菊苣根 ( Cichorium intybus L. var. sativum ) 用于提取菊粉,菊粉是一种用作天然甜味剂和益生元的果糖聚合物。然而,在菊粉提取过程中需要去除味道苦涩的倍半萜内酯,而菊苣正是因为这种内酯才具有其独特的风味。为了避免这种提取过程及其相关成本,最近通过灭活四个拷贝的 germacrene A 合酶基因 ( CiGAS-S1、-S2、-S3、-L ),创建了倍半萜内酯含量较低的菊苣变种,该基因编码的酶可启动菊苣中苦味倍半萜内酯的生物合成。在本研究中,对 CRISPR/Cas9 试剂的不同递送方法进行了比较,比较了它们在 CiGAS 基因中诱导突变的效率、脱靶突变的频率以及它们对环境和经济的影响。 CRISPR/Cas9 试剂通过农杆菌介导的稳定转化或使用相同 sgRNA 的质粒或预组装核糖核酸复合物 (RNP) 瞬时递送。所有使用的方法都会导致 CiGAS -S1 和 CiGAS -S2 基因中出现大量 INDEL 突变,这些基因与所用的 sgRNA 完全匹配;此外,与 sgRNA 有一个错配的 CiGAS -S3 和 CiGAS -L 基因也发生了突变,但突变效率较低。虽然使用 RNP 和质粒递送会导致双等位基因、杂合或纯合突变,但质粒递送会导致 30% 的质粒片段在基因组中不必要地整合。通过农杆菌转化的植物通常表现出嵌合现象和 CiGAS 基因型的混合。当植物生长较长时间时,这种基因镶嵌变得更加多样化。虽然瞬时和稳定递送方法中靶基因型各不相同,但在六种已识别的潜在脱靶中未发现脱靶活性,这些脱靶存在两到四个错配。这些方法对环境的影响(温室气体 (GHG) 排放和一次能源需求)在很大程度上取决于它们各自的电力需求。从经济角度来看 - 就像大多数研究和开发一样
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•顾问:Sungho教授Won(won1@snu.ac.kr)Mater学位|公共卫生科学研究生院3月2017 - 2020年2月,首尔国立大学首尔,韩国B.S.|社会学 /数学统计3月< / div>2009 - 2016年2月,首尔国立大学首尔,韩国