生物标志物是生物过程的量化特征。在结核分枝杆菌中,用于临床药物开发中使用的常见生物标志物是痰液样品的菌落成型单元(CFU)和时间阳性(TTP)。该分析旨在开发用于CFU和TTP生物标志物的合并定量结核病生物标志物模型,用于评估早期杀菌活性研究中的药物效率。每日CFU和TTP观察结果在83例不同的利福平单一疗法治疗(10 - 40 mg/kg)研究7天后,从HighRif1研究中进行了7天,包括在此分析中。使用CFU和TTP数据同时使用CFU和TTP数据同时确定在三个细菌子阶段的药物暴露 - 响应关系,采用了与利福平药代动力学模型相关的多脉冲结核病模型,该模型与利福平药代动力学模型相关。CFU,并通过TTP模型的事实方法预测了TTP,该方法通过将MTP模型中所有细菌子群传递到一个细菌TTP模型,将其与MTP模型链接到MTP模型。最终模型很好地预测了非线性CFU-TTP关系。合并的定量结核病生物标志物模型提供了一种有效的方法,用于评估早期杀菌活性研究中CFU和TTP数据所告知的药物效率,并描述了随着时间的推移CFU和TTP之间的关系。
使用最佳接种物稀释对照培养基的微生物测试:胰蛋白胨大豆琼脂、富含 5% v/v 马血的哥伦比亚血琼脂基质、富含 5% v/v 巧克力马血的哥伦比亚血琼脂基质或 Sabouraud 葡萄糖琼脂(视情况而定)在 37±2°C 下孵育 18 小时后的反应培养基受到 10-100 个菌落形成单位的攻击化脓性链球菌 ATCC® 19615 浑浊生长肺炎链球菌 ATCC® 6303 浑浊生长肺炎链球菌 ATCC® 6305 浑浊生长粪肠球菌 ATCC® 19433 浑浊生长铜绿假单胞菌 ATCC® 27853 浑浊生长可见生长代表满意结果。在厌氧条件下 37 ± 2°C 培养 18 小时后的反应(有关详细信息,请参阅 Oxoid 手册 - 大气生成系统) 培养基中出现 10-100 个菌落形成单位 肺炎链球菌 ATCC® 6305 浑浊生长 可见生长代表满意的结果。 在 37 ± 2°C 培养 48 小时后的反应 培养基中出现 10-100 个菌落形成单位 白色念珠菌 ATCC® 10231 浑浊生长 可见生长代表满意的结果。
图 2:DLD-1 BRCA2 (-/-) 细胞在菌落形成试验中对 NU1025 表现出选择性敏感性,而对非靶向药物吉西他滨没有选择性。
目的:据报道,内皮菌落形成细胞(ECFC)在Moyamoya病(MMD)的发病机理中起重要作用。我们以前已经观察到具有小管形成功能障碍的MMD ECFC的停滞生长。我们旨在验证MMD ECFC功能缺陷所涉及的关键调节器和相关信号通路。方法:从健康志愿者(正常)和MMD患者的外周血单核细胞中培养ECFC。低密度脂蛋白摄取,流式细胞术,高含量筛选,与衰老相关的β-半乳糖苷酶,免疫荧光,细胞周期,小管形成,微阵列,实时定量聚合酶链链链,实时定量聚合酶链反应,小型干扰RNA转移和蛋白质布局及其蛋白质分析。结果:MMD患者中可以培养的细胞可以长期以来培养的细胞明显低于正常患者。与正常的ECFC相比,MMD ECFC与G1细胞周期停滞和细胞衰老的细胞增殖降低降低。途径富集分析表明,细胞周期途径是主要的富集途径,这与ECFC功能分析的结果一致。与细胞周期相关的基因,细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2a(CDKN2A)在MMD ECFC中的表达最高。MMD ECFC中CDKN2A的敲低通过减少G1细胞周期停滞并通过调节CDK4和磷酸化视网膜细胞母细胞瘤蛋白来抑制衰老,从而增强了增殖。MMD ECFC中CDKN2A的敲低通过减少G1细胞周期停滞并通过调节CDK4和磷酸化视网膜细胞母细胞瘤蛋白来抑制衰老,从而增强了增殖。结论:我们的研究表明,CDKN2A通过诱导细胞周期停滞和衰老而在MMD ECFC的生长迟缓中起重要作用。
