1 浙江大学动物科学学院预防兽医学研究所、动物医学院,杭州 310058;2 浙江大学海南学院,三亚 572025;3 宁波市农业科学院,宁波 315040;4 上海市疾病预防控制中心微生物室,上海 200336;5 河南畜牧经济学院动物医学院,郑州 450053;6 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物细菌病防控药剂重点实验室,武汉 430064;7 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室细菌性疾病研究室,哈尔滨 150069; 8 中国农业科学院家禽研究所,扬州 225125;9 中国农业科学院上海兽医研究所动物卫生研究室,上海 200241;
摘要 菌毛介导的初始粘附是产肠毒素大肠杆菌 (ETEC) 感染所需的初始和关键步骤。因此,已经开发出针对这些菌毛并诱导特异性抗菌毛抗体以阻断 ETEC 初始粘附的候选疫苗。虽然这种疫苗可以有效预防 ETEC 相关的断奶后腹泻 (PWD),但由于这些抗原之间的免疫异质性,开发一种广泛有效的针对 ETEC 初始粘附的疫苗仍然是一个具有挑战性的问题。在这里,我们应用多表位融合抗原 (MEFA) 技术构建了 FaeG–FedF–FanC–FasA–Fim41a MEFA,使用主要菌毛 K88 和 F18 的粘附亚基作为骨架,它还整合了来自稀有菌毛 K99、987P 和 F41 的粘附亚基的表位;然后我们生成了一个 MEFA 计算模型并在免疫小鼠中测试了这种 MEFA 蛋白的免疫原性。接下来我们通过体外评估其抗菌毛、抗体导向的细菌粘附抑制作用,评估了针对菌毛的 MEFA 作为疫苗候选物有效预防 PWD 的潜力。计算模型表明,所有相关表位都暴露在 MEFA 表面,并且用 MEFA 蛋白皮下免疫的小鼠产生了针对所有五种菌毛的 IgG 抗体。此外,MEFA 蛋白诱导的抗菌毛抗体显著抑制了 K88 + 、F18 + 、K99 + 、987P + 和 F41 + ETEC 菌株对猪小肠 IPEC-1 和 IPEC-J2 细胞系的粘附。综合起来,这些结果表明 FaeG–FedF–FanC–FasA–Fim41a MEFA 蛋白诱导了针对五种目标菌毛的特异性抗菌毛中和抗体。至关重要的是,这些结果显示了菌毛靶向 MEFA 的潜力,并表明它们有望成为一种广泛有效的 PWD 疫苗。关键词:ETEC、PWD、菌毛、MEFA、疫苗
摘要背景/目的:鲍曼不动杆菌是一种重要的院内病原体。为了更好地了解鲍曼不动杆菌 CsuA/BABCDE 菌毛在毒力中的作用,进行了细菌生物膜形成、粘附和碳水化合物介导的抑制研究。方法:克隆鲍曼不动杆菌 ATCC17978 的 CsuA/BABCDE 菌毛产生操纵子(简称 Csu 菌毛),以分析非生物塑料平板上的生物膜形成、细菌对呼吸道上皮人 A549 细胞的粘附和碳水化合物介导的抑制。用于抑制生物膜形成和对 A549 细胞粘附的碳水化合物包括单糖、吡喃糖苷和甘露糖聚合物。结果:将鲍曼不动杆菌ATCC17978的Csu菌毛克隆表达到不产生菌毛的大肠杆菌JM109中,并将其敲除。在电镜和原子力显微镜下观察大肠杆菌JM109/rCsu菌毛产生克隆上重组Csu(rCsu)菌毛丰富,而Csu敲除的鲍曼不动杆菌ATCC17978