包括荧光素在内的呫吨染料是一类在自然科学中有着广泛应用的荧光染料,荧光素衍生物是重要的荧光探针,广泛应用于各种物体的检测和光学成像。荧光素衍生物通常是在荧光素呫吨环和苯部分上引入醛基或通过酯化反应制备而成。目前的研究主要集中在将氨基与荧光素单醛连接起来,因为这些衍生物具有很高的活性,可以与分析物络合,从而增加或降低荧光强度。因此,本文旨在总结荧光素探针的不同合成方法、光学性质、可能的机理和应用,为筛选具有高灵敏度和有效生物检测的荧光素探针提供参考,进一步提高其在分析物传感检测,特别是在生物成像方面的应用。关键词: 荧光素, 呫吨, 荧光强度, 生物成像, 单醛
目录 #60505 描述 磷酸二酯酶 (PDE) 在 cAMP 和 cGMP 信号的动态调节中起着重要作用。PDE4D 具有 3',5'-环-AMP 磷酸二酯酶活性并降解 cAMP。PDE4D 抑制剂抑制其活性会导致细胞内 cAMP 水平升高。PDE4D 基因编码至少 9 种不同的异构体,与中风、哮喘、心律失常和心肌病有关,使其成为重要的治疗靶点。PDE4D 细胞活性检测旨在筛选培养细胞中的 PDE4D7 抑制剂。该检测基于用 CRE 荧光素酶报告基因转染细胞。CRE 报告基因包含受 cAMP 反应元件 (CRE) 控制的萤火虫荧光素酶基因。细胞内 cAMP 升高会激活 CRE 结合蛋白 (CREB) 以结合 CRE 并诱导荧光素酶的表达。福斯高林常用于提高细胞生理学研究中的细胞内 cAMP 水平。当用 CRE 报告基因瞬时转染的细胞被福斯高林激活时,细胞内 cAMP 水平上调,从而诱导 CRE 荧光素酶报告基因的表达。然而,当细胞用 PDE4D7 表达载体和 CRE 报告基因共转染时,福斯高林诱导的 cAMP 水平降低,导致荧光素酶表达水平降低。当用 PDE4D 抑制剂处理细胞以抑制 PDE4D7 活性时,cAMP 水平恢复,导致荧光素酶活性更高。该试剂盒包括 CRE 荧光素酶报告基因(预混有组成性表达的 Renilla(海三色堇)荧光素酶载体,作为转染效率的内部对照)、PDE4D7 表达载体和福斯高林。应用
ucd-pymt,产生显性阴性蛋白,该蛋白特异性抑制了由Charles Vinson(NCI,Bethesda,MD,MD,USA)提供的C/EBP成员的DNA结合。根据制造商的说明,使用JetPEI(Polytransfection; Qbiogene,Irvine,CA,美国)进行瞬态转染。允许转染进行16小时,并用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理细胞24小时,然后再诱导凋亡或用TCDD处理TCDD进行RNA表达分析。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。 16小时后,用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理4小时。将细胞裂解,并使用Luminometer(Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡)使用荧光素酶报告基因测定系统(Promega Corp.,Madison,WI)测量荧光素酶活性。 使用Bradford染料测定法(Bio-Rad Laboratories,Inc。,Hercules,CA)将相对光单元标准化为蛋白质浓度。用于DRE荧光素酶报告基因测定UCD-PYMT细胞用DRE报告基因质粒瞬时转染。16小时后,用1 nm TCDD或0.1%DMSO(对照)处理4小时。将细胞裂解,并使用Luminometer(Berthold Lumat LB9501/16;宾夕法尼亚州匹兹堡)使用荧光素酶报告基因测定系统(Promega Corp.,Madison,WI)测量荧光素酶活性。使用Bradford染料测定法(Bio-Rad Laboratories,Inc。,Hercules,CA)将相对光单元标准化为蛋白质浓度。
荧光素酶测定允许研究转录基因表达,病毒生命周期,细胞活力和生化过程,使其成为药物开发的重要工具。您是否正在寻找记者基因,ATP检测,我们的荧光素酶发光测定选项以便利的微板格式提供了高灵敏度。
冷泉港实验室DNA 学习中心(DNALC)是世界上第一个完全致力于遗传学教育的科学中心。超过 30,000 名学生参加过我们的科学营。在经验丰富的指导老师的带领下,升6 至12 年级的学生使用先进的 实验设备和计算机设备进行领先于同侪好几个年级的实验。
摘要:人类和其他生物体通过大气、饮用水、食物或直接接触不断接触成千上万种化学物质。这些化学物质中很大一部分浓度很低,即使在未观察到不良影响水平 (NOAEL) 下也可能产生协同作用。复杂的污染物混合物很难通过传统的毒理学方法进行评估。人们越来越关注不同污染物如何通过影响昼夜节律而诱导人体不良的生理功能。然而,从大量化学物质或其复杂混合物中筛选出具有昼夜节律破坏作用的化合物非常困难。我们通过 CRISPR/Cas9 建立了稳定的萤火虫荧光素酶报告基因敲入 U2-OS 细胞系,以筛选昼夜节律破坏污染物。荧光素酶基因插入核心时钟基因 BMAL1 下游并由内源启动子控制。与使用外源启动子的检测系统相比,这些细胞能够检测干扰 BMAL1 基因表达介导的昼夜节律系统的化合物。U2-OS 敲入细胞显示,当用 BMAL1 抑制剂和激活剂处理时,BMAL1 和荧光素酶活性发生了平行变化。此外,荧光素酶报告基因具有高灵敏度,比传统毒理学方法更快、更经济。敲入细胞系可用于高通量、高效筛选破坏昼夜节律的化学物质,例如药物和污染物。
▪129 sV小鼠▪tlr7/8铅拮抗剂与mRNA以各种比率混合▪编码萤火虫荧光素酶的未经改性mRNA▪拮抗剂 - 拮抗剂 - 液化液作用为LNP▪静脉注射10或30 µg mRNA-LNP的静脉内注射和6H和24H分析的ERNAINS INSTER ERNAINS INSTER ERNAINS ERANTION ERANTION ERANTION ERANTION ERANTION ERANTION ERANTION ERANTION ERANTION ERANTION + ERNAINS分析▪从血清▪器官裂解物中的荧光素酶活性
冷泉港实验室DNA学习中心(DNALC)是世界上第一个完全致力于关系教育的科学中心。超过30,000名学生参加了我们的科学营。在老师丰富的指导下,升6至12年级的学生使用先进的实验设备和电脑设备进行了同侪好几个年级的实验。