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CRISPR-dCas9 调控基因转录的研究进展
CRISPR/CAS9系统不仅是基因编辑的革命性工具，而且还调节各种原核和真核生物的基因转录。在近年来，源自CRISPR/CAS9的CRISPR-DCAS9系统已用于基因成像，高通量筛选，基因调节，研究基本基因功能和表观遗传调节等许多领域。在这篇综述中，描述了CRISPR-DCAS9在激活或抑制基因转录，降低靶向效率以及梳理SGRNA与转录调节之间的内在关系，在生命科学中的应用以及进一步升级的固有关系的最新进展。
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基因表达的转录和转录法规
抽象转录和转录后调节是控制基因表达的一个基本过程，可以使细胞在维持稳态的同时适应环境变化。这种调节的破坏会导致各种遗传疾病，包括癌症和神经退行性疾病。本文的目的是检查转录和转录后调节的机制，及其对分子生物学和生物医学的影响。本文通过收集PubMed，ScienceDirect和NCBI数据库的数据使用文献综述方法。分析，以识别关键因素，例如启动子，增强子，消音器，RNA聚合酶II以及转录阶段，包括启动，伸长和终止，以限定，限制，尾声，裁缝和拼接。审查表明，转录调节始于涉及转录因子和RNA聚合酶II的预启用复合物的形成。在伸长过程中，RNA合成以高度的加工性进行。在转录后阶段，修饰，例如在5'末端添加7-甲基鸟苷，而在3'末端的聚腺苷酸化则增加了mRNA的稳定性。此外，剪接机制允许从单个基因形成不同蛋白质。该调节可确保基因表达在细胞要求的适当时间，位置和数量上发生。在转录后阶段，修饰，例如在5'末端添加7-甲基鸟苷和3'末端的聚腺苷酸化增加了mRNA的稳定性。剪接机制允许从单个基因形成不同蛋白质。该调节可确保根据细胞的需求在适当的时间，位置和数量上发生基因表达。抽象转录和转录后调节是控制基因表达的基本过程，可以使细胞在维持稳态的同时适应环境变化。该调节的疾病会引发各种遗传疾病，包括癌症和神经退行性疾病。撰写本文旨在检查转录和转录后调节的机制，及其对分子和生物医学生物学的影响。Div>使用文献审查方法编写文章，通过收集PubMed，ScienceDirect和NCBI数据库的数据。进行分析以识别主要要素，例如启动子，增强子，消音器，RNA聚合酶II以及转录阶段，包括启动，伸长和终止，以及转录后的转录机制，例如封盖，裁缝和固定。审查结果表明，转录调控始于涉及转录因子和RNA聚合酶II的预启示复合物的形成。在伸长过程中，RNA合成以高水平的处理。在转录后阶段，诸如5'结束时添加7-甲基鸟苷的修改以及3'结束时的多额质量增加了mRNA稳定性。剪接机制还允许从一个基因形成不同的蛋白质。该调节可确保根据细胞需求及时，位置和数量进行基因表达。
转录援助T7高产量转录套件
描述Thermo Scientific™Transcriptaid™T7高收益转录套件设计用于来自含有T7 RNA聚合酶启动子的DNA模板的高产量在体外转录。该套件含有50 µL反应的试剂。取决于转录长度，每个反应在2小时内从1 µg模板中产生约150 µg RNA（图1），比常规体外转录反应中可实现的10倍。可以扩大反应以产生毫克量的全长RNA。该套件提供了用于转录反应，转录物加载和分析凝胶的所有组件。转录辅助酶混合物含有T7 RNA聚合酶，可方便地用重组Thermo Scientific™Ribolock™RNase抑制剂进行预混合，以确保RNA转录的完整性。dnase I，无RNase，用于有效去除转录反应后模板DNA。包括2x RNA载荷染料溶液为了方便RNA载荷。Thermo Scientific™Riboruler™RNA梯子，高范围，即用凝胶上的RNA尺寸和定量量化的辅助工具。ntps在单个管中提供，以合成非放射性标记的探针或限制的RNA的灵活性。
对转录因子剂量逐渐调制的非线性转录响应
与常见特征和疾病相关的基因组基因座通常是非编码的，并且可能影响基因表达，有时与目标基因中罕见的功能丧失变体相吻合。但是，我们对基因剂量逐渐变化如何影响分子，细胞和生物性状的理解是有限的。为了解决这一差距，我们使用CRISPR激活和失活引起了四个基因的基因表达的逐渐变化。使用靶向的单细胞多模式测序检查了三个与血细胞性状（GFI1B，NFE2和MYB）相关的三个主反式调节剂（GFI1B，NFE2和MYB）剂量调节的下游转录后果。我们表明，在TSS周围铺平的指导是调节各种倍数变化范围内CIS基因表达的最有效方法，其染色质可及性和组蛋白标记的进一步影响在抑制和激活系统之间有所不同。我们的单细胞数据使我们能够精确地检测到数十个反式基因的细微基因表达变化，这表明这三个TF的剂量变化的许多反应是非线性的，包括非单调的行为，即使在限制了主调节器对副本数量或损失的折叠时，也是非单调的。我们发现剂量特性与基因约束有关，其中一些非线性反应富含疾病和GWAS基因。总体而言，我们的研究提供了一种直接且可扩展的方法，可以精确调节基因表达并在高分辨率下对其下游后果进行见解。
RNA 转录和修饰
启动子因它“促进”基因表达而得名。该碱基序列控制转录起始的准确位置。大部分启动子位于基因转录实际开始位点的正前方或上游。按照惯例，启动子序列中的碱基是相对于转录起始位点进行编号的。此位点是用作转录模板的第一个碱基，记为 +1。此位点之前的碱基按负方向编号。没有碱基被编号为零。因此，大部分启动子都用负数标记，以描述转录开始前的碱基数。启动子序列内有两个重要序列，位于大约 −35 和 −10 位点。−35 位点顶部 DNA 链中的序列为 5′–TTGACA–3′，−10 位点的序列为 5′–TATAAT–3′。 TATAAT 序列以 1975 年首次发现该序列的 David Pribnow 的名字命名为 Pribnow 盒。
