷三磷酸 + DNA(n) = 二磷酸 + DNA(n+1)。,辅因子:镁。,功能:似乎充当 Ig 变位酶,负责免疫球蛋白 (Ig) 基因超突变。,相似性:属于 DNA 聚合酶 X 型家族。,相似性:包含 1 个 BRCT
图1 Robust amplification of mouse genomic DNA A 1.4 kb and a 1.6 kb fragment of the Rn18s gene, a 500 bp fragment of FABI gene and a 350 bp fragment of IL-2 gene (lanes 1 – 4, HyperLadder 50 bp (M)) were amplified from mouse genomic DNA using BIOTAQ DNA Polymerase under standard PCR cycling conditions.结果说明了Biotaq DNA聚合酶扩增不同尺寸的片段的能力,从而使高收益成为常规PCR分析的理想选择。
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