XiaoMi-AI文件搜索系统
World File Search System荧光强度
补充材料
图S1：CBIPS30-4F-5的表征人类干细胞系衍生的视网膜色素上皮细胞（RPE）表达GFP。（a，b）转导的CBIPS30-4F-5-GFP克隆的表征。（a）HIPSC菌落表达了多能标记SOX2，SSEA4，NANOG和TRA-1-60（比例尺：100 µM），（B）保持正常的46，XY karyotype。（c，d）培养中分化的HIPSC-RPE-GFP细胞的荧光激活细胞分选。（c）HIPSC-RPE细胞种群的正向与侧散射图显示出均匀的分布，侧散射与GFP荧光强度（在Abscissas中）显示了人们认为阳性的种群（在正方形中突出显示）。（d）细胞分选之前和之后培养中的HIPSC-RPE细胞。比例尺：75 µm。（E，F）通过视网膜下注射套管（直径23/38G）后HIPSC-RPE细胞的生存力测试。（E）侧散射强度与碘化丙啶的流式细胞仪定量分析图显示出极好的细胞活力率（98.65％）相似的非注射细胞（98.36％）。（f）通过套管后，hipsc-rpe细胞未损坏，培养10天后保持活跃。比例尺：75 µm。使用25/41g视网膜下注射套管获得了相似的结果（未显示）。
LTCC 微流控系统
设计、生产并测试了一种 LTCC 微流体装置，该装置带有流体混合曲流、Y 型试剂接头、光学检测通道、光纤、流体输入/输出、加热器、温度传感器和专用温度控制器。连接光纤的配置允许测量光透射率和荧光强度。该装置用于液体的化学分析。微流体系统通过长光纤连接到典型的分析紫外-可见光和荧光光谱微分析系统。Golonka 等人在论文中介绍了系统中测得的光透射率和荧光。18 本文介绍了一种类似的系统，其中包含短石英光纤以及与 LTCC 模块集成的光源和检测器。介绍了微流体系统技术、石英光纤集成方法和温度控制器。为了验证透光率的测量效率，使用蠕动泵将 Ponceau IV R 溶液泵入 LTCC 微系统。使用光纤在 l 5 502 nm 处进行光学检测。采用高效 LED 作为光源，通过一根光纤将光传输到检测通道。另一根光纤连接到集成光检测器。
锰过度暴露会改变神经素的表达，并在幼虫斑马鱼
摘要：锰（MN）是一种用于各种酶类别的辅因子，是所有生物体的必需痕量金属。但是，过度暴露于MN会导致神经毒性。在这里，我们评估了暴露于Mn氯化物（MNCL 2）对生存力，形态，突触功能（基于神经素表达）和斑马鱼幼虫行为的影响。MNCL 2从受精后2.5 h暴露导致受精后5天的生存率降低（60％）。表型变化影响了身体长度，眼睛和嗅觉器官的大小以及视觉背景适应。这伴随着神经素免疫染色的荧光强度和神经素蛋白编码基因NRGNA和NRGNB的表达水平的降低，表明存在突触改变。此外，过度暴露于MNCL 2导致幼虫表现出姿势缺陷，运动活动的减少以及对光环境的偏爱受损。从鱼类水中去除MNCL 2后，斑马鱼幼虫恢复了它们的色素沉着模式并使其运动行为归一化，表明MN神经毒性的某些方面是可逆的。总而言之，我们的结果表明，MN过度暴露会导致斑马鱼幼虫中明显的形态改变，神经素表达的变化和行为障碍。
基于共感染和 CRISPR/Cas9 的昆虫细胞诱导敲除系统的评估
由于产品滴度相对较高且生产成本较低，杆状病毒/昆虫细胞表达系统被认为是生物制药行业的多功能生产平台。它在生产复杂的多聚蛋白质组装体（包括病毒样颗粒 (VLP)）方面表现出色，而病毒样颗粒 (VLP) 被认为是对抗新出现病毒威胁的有希望的疫苗候选物，这使得该系统更具吸引力。然而，在 VLP 生产过程中芽生杆状病毒的共同形成对下游加工构成了严峻挑战。为了减少表达上清液中芽生杆状病毒的数量，我们开发了一种基于 CRISPR/Cas9 的可诱导敲除系统，并与两个杆状病毒载体共感染：一个携带 Cas9 核酸酶，另一个整合了 sgRNA 表达序列。使用我们的设置可以单独生成高滴度病毒，因为只有当两种病毒同时感染细胞时才会发生敲除。当芽生必需基因 gp64 和 vp80 被敲除时，我们测量到杆状病毒滴度降低了 90% 以上。然而，结果，我们还测定了较低的整体 eYFP 荧光强度，表明重组蛋白产量减少，这表明需要进一步改进工程和纯化，以最终最大限度地降低利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统生产疫苗的成本和时间。