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Q3 2025 Karooooo的财务业绩。 Karooooo Ltd (NASDAQ: KARO ) Q3 2025 Earnings Conference Call January 15, 2025 8:00 AM ET Company Participants Zak Calisto – Founder & Group CEO Paul Bieber – VP: Investor Relations and Strategic Finance Carmen Calisto – Group Chief Strategy and Marketing Officer Goy Hoeshin – Group Chief Financial Officer Conference Call Participants Paul Bieber Hello and welcome to Karooooo's Financial Year 2025年第三季度收入电话。 代表Karooooo，我们要感谢您今天加入我们。 我是Karoooo的投资者关系和战略金融副总裁Paul Bieber。 我们今天由创始人兼首席执行官扎克·卡利斯托（Zak Calisto）加入，首席财务官Hoeshin Goy兼首席战略和营销官Carmen Calisto。 在将电话交给卡门之前，我想提醒所有人，我们今天就业务，运营和财务绩效所做的一些陈述可能被认为是前瞻性的。 此类陈述基于当前的期望和假设。 它们受到许多风险和不确定性的约束。 实际结果可能有重大不同。 请参考我们的20-F表格中的安全港声明，包括风险因素以及我们昨天提交的6K。 我们没有义务更新任何前瞻性陈述。 在此通话中，我们将提出IFRS和非IFRS财务指标。 我们昨天向SEC提交的6K中包括了非IFR与IFRS措施的对帐。 这样，我想将电话交给卡门。Q3 2025 Karooooo的财务业绩。Karooooo Ltd (NASDAQ: KARO ) Q3 2025 Earnings Conference Call January 15, 2025 8:00 AM ET Company Participants Zak Calisto – Founder & Group CEO Paul Bieber – VP: Investor Relations and Strategic Finance Carmen Calisto – Group Chief Strategy and Marketing Officer Goy Hoeshin – Group Chief Financial Officer Conference Call Participants Paul Bieber Hello and welcome to Karooooo's Financial Year 2025年第三季度收入电话。代表Karooooo，我们要感谢您今天加入我们。我是Karoooo的投资者关系和战略金融副总裁Paul Bieber。我们今天由创始人兼首席执行官扎克·卡利斯托（Zak Calisto）加入，首席财务官Hoeshin Goy兼首席战略和营销官Carmen Calisto。在将电话交给卡门之前，我想提醒所有人，我们今天就业务，运营和财务绩效所做的一些陈述可能被认为是前瞻性的。此类陈述基于当前的期望和假设。它们受到许多风险和不确定性的约束。实际结果可能有重大不同。请参考我们的20-F表格中的安全港声明，包括风险因素以及我们昨天提交的6K。我们没有义务更新任何前瞻性陈述。在此通话中，我们将提出IFRS和非IFRS财务指标。我们昨天向SEC提交的6K中包括了非IFR与IFRS措施的对帐。这样，我想将电话交给卡门。卡门·卡利斯托（Carmen Calisto）领先的物理运营管理平台，重点是非洲，亚洲和欧洲，在今天的电话中，我们将审查Karooooo的运营单位：Cartrack和Karoooooo Logistics。对于那些新的Karooooo的人来说，Cartrack是我们的运营管理SaaS平台。墨盒大规模运行，并具有非常吸引人的财务状况。Cartrack的运营势头主要驱动了Karooooo的增长和强劲的财务业绩。迄今为止2025财年，墨盒订阅收入约为ZAR 30亿，同比增长15％或以美元计算同比增长20％。墨盒的一年营业利润率为30％。
秀丽隐杆线虫的转录适应
摘要 转录适应是最近描述的一种现象，其中一个基因的突变会导致相关基因（称为适应基因）的转录调节。在分子水平上，有人提出，突变的 mRNA（而不是蛋白质功能的丧失）激活了这种反应。虽然已经在斑马鱼胚胎和小鼠细胞系中报道了几例转录适应的例子，但尚不清楚这种现象是否在后生动物中都观察到。我们在此报告了秀丽隐杆线虫的转录适应，并发现该过程需要与突变 mRNA 衰变有关的因子，就像在斑马鱼和小鼠中一样。我们进一步发现了对 Argonaute 蛋白和 Dicer 的需求，这些因子与小 RNA 成熟和转运到细胞核中有关。总之，这些结果为秀丽隐杆线虫的转录适应提供了证据，这是一种进一步研究潜在分子机制的有力模型。