有机酸在食品和饮料行业中很常见,可以在水果、蔬菜和葡萄酒等多种样品中找到。在 HALO AQ-C18 色谱柱上使用低 pH 值的 100% 水相流动相对九种极性有机酸进行分离。选择 250 毫米长的色谱柱可为这种极性混合物提供出色的分辨率和合理的运行时间。
通常,样品可能包含来自样品矩阵或低质量流动相位溶剂的化合物,可以通过固定相保留。盐,脂质,增塑剂和聚合物是在分析过程中可能与固定相接触的一些可能物质。这些物质可能会对色谱柱,检测器产生有害影响,并在分析过程中引起瞬时峰。如果这些物质不被流动阶段洗脱,它们可以积聚在列上。随着时间的流逝,分析物可以与这些杂质相互作用并影响分离机制,从而导致保留时间移动和峰值尾巴。此外,这些积累的杂质会造成阻塞,从而导致柱面压力升高,损坏泵,并可能导致柱床中的空隙形成。强烈建议使用防护柱来避免此类问题。防护列是短列,包装包装与喷射器和分析柱之间安装的分析列相似。在给定期间后,它们被丢弃,并安装了新鲜的防护柱,以最大化分析柱的寿命。
对于刚开始研究肽和蛋白质的人来说,可能会惊讶地发现,在使用低 pH 值和低离子强度流动相(0.1% 甲酸)的分离条件下,这些类型的分析物会吸附到金属表面。这种流动相通常用于 LC-MS 分析。肽和蛋白质上的带电位点可能会与色谱柱(筛板/色谱柱主体)、仪器硬件或连接材料中的金属表面相互作用。当首次使用新色谱柱时,由此产生的吸附可能会导致信号低和/或样品回收率降低。在极端情况下,即使多次注射肽或蛋白质样品后也可能观察不到信号。
90 Å C8, 2.7 µm 色谱柱保养和使用表描述 HALO ® 90 Å C8 是一种基于新型 Fused-Core ® 粒子设计的高速、高效液相色谱柱。Fused-Core ® 粒子在固体二氧化硅核周围提供了一个高纯度二氧化硅薄多孔壳。由于 0.5 微米厚的多孔壳中的扩散路径较浅,并且整体粒径较小(2.7 微米),因此这种粒子设计表现出非常高的柱效。HALO ® 90 Å C8 的紧密结合、广泛封端的二甲基辛基固定相提供了稳定的反相填料,可用于碱性、酸性或中性化合物。色谱柱特性每根色谱柱都附有一份印刷报告,其中包括实际测试色谱图和性能结果。Fused-Core ® 粒子的表面积约为 135 m 2 /g,平均孔径为 90 Å。由于实心芯的密度,Fused-Core ® 颗粒比市售的全多孔颗粒重 30% 至 50%。因此,每根柱的有效表面积与表面积在 225-300 m 2 /g 范围内的全多孔颗粒填充的柱相似。操作指南 流动方向标在柱标签上。 反向流动可用于尝试去除入口堵塞或
描述 HALO ® 90 Å AQ-C18 是一种基于 Fused-Core ® 粒子设计的高速、高效液相色谱柱。Fused-Core ® 粒子在固体二氧化硅核心周围提供了一个高纯度二氧化硅薄多孔壳。由于 0.4 微米厚的多孔壳中的浅扩散路径和 2 微米的高度均匀的整体粒度,这种粒子设计表现出非常高的柱效率。HALO ® 90 Å AQ-C18 是一种 C18 键合相,采用专有工艺制备,加入少量极性硅烷,使相具有抗脱湿性。这种抗脱湿性使 AQ-C18 相的用户能够运行高水性(高达 100%)的流动相。改性 C18 相表现出与 HALO ® C18 类似的保留性,但选择性不同,为解决困难的分离增加了一种有价值的替代方案。 HALO ® 90 Å AQ-C18 是一种反相填料,可用于碱性、酸性和中性化合物。色谱柱特性 Fused-Core ® 颗粒的表面积约为 120 m 2 /g,平均孔径为 90 Å。由于实心核的密度,Fused-Core ® 颗粒比市售的全多孔颗粒重 30% 到 50%。因此,每个色谱柱的有效表面积与表面积在 225-300 m 2 /g 范围内的全多孔颗粒填充的色谱柱相似。操作指南 • 流动方向标记在色谱柱标签上。色谱柱不应以反向流动方向操作。(见下文色谱柱保养部分的讨论。)• 新色谱柱含有 100% 乙腈。最初应注意避免使用与此溶剂不混溶或可能导致沉淀的流动相。 • 水和所有常见的有机溶剂均与 HALO ® 90 Å AQ-C18 色谱柱兼容。 • 为最大程度地延长色谱柱寿命,HALO ® 90 Å AQ-C18 色谱柱最好在 60 ºC 以下使用。 • 为最大程度地延长色谱柱寿命,HALO ® 90 Å AQ-C18 色谱柱的流动相 pH 值最好保持在 pH = 2 至 9 的范围内。 • HALO ® 90 Å AQ-C18 色谱柱在高达 1000 bar (14,500 psi) 的工作压力下也能保持稳定。 色谱柱保养 为最大程度地延长色谱柱寿命,请确保样品和流动相不含颗粒。强烈建议在样品注射器和色谱柱之间使用保护柱或孔隙率为 0.5 微米的在线过滤器。 HALO ® 90 Å AQ-C18 色谱柱上的 1 微米孔隙率筛板比其他小颗粒色谱柱通常使用的 0.5 微米筛板更不容易堵塞,但如果色谱柱以反向流动方向运行,这些筛板可能会让少量填料颗粒逸出。色谱柱方向在标签上标明,只有在其他措施无法成功去除入口堵塞时才应反向冲洗色谱柱。要从色谱柱中去除强保留物质,用非常强的溶剂(例如所用流动相的 100% 有机组分)反向冲洗色谱柱。二氯甲烷和甲醇的混合物 (95/5 v/v) 通常可以有效完成此任务。极端情况下可能需要使用非常强的溶剂,例如二甲基甲酰胺 (DMF) 或二甲基亚砜 (DMSO)。色谱柱存储长期存储硅胶基反相色谱柱的最佳方法是使用 100% 乙腈。色谱柱可以在大多数常见流动相中安全存放短期(最多 3 或 4 天)。但是,当使用缓冲液时,最好同时保护色谱柱和 HPLC 设备,并使用相同的流动相(不含缓冲液)冲洗色谱柱以除去盐(例如,当使用 60/40 ACN/缓冲液时,用 60/40 ACN/H 2 O 冲洗色谱柱)以消除盐腐蚀的危险,同时使色谱柱与原始流动相快速重新平衡。储存柱子之前,应该用柱子附带的端塞将端头配件紧紧密封,以防止填料干燥。
色谱柱保养 为最大程度延长色谱柱寿命,请确保样品和流动相不含颗粒。强烈建议在样品注射器和色谱柱之间使用保护柱或孔隙率为 0.5 微米的在线过滤器。HALO ® 90 Å RP-Amide 色谱柱上的 2 微米孔隙率筛板比其他小颗粒色谱柱通常使用的 0.5 微米筛板更不容易堵塞。如果色谱柱的工作压力突然超过正常水平,可以尝试反转色谱柱的流动方向以去除入口筛板上的碎屑。要从色谱柱中去除强保留物质,请用非常强的溶剂(例如所用流动相的 100% 有机成分)反向冲洗色谱柱。二氯甲烷和甲醇的混合物(95/5 v/v)通常可以有效完成此任务。极端情况下可能需要使用非常强的溶剂,例如二甲基甲酰胺 (DMF) 或二甲基亚砜 (DMSO)。
由于我们专有的自动色谱柱表征技术,可以快速实现前所未有的“柱间”和“仪器间”保留时间重复性。此独特功能可自动测量和存储色谱柱参数,有助于确保保留时间重复性不受色谱柱尺寸的影响。自动色谱柱表征技术还简化了 GC 方法转移、不同仪器间的方法标准化以及自动泄漏检查。
* 温度限制取决于方法运行参数。建议这些 Biozen LC 色谱柱的最高温度为 90 °C,但温度限制取决于您的运行参数。在 pH 大于 8 和高温下运行将缩短色谱柱寿命。在最高温度限制下连续使用 Biozen 色谱柱可能会缩短色谱柱寿命。** 梯度条件下 pH 范围为 1.5 - 9。等度条件下 pH 范围为 1.5 -10。*** 梯度条件下 pH 范围为 1.5 - 8.5。等度条件下 pH 范围为 1.5 -10
绿咖啡提取物作为膳食补充剂出售,有助于减肥。绿原酸是活性成分。绿原酸和咖啡因可以使用 HPLC 轻松分析。在当地药店购买了一瓶绿咖啡提取物胶囊。将一个胶囊中的粉末放入装有 20 mL 50/50:乙腈/甲醇的小瓶中,并涡旋混合。将小瓶超声处理 10 分钟,然后使其沉淀。将 5 mL 上清液通过 13 mm、0.45 µm 孔隙率尼龙注射器过滤器过滤。使用 50/50 的水和乙腈混合物将该溶液的一部分稀释 1:10。将稀释的样品注入 HPLC。咖啡因只能使用 254 nm 波长检测到,而绿原酸在 325 nm 波长下以更高的灵敏度检测到。溶剂梯度延长超过 10 分钟以去除一些次要的后期洗脱峰。
此外,色谱柱相选择性是调整 HPLC 分离选择性的四个最有力和最有用的参数之一(见表 B)。对于可电离分析物,流动相 pH 是迄今为止最有效的参数。然而,色谱柱固定相在改变 UHPLC 和 HPLC 分离的相对保留方面的能力与有机改性剂选择(乙腈与甲醇)和有机改性剂百分比/梯度陡度相当。在开发方法时,有多种方法可以实现满足特定分辨率和保留要求的分离。一种方法是采用系统方法并筛选多个相。HALO ® 色谱柱有几种不同的固定相,可用于各种类型的分析。表 C 显示了可用于小分子反相分离的 HALO ® 相,这些相根据其选择性差异列出