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干细胞报告
精原干细胞 (SSC) 是生产转基因动物的资源。然而，对 SSC 的基因操作取得的成功有限。在这里，我们展示了通过慢病毒 (FV-LV) 使用融合蛋白 (F) 将基因有效转移到 SSC 中，融合蛋白是一种参与病毒体/细胞膜融合的仙台病毒 (SV) 包膜蛋白。FV-LV 比传统 LV 更有效地转导培养的 SSC。虽然感染 SV 的 SSC 无法产生后代，但用 FV-LV 转导的 SSC 具有生育能力。体内微注射表明 FV-LV 不仅可以穿透曲细精管的基底膜，还可以穿透血睾屏障，从而成功转导生精细胞和睾丸体细胞。用表达针对 Kit 或 Sycp3 的药物诱导型 CRISPR/Cas9 的 FV-LV 转染培养的 SSC 在移植和体内药物治疗后表现出精子发生受损。因此，FV-LV 为涉及 SSC 和精子发生的基因的功能分析提供了一种有效的方法。
CRISPR/Cas9 基因敲除及随后的野生型和突变型基因拯救的改进策略
将荧光标记 mOrange 插入到流行的 pLentiCrispr-V2 中，以创建包含嘌呤霉素选择和荧光标记的 pLentiCrispr-V2-mOrange (V2mO)，使病毒产生和靶标转导可见。用该质粒和适当的向导 RNA (gRNA) 包装的慢病毒成功敲除了人胃癌细胞系中的 RhoA、Gli1 和 Gal3 基因。Cas9-gRNA 编辑效率可以直接从 Cas9-gRNA 转导细胞中 gRNA 区域周围的短聚合酶链反应产物的 Sanger 电泳图来估计。必须对转导的靶细胞池进行单克隆以建立稳定的敲除克隆。仅当 gRNA 结合的 cDNA 被三个核苷酸修饰而氨基酸序列保持不变时，才能成功将野生型（RhoA 和 Gal3）和突变型（RhoA.Y42C）基因拯救到敲除细胞中。在 Gal3 基因中观察到严格的靶向 CRISPR/Cas9 编辑，但在 RhoA 基因中未观察到，因为 RhoA.Y42C 已经在 gRNA5 结合位点出现核苷酸变化。总之，我们改进的策略增加了这些优势：在流行的慢病毒系统中添加可视化标记、监测慢病毒的生产和转导效率、通过荧光激活细胞分选在靶细胞中分选 Cas9+ 细胞、通过 gRNA 结合位点周围的短 PCR 电泳图直接估计靶细胞池的基因编辑效率、以及在敲除细胞中成功拯救野生型和突变型基因，通过修饰 cDNA 克服 Cas9 编辑。
超低模式的设计压电量量子传感器
摘要：量子状态从微波炉到光学结构域的相干转导可以在量子网络和分布式量子计算中起关键作用。我们介绍了在硅平台上的混合锂锂锂中形成的压电机电设备的设计，该设备适用于微波至光学量子转导。我们的设计基于具有光力学晶体腔的超低模式压电腔的声学杂交。Niobate锂的强压电性质使我们能够通过声学模式介导转导，该声学模式仅与硝酸锂相互作用，并且主要是硅状的，并且具有非常低的电气和声学损失。我们估计，该传感器可以实现<0的固有转换效率高达35％。5添加噪声量子量当与超导式的transmon值偶联并以10 kHz的重复速率以脉冲模式运行时，添加了噪声量子。在这种混合锂硅硅酸盐透射剂中获得的性能改善使其适合通过光学纤维链路连接的超导量子处理器之间的量子纠缠。
在小鼠模型中静脉内给药后人脐带间充质干细胞（HUC-MSC）的动态跟踪
