定期间隔间隔的短篇小学重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CAS9)系统是ARCHEA和细菌用于降解异物(4,6)的适应性免疫反应防御机制(4,6)。该机制可以用于其他功能,包括用于哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除(KO)(KO)(1,2,3,5)。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除(Gecko)V2库中得出的指导RNA(GRNA)序列来鉴定和裂解特定基因,该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除(Gecko)V2库(3,5)。
定期间隔间隔的短篇小学重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CAS9)系统是ARCHEA和细菌用于降解异物(4,6)的适应性免疫反应防御机制(4,6)。该机制可以用于其他功能,包括用于哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除(KO)(KO)(1,2,3,5)。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除(Gecko)V2库中得出的指导RNA(GRNA)序列来鉴定和裂解特定基因,该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除(Gecko)V2库(3,5)。
NucleOmag®质粒程序利用了修饰的碱性裂解方案,并结合了适当的缓冲条件下核酸对顺磁珠的可逆吸附。颗粒细菌被重悬于缓冲液A1中。质粒DNA通过裂解缓冲液A2从细胞中解放出来,然后使用缓冲液S3进行中和和沉淀。粗裂解物可以通过离心或使用NucleOmag®清除珠(用于裂解液清除的专门的顺磁珠)清除。用于将核酸与顺磁珠,结合缓冲液和核瘤®M珠结合的结合添加到清除的裂解物中。磁分离后,通过获得专利的排毒缓冲液ERB去除内毒素和蛋白质。用洗涤缓冲液和空气干燥除去盐或残留乙醇等进一步的污染物。纯质粒DNA用低盐洗脱缓冲液或水洗脱,并准备好用于任何常见的下游应用(包括转染)(仅研究)。核对®质粒试剂盒已设计用于自动磁杆系统。
双镍酶质粒被视为“许可产品”,应按照www.scbt.com/limitedlicense上规定的有限许可使用。购买此产品向买方购买了不可转让的使用权的产品,以及仅用于购买者在其实验室中进行的研究目的的所有重复和衍生品(无论买方是学术还是营利性实体)。买方不能出售或以其他方式转移(a)本产品(b)使用此产品或其组件制成的材料或(c)将其组件或其组件制成的材料或以其他方式使用本产品,其组件或使用此产品或其组件制造的材料或材料出于商业目的。
定期间隔间隔的短篇小学重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CAS9)系统是ARCHEA和细菌用于降解异物(4,6)的适应性免疫反应防御机制(4,6)。该机制可以用于其他功能,包括用于哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除(KO)(KO)(1,2,3,5)。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除(Gecko)V2库中得出的指导RNA(GRNA)序列来鉴定和裂解特定基因,该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除(Gecko)V2库(3,5)。
抗菌素耐药性 (AMR) 基因广泛传播于质粒上。因此,旨在阻断质粒吸收和转移的干预措施可能会抑制 AMR 的传播。先前的研究已使用基于 CRISPR-Cas 的技术从目标细菌中去除编码 AMR 基因的质粒,使用通常宿主范围较窄的噬菌体或质粒递送载体。为了使该技术可用于从复杂微生物群落的多个成员中去除 AMR 质粒,需要一种高效、宿主范围广的递送载体。我们设计了宿主范围广的 IncP1 质粒 pKJK5 来编码被编程为靶向 AMR 基因的 cas9。我们证明所得质粒 pKJK5::csg 能够阻断 AMR 质粒的吸收并去除大肠杆菌中的常驻质粒。此外,由于其广泛的宿主范围,pKJK5::csg 成功阻断了一系列环境、猪和人类相关大肠杆菌分离株以及两种假单胞菌分离株中的 AMR 质粒摄取。这项研究坚定地确立了 pKJK5::csg 是一种有前途的广泛宿主范围 CRISPR-Cas9 递送工具,用于去除 AMR 质粒,它有可能应用于复杂的微生物群落,以从广泛的细菌物种中去除 AMR 基因。
双切口酶质粒被视为“许可产品”,应根据 www.scbt.com/limitedlicense 上规定的有限许可使用。购买本产品即向买方转让不可转让的权利,买方有权将所购买的产品数量以及所有复制品和衍生物仅用于买方在其实验室进行的研究目的(无论买方是学术实体还是营利实体)。买方不得向第三方出售或以其他方式转让 (a) 本产品 (b) 其组件或 (c) 使用本产品或其组件制成的材料,或以其他方式将本产品或其组件或使用本产品或其组件制成的材料用于商业目的。
定期间隔间隔的短篇小学重复序列(CRISPR)和CRISPR相关蛋白(CAS9)系统是ARCHEA和细菌用于降解异物(4,6)的适应性免疫反应防御机制(4,6)。该机制可以用于其他功能,包括用于哺乳动物系统的基因组工程,例如基因敲除(KO)(KO)(1,2,3,5)。crispr/cas9 ko质粒产物通过利用从基因组尺度CRISPR敲除(Gecko)V2库中得出的指导RNA(GRNA)序列来鉴定和裂解特定基因,该序列在广泛研究所的张实验室中开发的基因组规模CRISPR敲除(Gecko)V2库(3,5)。
此过程描述了如何用各种限制性核酸内切酶消化纯化的质粒DNA。使用各种缓冲液和盐条件,将质粒DNA切成各种长度DNA片。然后,可以使用E-Gel功率SNAP电泳和SAP-23132 Chemidoc MP Imaging Imaging Systems使用E-Gel Power Snap Extrophoresis和SP-23132 Chemidoc Imaging Systems使用E-Gel Power Snap Systems和SEOP-23132 ChemIdoc Imaging Systems,并具有来自Bio-Rad的Image Lab touch软件。限制性核酸内切酶识别短的DNA序列,然后在识别序列内或附近的特定位点上裂解双链DNA。限制性核酸内切酶将DNA裂解为离散片段是分子生物学中最基本的过程之一。基本协议描述了如何为任何酶和缓冲液条件切割DNA。这些包括用一个以上的内切酶消化给定的DNA样品,并用相同的内切酶消化多个DNA样品。