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FUS在线粒体DNA修复和靶向连接酶-1表达中揭示了FUS连接运动神经元疾病的修复缺失
这项研究确定了融合在线粒体DNA（mtDNA）修复中融合中的生理作用，并突出了其与FUS相关神经退行性疾病的发病机理（如杏仁型侧面硬化症（ALS））的影响。内源性FUS与MTDNA连接酶IIIα（MTLIG3）相互作用并募集到线粒体内的DNA损伤位点，这对于维持健康细胞中MTDNA修复和完整性至关重要。使用ALS患者衍生的FUS突变细胞系，转基因小鼠模型和人尸检样品，我们发现FUS功能损害阻碍了MTLIG3的维修作用，从而导致mtDNA损伤和突变增加。这些改变会导致线粒体功能障碍的各种表现，特别是在与疾病病理学有关的压力状况下。重要的是，在患者衍生的诱导多能细胞（IPSC）中纠正FUS突变可保留mtDNA完整性。类似地，引入人DNA连接酶1的焦油恢复了FUS突变细胞中的修复机制和线粒体活性，这表明潜在的治疗方法。我们发现FUS在线粒体健康和mtDNA修复中的关键作用，为线粒体功能障碍在FUS相关运动神经元疾病中的线粒体功能障碍提供了宝贵的见解。
DNA连接酶4抑制使前列腺癌敏感到体内免疫检查点阻滞
抽象背景/目标：前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤。DNA连接酶IV（LIG4）表达与前列腺癌患者的预后不良相关。Lig4连接DNA双链断裂，是这些遗传病变的必不可少的或修复。前列腺癌尚未表现出对抗PD − 1免疫疗法的临床显着反应。前列腺癌表达较低的PD − L1水平，并表现出有限的细胞毒性T淋巴细胞浸润。为了确定lig4对前列腺肿瘤发生的抑制作用，我们创建了一种在体内模型中进行的新基因设计。材料和方法：LIG4+/+; TAG和LIG4 +/-; TAG前列腺和肿瘤进行了组织病理学。用抗PD1抗体或免疫前IgG治疗前列腺肿瘤的单独组。Lig4和Pd -L1表达。通过免疫组织化学和免疫荧光显微镜确定DNA损伤修复蛋白，细胞衰老和细胞死亡标记的表达。通过SCA1/CD49 F流式细胞仪和肿瘤培养物分析了前列腺癌干细胞F疗法。pd- L1蛋白表达通过蛋白质印迹确定。结果：LIG4抑制作用诱导前列腺和癌症中的DNA双链断裂和细胞衰老，并显着降低了前列腺内上皮内肿瘤和肿瘤发生。Lig4抑制作用降低了干细胞培养物中的前列腺癌干细胞F racte and Proli fration。前列腺癌对Lig4抑制作用抗性抗肿瘤免疫反应，这是由于PD − L1表达增加而导致的。PD − 1抗体治疗。结论：抑制Lig4敏化前列腺癌对免疫检查点抑制。关键字：DNA损伤，衰老，编程的死亡受体1，凋亡，癌症干细胞。
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已测试至少20 nt。探针可以用3´或5´生物素/Desthiobiotin亲和力组设计，用于链霉亲和素富集（NEB＃S1421）。为了获得最佳结果，受保护的DNA：RNA杂交区应为4或5个核苷酸
T4 DNA连接酶（M0202）CHN
用户为绑定和洗涤步骤提供所需的翠鸟柔性塑料，其中包括96个深层井板（2.0毫升），以及用于洗脱步骤的96个微板（200μl）。还需要一个深孔梳子梳子，并用作磁杆的盖子，A
使用 T4 DNA 连接酶 (M0202) 进行连接
3. 对于粘性末端，在 16°C 下孵育过夜或室温下孵育 10 分钟。 4. 对于平末端或单碱基突出端，在 16°C 下孵育过夜或室温下孵育 2 小时（或者，高温孵育）
重组嗜热菌 DNA 连接酶 (lig)，部分
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使用 T4 DNA 连接酶 (M0202) 进行连接
3. 对于粘性末端，在 16°C 下孵育过夜或室温下孵育 10 分钟。 4. 对于平末端或单碱基突出端，在 16°C 下孵育过夜或室温下孵育 2 小时（或者，高温孵育）
重组 DNA 连接酶 (lig)，部分
序列 MKYSELAGLY RRLEKTTLKT LKTRFVADFL KNVPDELLEI VPYLILGKVF PDWDERELGV GEKLLIKAVS IATGVPEGEI ENSIKDTGDL GESIALAVKK KKQKSFFSQP LTIKRVYDTF VKVAESQGEG SQDRKMKYLA NLFMDAQPEE AKYIARTVLG TMRTGVAEGI LRDAIAEAFK VKAELVERAY MLTSDFGYVT KVAKLEGNEG LSKVRIQVGK PVRPMLAQNA ASVKDALLEM GGEAAFEIKY DGARVQVHKD GDRVVIYSRR LENVTRSIPE IVEAVRSQLR PEKAIVEGEL VAVGDGGKPR PFQYVLRRFR RKYNIEEMIE RIPLELNLFD VLYVDGESLV DTPFMERRKR LEEAVEESER IKLAQQLVTK KAEEAEEFYR RALELGHEGL MAKRLDSVYE PGNRGKKWLK IKPTMEDLDL VIIGAEWGEG RRAHLLGSFL VAAYDQHRGE FVPVGKVGSG FTDEDLAEFT KMLKPLIVRE EGKYVEIEPR VVIQVTYQEI QKSPKYESGF ALRFPRYVAL REDKSPEEAD TIERISELYG LQERFKAKR