评估初级纤毛的人工智能方法
纤毛长度是保守的、严格调控的，在不同细胞类型和组织之间有所不同，并且直接影响它们的信号传导能力。例如，纤毛已被证明会响应纤毛 G 蛋白偶联受体的激活而改变其长度。然而，准确且可重复地测量大量纤毛的长度是一个耗时且劳动密集的过程。当前的方法也容易出错和产生偏差。人工智能 (Ai) 程序可用于克服许多这些挑战，因为它具有允许同化、操纵和优化大量数据集的能力。在这里，我们证明可以训练一个 Ai 模块来识别体内和体外样本图像中的纤毛。在使用训练过的 Ai 识别纤毛后，我们能够设计和快速使用应用程序来分析单个样本中数百个纤毛的长度、荧光强度和共定位。这种无偏方法增加了我们在体外比较不同原代神经元制剂样本以及动物体内和动物之间不同大脑区域样本时的信心和严谨性。此外，该技术可用于以高通量方式可靠地分析来自任何细胞类型和组织的纤毛动力学，涵盖多个样本和治疗组。最终，随着大多数领域转向更少偏见和更可重复的图像采集和分析方法，基于人工智能的方法可能会成为标准。
评估初级纤毛的人工智能方法
纤毛是基于微管的细胞附属物，在许多哺乳动物细胞类型中充当多种信号通路的信号中心。纤毛长度高度保守、严格调节，在不同细胞类型和组织之间有所不同，并且直接影响其信号传导能力。例如，纤毛已被证明会响应纤毛 G 蛋白偶联受体的激活而改变其长度。然而，准确且可重复地测量大量纤毛的长度是一个耗时且劳动密集的过程。当前的方法也容易出错和产生偏差。人工智能 (Ai) 程序可用于克服许多这些挑战，因为它具有允许吸收、操纵和优化大量数据集的能力。在这里，我们证明可以训练 Ai 模块来识别体内和体外样本图像中的纤毛。在使用训练后的 Ai 识别纤毛后，我们能够设计并快速利用应用程序来分析单个样本中数百根纤毛的长度、荧光强度和共定位。这种无偏方法增强了我们在体外比较不同原代神经元样本以及动物体内和动物之间不同脑区样本时的信心和严谨性。此外，该技术可用于在多个样本和治疗组中以高通量方式可靠地分析任何细胞类型和组织的纤毛动力学。最终，随着大多数领域转向更少偏向和更可重复的图像采集和分析方法，基于人工智能的方法可能会成为标准。
Immucor GTI Diagnostics，Inc -510（k）摘要
设备说明摘要柔和软件是一种配件，可帮助评估Imminex®仪器的Inmucor GTI Diagnostics，Inc。Immucor GTI Diagnostics，Inc。lifecodes®抗体检测套件和LifeCodes®HLA-SSO键入套件。由于HLA测试的复杂性质，合格的实验室人员必须审查任何结果以确保正确性。该过程的原理柔和软件旨在分析与LifeCodes套件一起使用时来自Luminex Fluoroanalyaler的原始数据。原始数据以CSV文件格式为单位，由测定中每个珠的中位荧光强度（MFI）值组成。使用探针/珠在生命码测定中获得的相对信号（MFI）可用于将探针/珠分配为具有正反应性或负反应性。此反过来提供了确定抗体检测试剂盒或HLA SSO键入试剂盒的建议等位基因所需的信息。可以打开生成的CSV文件，并使用MatchX软件处理数据。使用MatchX软件执行的计算和后续分析在使用LifeCodes套件的指令中概述。MatchX软件旨在帮助合格的实验室人员。由于HLA测试的复杂性质，合格的实验室人员必须审查任何临床或诊断结果，以确保正确性。该软件是实验室辅助工具，并不是要成为确定结果的唯一来源。MATCX软件利用了生命模型产品插入物中规定的分析方法。
通过介电油中的水滴进行电滴来将基因递送到哺乳动物细胞中的机理研究div>