微生物,其中数量最多、种类最多的是细菌。微生物群(也称微生物组)的基因组比人类基因组大近100倍[3]。这样,肠道微生物群可以被视为一个外化的器官,对整体代谢以及食物转化为营养物质和能量非常重要。微生物的数量超过 10 个细菌,以厌氧微生物群落为主,包含 500-1,000 个不同的物种 [14]。 99%的栖息微生物属于40个物种。细菌密度沿小肠走向逐渐变化,空肠约有10个/克肠腔内容物,回肠末端有10个/克菌落形成单位,其中以革兰氏阴性需氧菌和一些专性厌氧菌为主[4,7]。在结肠中,细菌数量达到每克10个菌落形成单位,且以厌氧菌为主[12]。研究发现,粪便中 60% 由细菌组成 [4]。
f i g u r e 3的α-替丁氨酸和番茄和菌落形成单元(CFU)的含量取决于伪 - 裂圈系统的距离。α-替代(4 mM)。(a)在距人造根每5 mm的距离内,α-替丁氨酸和番茄的浓度。红色条代表α-替代的含量;紫色条代表番茄的内容。分别使用Tukey的测试分别为tomatine和tomatidine的内容分别表示统计上显着的差异(tomatine; tomatine; a - b)在统计上具有显着差异(p <.05)。(b)CFU在距人造根每5 mm的距离内在土壤中计数。蓝色条代表渗出条件,红色条代表α-替代的条件。使用Tukey的测试,不同的字母(A - C)表示菌落形成单元数的统计学显着差异(P <.05)。错误条表示标准偏差(所有样本,n = 4)。
膜过滤测试的生物负载估计样品中可存活的需氧微生物总量,结果以菌落形成单位 (CFU) 表示。在胰蛋白胨大豆琼脂 (TSA) 上孵育 3 – 5 天后评估细菌生长情况,在 Sabouraud 葡萄糖琼脂 (SDA) 上孵育 5 – 7 天后评估真菌生长情况。
UL 2824测试符合ASTM D6329的要求,是UL年度GreenGuard认证计划的一部分,该计划认可了在室内空气质量方面具有出色性能的产品。该测试是在Dupont™Tedlar™壁橱产品上进行的,作为年度认证的一部分。墙壁由透明的Tedlar®PVF膜组成,使用粘合剂层压到装饰性PVC底物。将材料放入无菌的培养皿中,将已知浓度的brevi-compactum接种,并在25°C下以95%的湿度放入环境室中三周。正容易受到真菌生长的阳性对照样品,并平行运行以验证微生物的活性。在测试的开头和结束时计数菌落形成单元的数量(CFU),并根据表2所示的标准提供了评级。dupont™Tedlar™壁挂式墙面测试后达到了最高的评分,表明它对霉菌的生长具有很高的耐药性。用于计算此评级的菌落形成单元的数量在表3中显示了墙壁和对照材料的数量。
‡ 通信地址:aashiq.kachroo@concordia.ca 关键词:基因组工程、CRISPR-Cas9、人源化酵母、蛋白酶体 缩写:CFU、菌落形成单位;DSB、双链断裂;HDR、同源定向 DNA 修复;HR、同源重组;CELECT、基于 CRISPR-Cas9 的选择以丰富基因型;MERGE、无标记富集和重组基因工程位点;SGA、合成遗传阵列
‡ 通信地址:aashiq.kachroo@concordia.ca 关键词:基因组工程、CRISPR-Cas9、人源化酵母、蛋白酶体 缩写:CFU、菌落形成单位;DSB、双链断裂;HDR、同源定向 DNA 修复;HR、同源重组;CELECT、基于 CRISPR-Cas9 的选择以丰富基因型;MERGE、无标记富集和重组基因工程位点;SGA、合成遗传阵列