digeorge综合征临界区域基因2(DGCR2)蛋白已被认为是胰腺中的β细胞特异性蛋白,但到目前为止,缺乏适用于靶向药物或分子成像的可用高亲和力粘合剂。杂物分子属于一类小亲和力蛋白,具有出色的分子成像特性。在这里,我们进一步验证了胰腺和干细胞(SC)衍生的β细胞中DGCR2的存在,然后描述靶向人DGCR2的几种候选候选物的产生和选择。使用内部开发的定向进化方法,生成了新的DGCR2结合分子并评估了热稳定性和亲和力。杂物分子变体进一步开发为将成像试剂传递到β细胞的靶向剂。Affibody分子Z DGCR2:AM106显示纳摩尔亲和力,合适的稳定性和生物分布,对胰岛的毒性可忽略不计,将其作为用于进一步开发的合适铅候选者,作为用于特定药物递送和对Beta细胞成像的特定递送的工具。
组分 24 次反应 48 次反应 P-2014-24 P-2014-48 CP1(洗涤缓冲液) 28 ml 2 x 28 ml CP2(抗体缓冲液) 15 ml 30 ml CP3C(5X 裂解缓冲液 I) 12 ml 24 ml CP3D(裂解缓冲液 II) 3 ml 6 ml CP3E(裂解缓冲液 III) 2 ml 4 ml CP3F(裂解缓冲液 IV) 1.5 ml 5 ml CP4(ChIP 稀释缓冲液) 2 ml 6 ml CP5(DNA 释放缓冲液) 2 ml 2 x 2 ml CP6(反向缓冲液) 2 ml 2 x 2 ml CP7(结合缓冲液) 5 ml 8 ml CP8(洗脱缓冲液) 0.6 ml 1.2 ml 蛋白酶抑制剂混合物 (100X)* 25 µl 50 µl 非免疫 IgG (1 mg/ml)* 10 µl 10 µl 抗二甲基 H3-K9 (1 mg/ml)* 5 µl 8 µl 蛋白酶 K (10 mg/ml)* 25 µl 50 µl 8 孔检测条(带框架) 3 6 8 孔条盖 3 6 F-Spin Column 30 50 F-Collection Tube 30 50 * 使用前将溶液旋至底部。 运输和储存
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一氧化氮 (NO) 是许多生理过程的分子介质,包括血管舒张、炎症、血栓形成、免疫和神经传递。目前有许多方法可用于测量生物系统中的 NO。其中一种方法是使用 Griess 重氮化反应,通过分光光度法检测生理条件下 NO 自发氧化形成的亚硝酸盐。该方法的检测限为 1.0 µM 亚硝酸盐。Griess 反应还可用于通过硝酸盐催化还原为亚硝酸盐来分析硝酸盐。
该测试基于测量吞噬 FITC 标记大肠杆菌的细胞的荧光。将肝素化血液样本与荧光大肠杆菌混合,并在 37 °C 下孵育。使用不含大肠杆菌的阴性对照来设置吞噬细胞和非吞噬细胞之间的鉴别边界。通过反复清洗去除未吞噬的细菌。使用台盼蓝(一种不会穿透细胞膜的活体染料)淬灭任何剩余的细胞外或表面结合细菌。裂解红细胞,固定细胞,并用碘化丙啶染色 DNA,以区分有核细胞和细菌碎片或团块。测试中使用的大肠杆菌用人 AB 血浆调理,确保结果不主要取决于测试血液样本的调理活性。
试剂盒特异性:此检测试剂盒含有可识别 AXIN-2 上不同表位的抗体。此试剂盒检测的蛋白质对应于 UniProt ID Q9Y2T1。AXIN-2 也称为轴蛋白样蛋白 (Axil)、轴抑制蛋白 2 和 Conductin。这些抗体可识别人类来源的 AXIN-2。其他物种应根据具体情况进行测试。对照裂解物信息:阳性对照裂解物:由 SW 48 细胞制备,在含有 10% FBS 的培养基中在 T175 烧瓶中培养至汇合,并用 2.5 mL 裂解缓冲液裂解。代表性数据:使用 2 板 2 孵育方案获得的数据。将 SW 48 细胞以 40K 细胞/孔接种在 96 孔板中并孵育过夜。用指定浓度的 Tankyrase 抑制剂 (XAV-939) 处理细胞 24 小时。使用裂解缓冲液裂解细胞,然后使用相应的 SureFire Ultra 试剂盒分别测定 AXIN-2 Total 和 ERK1/2 Total。相当于约 4,000 个细胞/数据点。
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正在申请专利的 ExpressPlex 2.0 文库制备试剂盒采用方便的 384 孔 PCR 板配置,可用于高通量多重文库制备。此升级版 ExpressPlex 使用 seqWell 的高性能 TnX ™ 转座酶,该转座酶专为 NGS 文库制备而设计。扩增子 (>350 bp) 和质粒 DNA 是适合该试剂盒的标准输入。附录 E 重点介绍了可以针对小型微生物全基因组测序进行的修改。ExpressPlex 文库与 Illumina MiSeq ™ 、NextSeq ™ 、iSeq ™ 和 NovaSeq ™ 测序平台兼容。每个 ExpressPlex 2.0 - 384 孔试剂盒都包含足够的试剂,可从 384 或 1,536 个单独的 DNA 样本制备与 Illumina 兼容的文库。每个库的标准制备量为 384 个样本,每个试剂盒最多 1,536 个样本。有四种不同的试剂盒可用于从 1,536 个样本中制备文库,在一次测序运行中可加载总共 6,144 种条形码组合。这种多重文库制备程序针对每 8 µl 反应 0.5 - 20 ng 质粒或扩增子 DNA 的输入进行了优化,通常可生成 400 – 1,200 bp 的文库片段长度。文库片段长度取决于 DNA 的质量和所用的磁珠清理率。使用 ExpressPlex 文库制备试剂盒的主要优势和好处是简化的一步式多重文库制备工作流程,可在 40 倍的 DNA 输入浓度范围内自动标准化每个样本的读取输出,同时最大限度地减少人工和耗材成本。使用 ExpressPlex 2.0 – 384 孔试剂盒,可在 120 分钟内制备 384 重文库以进行文库 QC 和测序,手动操作时间不到 30 分钟。
Auto-Mag® DNA 片段分选纯化回收试剂(磁珠法)是一款基于顺磁珠技术开发的高性能试剂,专为满足 下一代测序 (NGS) 文库构建中的 PCR 产物、DNA 片段和 RNA 的纯化需求而设计,同时支持 DNA 片段的大 小分选与高效回收。在 PCR 产物纯化方面,该试剂提供了单管和 96/384 孔板两种灵活格式,通过优化的缓 冲液选择性地结合 >100 bp 的 PCR 扩增产物,利用简便的清洗步骤去除多余引物、核苷酸、盐和酶,最终 使用低盐洗脱缓冲液或水进行温和高效的洗脱。在 DNA 片段大小分选中,用户可通过调整试剂与 DNA 样 本的体积比,精准选择目标 DNA 片段范围,并通过结合、洗涤和洗脱的简单操作回收分布均匀、符合实验 需求的目标 DNA 片段。