，我们基于通过介电油中的水滴进行了短路，开发了一种新的方法，用于传递可渗透细胞的分子。将细胞悬架液滴放在具有强烈直流电场的一对电极之间，液滴弹跳和液滴变形，这会导致瞬时短路，这取决于电场强度。我们已经证明了使用短路成功地转移了各种哺乳动物细胞。但是，分子机械主义仍有待阐明。在这项研究中，用Jurkat细胞进行流式细胞仪测定。用液滴弹跳或短路处理含有jurkat细胞的水滴和带有荧光蛋白的质粒。短路可导致24小时孵育后足够的细胞活力和荧光蛋白表达。在很重要的情况下，液滴弹跳并未导致成功转染基因转染。通过摄取可耐细胞荧光染料yo-pro-1和钙离子的涌入来研究瞬态膜孔的形成。结果，短路增加了Yo-Pro-1氟-1荧光强度和细胞内钙离子浓度，但液滴弹跳没有。我们还研究了内吞作用对转染的贡献。用内吞作用抑制剂对细胞的预处理以依赖性的方式降低了基因转染的效率。此外，使用pH敏感的染料偶联物表明在短路后内体中形成了酸性环境。内吞作用是细胞内递送外源性DNA的可能机制。
使用LIF荧光核轨道检测器检测质子轨道
荧光检测核轨迹是一种辐射测量方法，最初是由Akselrod和使用Al 2 O 3：C，Mg单晶的同事开发的（Akselrod等，2006a; Akselrod等，2006b），并成功地引入了应用程序的各个领域（Al.akselenber and kousselrodg，akselrodg and akselrodg and.220; akselrod等人，2006b）。 2018年; Akselrod和Sykora，2013年；在过去的几年中，发现另一种材料适合用作荧光核轨道检测器（FNTD）：未含量的氟氟化锂晶体（Bilski和Marczewska，2017; Bilski等，2019b）。LIF中粒子轨迹的荧光成像的物理机制是基于创建的，这是通过电离颗粒F 2颜色中心在晶体晶格中的产生。这些中心用蓝光（在445 nm左右的波长）激发时，在红色光谱范围内发出光致发光（在670 nm处达到峰值）。使用荧光显微镜，使用高放大倍数和灵敏的数码相机，可以以低于1微米的分辨率对辐射轨道进行成像。轨道强度是从轨道发出的荧光灯的强度，取决于电离密度，即，即局部沉积的能量的量。lif晶体已成功地用于图像各种离子的轨道，从氦与铁不等（Bilski等，2019a）。对于质子，对于高能梁，像放射疗法中使用的光束一样，由于这些颗粒的电离密度较低，很难观察到原代质子的单个轨道。对质子辐照的LIF晶体的初步分析揭示了某些荧光轨道的存在，但仅以几乎没有分布的斑点的形式。 这些斑点的数量比撞击晶体上的质子数量低的数量级。 它们的荧光强度非常低 - 与伽马辐射产生的轨道的强度相似。 因此，很难确定观察到的轨道是由原代质子，能量降解的质子还是由某些二次颗粒产生的。 另一方面，众所周知，低能质子可能会产生完全不同的轨道，因为它发生在热中子辐照的LIF晶体中，其中由2.73 MeV 3 h核产生的轨道（中子的核反应与6 Li核的核反应的产物）可见（Bilski等人，2018年）。 因此，本工作的目的是更仔细地研究LIF FNTD在检测低能和高能量质子方面的能力。 该受试者不仅与放射疗法质子束的测量相关，而且与质子丰富的宇宙辐射的剂量计有关。对质子辐照的LIF晶体的初步分析揭示了某些荧光轨道的存在，但仅以几乎没有分布的斑点的形式。这些斑点的数量比撞击晶体上的质子数量低的数量级。它们的荧光强度非常低 - 与伽马辐射产生的轨道的强度相似。因此，很难确定观察到的轨道是由原代质子，能量降解的质子还是由某些二次颗粒产生的。另一方面，众所周知，低能质子可能会产生完全不同的轨道，因为它发生在热中子辐照的LIF晶体中，其中由2.73 MeV 3 h核产生的轨道（中子的核反应与6 Li核的核反应的产物）可见（Bilski等人，2018年）。因此，本工作的目的是更仔细地研究LIF FNTD在检测低能和高能量质子方面的能力。该受试者不仅与放射疗法质子束的测量相关，而且与质子丰富的宇宙辐射的剂量计有关。
Susan Cornell-Kennon1，Matthew Hakar1，Hayley ...