简介：在过去的几十年中，人类脐带衍生的间充质干细胞（HUC-MSC）由于其免疫调节特性引起了对细胞疗法的兴趣。尽管如此，体内HUC-MSC的命运仍然知之甚少。这项研究旨在研究健康BALB/C小鼠模型中系统给予的HUC-MSC的生物分布，归巢和清除。方法：用GFP-LUC2蛋白标记HUC-MSC，然后用流量细胞仪进行表征。在静脉注射转导的HUC-MSC中，通过生物发光成像（BLI）方法对细胞进行动态监测。结果：用GFP-LUC2转导HUC-MSC不仅保留了MSC的特征，而且还允许在小鼠模型中对转导细胞进行实时监测。在全身给药后，BLI表明，在健康的BALB/C小鼠的肺中主要局部局部转导HUC-MSC，并且主要在肺中保留长达3天，然后最终从体内清除。在末端牺牲处，血浆化学生物标志物保持不变，除了C肽水平，在HUC-MSC组中显着降低了。组织病理学发现进一步表明，HUC-MSCS输注不会引起对肺，肝脏和心脏组织的任何不良反应和毒性。结论：总体，系统地管理的HUC-MSC是安全的，并且在最终从身体中消失之前被证明了动态的归巢能力。©2024，日本再生医学学会。Elsevier B.V.这是CC下的开放访问文章（http://creativecommons.org/licenses/4.0/）。
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遗传交换DNA作为遗传物质的机制：转化的Griffith实验，Avery，MacLeod和McCarty实验，Hershey和Chase实验，以证明DNA带有遗传信息。fraenkel-conrat实验证明RNA是遗传物质。原核生物中染色体的结构和组织。质粒类型，原核生物中的转座子。细菌转化：原核生物中发现的原理和类型。细菌共轭：U管实验，F质粒的特性，F + X F-结合，F X F-结合，HFR X F-连接，转导：广义和专业转导
静脉注射AAV基因治疗用于治疗SOD1-ALS的静脉输送可提供NHP
在cynomolgus monkeys中静脉内给药Vy9323导致颈脊髓和腰椎脊髓中的大量载体基因组递送（A，B），并在颈椎和腰椎脊髓腹侧角组织（C，D）和Laser捕获的电动机（C，D）和Laser Captured captured的SOD1 mRNA减少。vy9323可大大降低颈脊髓中的SOD1 mRNA。黑色箭头代表表达许多SOD1 mRNA副本的细胞，红色箭头指示表达更少副本的细胞。在输送标记有效载荷和VY9323 CAPSID后，自动检测运动神经元转导，确定了85-94％的神经元在宫颈，胸腔和腰椎转导85-94％。
AAV 载体中新型组合 microRNA 结合位点协同减少抗原呈递和转基因免疫，实现高效、稳定的转导
重组腺相关病毒 (rAAV) 平台有望用于体内基因治疗，但抗原呈递细胞 (APC) 的不良转导会削弱其应用前景，而抗原呈递细胞又会引发宿主对 rAAV 表达的转基因产物的免疫。鉴于最近接受高剂量全身 AAV 载体治疗的患者出现的不良事件，推测这些不良事件与宿主的免疫反应有关，开发抑制先天性和适应性免疫的策略势在必行。使用 miRNA 结合位点 (miR-BS) 来赋予内源性 miRNA 介导的调控，使转基因表达脱离 APC，有望降低转基因免疫力。研究表明，将 miR-142BSs 设计到 rAAV1 载体中能够抑制树突状细胞 (DC) 中的共刺激信号、减弱细胞毒性 T 细胞反应并减弱小鼠转导肌细胞的清除，从而允许在肌纤维中持续转基因表达，同时几乎不产生抗转基因 IgG。在本研究中，我们针对 26 种在 APC 中大量表达但在骨骼肌中不表达的 miRNA 筛选了单个和组合 miR-BS 设计。高免疫原性卵清蛋白 (OVA) 转基因被用作外来抗原的替代物。在成肌细胞、小鼠 DC 和巨噬细胞中进行的体外筛选表明，miR-142BS 和 miR-652-5pBS 的组合强烈抑制了 APC 中的转基因表达，但保持了成肌细胞和肌细胞的高表达。重要的是，携带这种新型 miR-142/652-5pBS 盒的 rAAV1 载体在小鼠肌肉注射后比以前的去靶向设计实现了更高的转基因水平。该盒强烈抑制细胞毒性 CTL 激活和