通过外切酶融合改进 FnCas12a 基因组编辑 吴永强 1*,袁其晨 2*,朱玉峰 3,高翔 4,宋家宝 5,尹子如 6 1 河北科技大学基因编辑研究中心,河北石家庄 050018。2 美国莱斯大学化学与生物分子工程系,休斯顿,德克萨斯州 77005,美国。3 河北科技大学科技发展研究所,河北石家庄。4 河北科技大学环境科学与工程学院,河北石家庄 050018。5 河北科技大学生物科学与生物工程系,河北石家庄。 6 河北科技大学期刊出版社,河北石家庄 050018。 * 通讯作者:吴永强(wuyongqiang@hebust.edu.cn),袁其晨(yqc@rice.edu) 摘要 在目前报道的 Cas12a 直系同源物中,新凶手弗朗西斯菌 Cas12a (FnCas12a) 受原型间隔区相邻基序 (PAM) 的限制较少,这将有助于靶向以前无法接近的基因组位点。然而,FnCas12a 核酸酶的活性在人体细胞中相对较低或无法检测到,限制了其作为理想基因组工程工具的应用。在这里,我们描述了 TEXT(将 EXonuclease T5 与 FnCas12a 连接),这是一种融合策略,可显着提高人体细胞中 FnCas12a 在三种不同细胞系中的多个基因组位点的敲除效率。使用18nt至23nt的不同间隔长度,TEXT的插入和删除(indel)效率均高于FnCas12a,其中18nt的插入效率最高,比FnCas12a高出11倍。深度测序表明,TEXT显著增加了目标位点的删除频率和删除大小。TEXT增强了FnCas12a核酸酶的活性,拓展了其在人类细胞基因组工程中的应用。
我们精心设计的 HOE 无缝嵌入挡风玻璃,与 LED 投影仪系统搭配使用,巧妙且经济高效地集成在车厢内,使这一创新解决方案适合大规模采用。HoloFlekt ® 技术可以将任何挡风玻璃或其他玻璃结构转变为超亮、全彩和紧凑的平视显示器,无论外部光线条件如何,安全、操作、导航和信息娱乐内容都可以清晰、无干扰地显示。
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图 2:(a) 316L+20%WC 复合材料的 SEM 显微照片。部分溶解的 WC 碳化物(亮圆圈)均匀分散在增强基质中。(b) (a) 的特写视图,显示了部分溶解的 WC 碳化物(浅灰色)的紧邻区域以及由凝固碳化物组成的网络。(c) (a) 的另一个特写视图,重点关注熔池和 HAZ 之间的过渡及其各自的凝固碳化物。
6.1.1 设置在线校正参数 ...................................................................................................................................................... 42 6.1.2 获取平均校正系数 ...................................................................................................................................................... 43 6.1.3 管理校正系数 ...................................................................................................................................................... 44 6.1.4 管理双重校正系数 ............................................................................................................................................. 48 6.2 调整亮度 ...................................................................................................................................................................... 50 6.3 校正较亮像素 ............................................................................................................................................................. 54 6.4 设置高级色彩 ............................................................................................................................................................. 56 6.5 调整屏幕效果 ............................................................................................................................................................. 59 6.6 设置 Image Booster Engine(适用于 Windows 7) ............................................................................................................. 60
1将钥匙插入钥匙插槽中。编程作业会自动启动。Ö数据已编程为密钥。编程过程可能需要几分钟,具体取决于数据量。在此期间,三个LED闪烁白色。Ö完成编程任务已成功完成时,两个升高的声学信号声音,三个LED熄灭,并且显示器亮起了绿色。2卸下钥匙。
儿童睡眠的环境也会影响儿童睡眠的质量和数量。如果孩子感到兴奋,如果他们周围发生了很多事情,如果他们刚跑来跑去,如果他们的睡眠和休息时间是无法预测的,或者每天都有很大差异,或者他们不感到安全,很难入睡。,如果睡眠区域炎热,闷闷不乐,光线亮或不舒服,孩子也很难入睡。在睡眠之前使用数字设备也会影响儿童睡眠。
抑制蛋白:将20 mg溶解在10毫升的水或PBS中以获得2mg/ml的库存(1000x)。工作浓度为2µg/ml,因此在1 ml裂解缓冲液中加入1µL汤。亮肽素:将50毫克溶解在10.5毫升的水中,获得10毫米汤(1000x)。工作浓度为10 µm,因此在1 mL裂解缓冲液中加入1μL汤料。
在 250 ng vTPA(截短组织型纤溶酶原激活剂)模板质粒 DNA、1 µl 增强剂 1、1 µl 增强剂 2 和 20 单位 RNase 抑制剂(含有 PURExpress® 体外蛋白质合成试剂盒的成分)存在下进行 25 µl 反应,在 37°C 下孵育 2 小时,通过 SDS-PAGE 和考马斯亮蓝检测测定,可得到预期的 40 kDa 产物。