蛋白激酶的活性在癌症中促进肿瘤发生和恶性转化的致癌信号通路的异常激活中起关键作用。akt已被证明在癌细胞中既被上调又突变，从而使其成为癌细胞生长和进展的驱动力。抑制AKT激活和活性都是有效发现癌症药物的有吸引力的靶标。 我们开发了全长不活动AKT1，AKT2和AKT3的连续均匀测定。 用磺胺氧氧化荧光团（SOX）修饰的肽底物利用螯合增强的荧光，以实时对Akt活性进行实时读数。 首先，评估了30,000个现有的含Sox序列的子集，以发现Akt1可以磷酸化，选择天然底物，测定鲁棒性和AKT特异性的序列。 鉴定出与生理相关的肽底物，并用于开发动力学测定以监测AKT1激活和底物磷酸化。 与DOPS/DOPC和磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸（PIP3）一起孵育，该磷酸（PIP3）模拟质膜，从而使Pleckstrin同源（pH）结构域允许Akt的akt结构域，使Akt结合，导致构象变化，导致构象的变化，使得tyr-333343333333333333.43433333434333433343333333333.4333333333333343334333。 PDK1和MK2用于完全激活。 在启动测定时，主动Akt磷酸化了传感器肽，并使用荧光强度读数（EX/EM 360/485 nm）以动力学模式读取所得信号（在每个井中启用进度曲线）。抑制AKT激活和活性都是有效发现癌症药物的有吸引力的靶标。我们开发了全长不活动AKT1，AKT2和AKT3的连续均匀测定。用磺胺氧氧化荧光团（SOX）修饰的肽底物利用螯合增强的荧光，以实时对Akt活性进行实时读数。首先，评估了30,000个现有的含Sox序列的子集，以发现Akt1可以磷酸化，选择天然底物，测定鲁棒性和AKT特异性的序列。鉴定出与生理相关的肽底物，并用于开发动力学测定以监测AKT1激活和底物磷酸化。与DOPS/DOPC和磷脂酰肌醇3,4,5-三磷酸（PIP3）一起孵育，该磷酸（PIP3）模拟质膜，从而使Pleckstrin同源（pH）结构域允许Akt的akt结构域，使Akt结合，导致构象变化，导致构象的变化，使得tyr-333343333333333333.43433333434333433343333333333.4333333333333343334333。 PDK1和MK2用于完全激活。在启动测定时，主动Akt磷酸化了传感器肽，并使用荧光强度读数（EX/EM 360/485 nm）以动力学模式读取所得信号（在每个井中启用进度曲线）。利用AQT0076，DOPS/DOPC，PIP3，PDK1和MK2开发了一种用于Akt激活和底物磷酸化的新颖测定法。与经典AKT抑制剂和变构抑制剂的混合在一起，我们可以通过剂量反应测量来证明抑制活性AKT活性和非活性AKT激活。结论：开发了一种稳健的均质测定，以同时随着时间的推移对Akt激活和底物磷酸化进行监测。通过连续测定格式，可以同时捕获稳态速率和速率加速度作为抑制剂浓度的函数，从而可以精确地定量单个实验格式的Akt抑制剂。因此，该测定法可以用于药物发现中，以评估Akt激活和随后的底物磷酸化的潜在抑制剂，以防止癌细胞的生长和进展。