• 高性能:从琼脂糖凝胶中提取和纯化 DNA 时,可获得高产量(高达 5 μg)和高纯度,同时能够去除污染物和残留盐。• 高浓度:以非常小的体积洗脱,仅需 5 μl 即可洗脱,从而获得高度浓缩的 DNA。• 节省时间:仅需 10 分钟的旋转和孵育时间的简短协议即可完成工作流程。• 独特的柱设计:旋转柱采用独特设计,能够以少量洗脱,并最大限度地减少缓冲液保留和污染物携带。• 优化的缓冲液:缓冲系统经过优化,无需调整 pH 值或添加异丙醇。• 应用兼容性:纯化的 DNA 可用于下游分子应用,例如限制性消化、DNA 测序、连接、扩增和其他酶促反应。
警告!生物危害。生物样品,例如人体和其他动物的组织,体液,传染剂以及血液,有可能传播传染病。使用适当的安全设备(例如物理遏制设备)在设备齐全的设施中进行所有工作。安全设备还可以包括用于个人保护的物品,例如手套,外套,礼服,鞋套,靴子,呼吸器,面罩,安全眼镜或护目镜。在使用潜在的生物危害材料之前,应根据适用的监管和公司/机构要求对个人进行培训。遵循所有适用的地方,州/省和/或国家法规。在处理实验室环境中处理生物样品时,以下参考文献提供了一般指南。
该套件适合从新鲜或冷冻动物,细胞,血液,细菌和其他样品中提取总纯度。DNA片段的最大分子量为50 kb的DNA片段可以纯化,而无需使用诸如苯酚,氯仿和乙醇沉淀等有毒溶剂。优化的缓冲液系统用于有效地,特别是将热解溶液的DNA连接到基于二氧化硅的离心吸附柱。PCR抑制剂和其他酶促反应可以通过两步进行洗涤步骤有效地去除。最后,可以使用低盐卫生棉条或水洗脱获得高纯度DNA。纯化的DNA可以直接用于酶促消化,PCR,PCR实时,图书馆构造,Southern印迹,分子标记和其他下游实验。
在吸附柱中部加入50-200μLElution Buffer或无菌水,室温放置2-5分钟,12000rpm离心1分钟。收集 DNA 溶液并储存于 -20°C。注:1)若后续检测对pH或EDTA敏感,可用无菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响。若洗脱液为水,则pH应为7.0~8.5(可用NaOH调节水的pH至此范围),若pH低于7.0,洗脱效率不高。
在吸附柱中部加入50~200μLElution Buffer或无菌水,室温放置2~5分钟,12000rpm离心1分钟。收集 DNA 溶液并将 DNA 储存于 -20°C。注:1)若后续实验对pH或EDTA敏感,可用无菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响。若用水作为洗脱液,则pH应为7.0~8.5(可用NaOH调节水的pH值至此范围),pH值低于7.0洗脱效率不会高。 2) 将洗脱缓冲液放入65-70°C水浴中预热。离心前在室温下孵育 5 分钟以提高产量;用另外50-200 μL洗脱缓冲液或无菌水洗脱可能会增加产量。 3) 如果想提高DNA最终浓度,可以将所得溶液加入到吸附柱中,室温下放置2-5分钟,12000 rpm 离心1分钟;如果洗脱体积少于200 μL,可能会增加最终的DNA浓度,但可能会降低总产量。如果DNA量少于1μg,建议用50μL洗脱缓冲液或无菌水洗脱。 4) 由于保存在水中的DNA会受到酸性水解的影响,如果需要长期保存,建议用Elution Buffer洗脱后保存于-20℃。
该套件包含一个正对照模板,该模板将在FAM和CY5通道中放大。每次使用套件时,运行中必须至少包括一个阳性对照反应。一个阳性结果表明在该特定实验情况下检测靶基因的引物和探针正常工作。如果获得了负结果,则测试结果无效,必须重复。应注意确保阳性对照不会污染任何其他套件组件,从而导致假阳性结果。这可以通过在PCR后环境中处理该组件来实现。还应注意在将阳性对照添加到运行中时避免其他样品的交叉污染。可以通过密封所有其他样品和负面对照来避免这种情况,然后将阳性对照置于正面对照中。
Roboprep®96使DNA和RNA提取变得容易,与手动方法相比,动手时间大大减少。这使您可以优化日常工作,从而为其他有价值的实验室任务提供时间。您可以执行最多96个样本的自动提取。通过使用磁珠技术,结合加热块,样品裂解和洗脱的效率得到了提高。结果是高度纯化的核酸,不含抑制性成分,可以直接在实时PCR分析中使用。
注意6·通过添加能够破坏二硫键键的还原剂(例如ß-甲醇(ß -me)或二硫代硫醇(DTT))的减少剂,从而污染了污染的RNass。为了促进二硫键的还原,使用前,每1 mL缓冲液DRP加入10 µLß -ME。添加ß -ME后,DRP缓冲液保持稳定1个月。使用前,每1 ml缓冲液在使用前,在RNase无rNase无水中添加10 µl [1 m] DTT的毒性但更昂贵的替代品。dtt在缓冲区DRP中不稳定,因此不得存储DTT-供应的DRP缓冲液等分试样。[1 M] DTT储备溶液在RNase无水酶中的工作等分试样必须存储在-20°C下,以保持稳定性。设置[1 M] DTT储备溶液(MW = 154.25 g mol -1),溶解1.54 g DTT每10 ml RNase无rNase无水,并将其存储在等分试样中以进行一次使用。
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在实时循环仪中进行反应。检测在 FAM 通道中进行,每 15 秒获取一次数据。• 设计预测熔化温度约为 60°C 的引物。• 用水或 TE 缓冲液制备 10X 引物混合物,例如,用于 LAMP: