另一方面,在 IOT 中,RF 输入信号施加在阴极和栅极之间,栅极位于阴极附近且在阴极前方(见图1)。因此,电子束在枪区域本身内进行密度调制。向栅极施加相对于阴极电位约负 80 伏的直流偏置电压 (V G ),以便在没有 RF 驱动的情况下,约 500 mA 的静态电流流动。阴极保持在约 -30 kV 的负束电位,因此密度调制的束流通过接地阳极中的孔径加速到输出部分。在这里,功率通过传统的速调管输出系统提取,但使用双调谐腔系统来提供欧洲和世界许多其他地区超高频电视传输所需的 8 MHz 信道带宽。最后,电子束在传统设计的铜收集器中消散 - 根据所涉及的功率水平,可以是空气冷却的,也可以是液体冷却的。
1。根据表4获取裂解样品。2。彻底混合裂解溶液。3。在每个1.5 mL微输出管或包含样品的板的孔中添加一卷裂解溶液。基于样本类型和样品数量的体积,请参见表4。4。移液管上下以混合裂解溶液和每个管子中的样品。5。盖管或用粘合剂盖密封板,然后短暂离心管或板。
1。将多达200毫克的凳子样品添加到珠管中,然后将管子放在冰上。-Note:如果样品干燥,则将样本量降低至≤50mg。 - 注意:如果样品是液体,则将200 µL样品添加到珠管中。2。将300 µL的SDE1缓冲液和20 µL蛋白酶K加入样品。以最大速度涡旋5分钟。在孵育过程中将样品混合物在60°C下孵育20分钟,每5分钟涡流一次。- 确保粪便样品完全匀浆。- 为了从革兰氏阳性细菌中分离DNA,需要在蛋白酶K裂解后在95°C下额外孵育5分钟。3。简要旋转管以去除盖子内部的滴。4。冷却样品混合物,并加入100 µL SDE2缓冲液。通过涡旋充分混合并在冰上孵育样品混合物5分钟。5。全速离心5分钟。6。小心地将上清液转移到1.5 mL微输出管(未提供)并丢弃凳子颗粒。- 避免移除任何碎屑和颗粒。7。加入200 µL的SDE3缓冲液。通过涡旋充分混合并在室温下孵育样品混合物2分钟。- 注:SDE3缓冲液必须在每次使用前都会急剧涡旋。- 切断1 ml尖端的末端,以使移动SDE3缓冲区更容易。8。全速离心2分钟。9。小心地将250 µL上清液转移到1.5 mL微输出管(未提供)。- 避免移除任何碎屑和颗粒。
酵母菌作物在搅拌(120 rpm)中生长16小时,或直到28°C的超过1亿个细胞/ml,在5 ml YPED中(1%酵母提取物,2%肽,葡萄糖2%)。 div>通过离心(eppendorf微离心)在微输出管中收集到8000 rpm的细胞,持续5分钟。 div>随后,这些细胞以0.5 ml的山梨糖醇1M溶液(EDTA 0.1M,(pH 5)重新悬浮),其中包含50个单位(U)的β-葡萄糖醛酸酶酶(Sigma-Aldrich)。 div>将带有酶的悬浮液在37ºC的水浴中孵育60分钟,定期搅拌(有时通过将细胞放入蒸馏水中并验证到光学显微镜以减小细胞密度来监督细胞壁的丢失)。 div>
将1.5 mL样品转移到1.5 mL微输出管中,并以13,000 rpm离心3分钟。丢弃上清液。如果单元格的量不够,请重复步骤1。加入300 µL缓冲液CL(未提供),并通过涡旋充分混合。在90°C下孵育15分钟。短暂旋转以去除盖子内部的任何滴剂。在室温下孵育2分钟。加入20 µL蛋白酶K溶液,并简要涡旋混合。在60°C下孵育10分钟,然后短暂旋转以去除盖子内部的任何滴剂。将20 µL蛋白酶K溶液分配到1 st(7th)。将10 µL的RNase A至3 rd(9 th)处分。将多达200 µL的液体样品转移到1 st(7 th)。
1。使用砂浆和杵用液氮将粉末磨粉样品磨成细粉。有关样本中断的详细信息,请参阅第5页。2。将多达25毫克的组织粉转移到新的1.5 ml微量离心管中。注意:对于具有较高细胞数量(例如肝脏或脾脏)的组织样品,将样品输入降低至10 mg。 3。加入200 µL GL1缓冲液和20 µL蛋白酶K溶液。涡流混合。4。将样品在60°C孵育3小时/过夜。偶尔将管子倒转。5。在14,000 x g处离心2分钟,到颗粒不溶性碎片。6。将上清液转移到新的1.5 mL微输出管中。7。加入200 µL GL2缓冲液。涡流混合。8。添加4 µL RNase A溶液。涡旋在室温下混合并孵育5分钟。
1。在微输出式的5,000 x g处离心1分钟,以颗粒样品。将上清液(〜180 µL)转移到新的微输出管中。保存上清液和颗粒。2。将100 µL PBS(用户提供)添加到样品颗粒和移液器混合物中,直到明显重悬于颗粒为止。3。在5,000 x g处离心1分钟以颗粒样品。将上清液与前一步的原始样品上清液(总计约280 µL)结合在一起。4。将1 ml PBS(用户提供)在新的颗粒中添加,然后混合直至显然重悬于颗粒。5。在微输出式的5,000 x g处离心1分钟,以颗粒样品并丢弃上清液。6。将100 µL TE缓冲液和25 µL溶菌酶4(100 mg/ml;提供的用户)加入颗粒。7。移液管混合物直到明显重悬于沉淀物,然后在55°C下孵育30分钟。8。将保存的上清液(〜280 µL)与125 µL消化样品结合在一起。9。加入20 µL 10%SD(提供的用户)和10 µL蛋白酶K。简短的移液器混合并在55°C下孵育10分钟。10。在微输出式中离心1分钟,以颗粒残留碎片。转移