这项描述性分析横断面研究于2022年在萨拉万(Saravan)和伊朗萨拉万(Saravan)的血液输血组织进行。通过功率分析确定了368名参与者的样本量,以检测ABO血型和RH系统之间牙周疾病患病率的统计学上显着差异。假设中等效应大小(Cohen的W = 0.3),α水平为0.05,功率为80%,所需的样本量的计算约为320。为了说明潜在的数据丢失并确保足够的亚组表示,特别是对于RH阴性组,最终样本量增加到368名参与者。此调整确保了足够的能力来比较牙周疾病患病率
摘要:适体是短的,单链的DNA或RNA(ssDNA或SSRNA)生物分子,可以选择性地与特定受体相连,包括蛋白质,肽,碳水化合物,小分子,危险化学物质和活细胞。在过去的十年中,适体开始从基本研究转向各种工业应用。诊断的创建比临床应用的开发更为普遍,因为改善适体的体内稳定性和药代动力学进行诊断测试不需要重大修改。基于越来越多的注意力,由于体外选择技术的进步,通过指数富集(SELEX)的系统进化,生成适体的助学剂的功效已改善。许多疾病,包括分枝杆菌结核病,treponema pallidum,新颖的冠状病毒,艾滋病毒,粘液等,对人们的福祉揭示了很大的威胁,并在社会上赋予了重要的社会经济能力。因此,对病原体的初始和精确诊断对于及时和成功的治疗至关重要。由于缺乏可靠的探针来识别感染的生物学标志物,在分子和纳米级处检测到人类感染性疾病一直非常困惑。通过指数富集对配体的选择性生长,一组具有高特异性和敏感性称为适体的塑性寡核苷酸,在体外测试(SELEX)。越来越多的药物适体目前是临床前研究或临床试验的主题。随着基于SELEX的Aptamer筛选技术的持续发展,适体应用程序的范围已大大扩展。本文回顾了生物医学中核酸适体的演变,特别强调了它们如何用于诊断传染病。本文讨论了用于治疗包括冠状病毒在内的各种疾病的治疗适体的创建和评估。但是,适体技术的重大状态受到了几种技术限制,这些技术限制阻碍了创新的适体通过诊所的通行,并使适体业务变得更加困难。本综述主要集中在克服障碍的方法上,阻碍了适体在诊断和治疗方面的广泛部署,以及可能会大大扩展适体使用范围并为几位研究人员提供未来方向的策略。
(a):本土医疗技术的主要特点和潜在应用:(i) 用于前列腺癌检测的脱氧核糖核酸 (DNA) 适体:适体是可以与特定靶标(例如蛋白质、碳水化合物甚至活细胞)以高亲和力结合的小分子。适体在癌症中的作用:在癌细胞中,某些特定于癌症类型的蛋白质的含量与正常细胞相比异常高。这些蛋白质可用于识别癌细胞的存在、它们在体内的定位以及癌症治疗。由于适体可以与特定靶标(例如蛋白质、碳水化合物甚至活细胞)以高亲和力结合,因此它们可用于靶向癌细胞表面的这种特定蛋白质。IITD 的贡献:印度理工学院德里分校的研究人员已经制造出 DNA 适体来靶向前列腺癌细胞表面的蛋白质。由于其尺寸小(2 纳米)、对特定配体/结合剂的高亲和力和稳定性,它可以作为生物传感器的出色传感元件。潜在应用:除了检测之外,印度理工学院德里分校制造的 DNA 适体还可以用于治疗前列腺癌细胞。为此,制造的适体已与用于治疗前列腺癌的药物结合。由于尺寸小(约为抗体的五分之一),适体作为光子生物传感器设备的传感层具有额外的优势;并且可以作为药物输送剂。
细胞负担会影响工程合成系统的性能。出于这个原因,人们对开发跟踪负担和改善生物技术应用的工具有很大的兴趣。荧光RNA适体是实时监测负担的极好候选者,因为他们的产量有望在转录资源上施加可忽略的负载。在这里,我们表征了从大肠杆菌中不同启动子表达的适体库的性能。我们发现适体相对性能取决于启动子和菌株,与期望相反,适体的表达会影响宿主的适应性。通过选择具有更明亮的输出且影响较低的两个适体,我们设计了一个细胞内生物传感器,能够报告工程细胞中负担响应的激活。此处开发的传感器增加了可用于减轻负担的工具的收集,并可能支持寻求改善主机性能的生物处理应用程序。
在用于药物输送的各种靶向配体中,适体在近年来引起了很大的兴趣,因为与抗体相比,它们的尺寸较小,易于修饰和更好的批次到批量的一致性。另外,可以选择适体靶向已知甚至未知的细胞表面生物标志物。用于药物负荷,脂质体是最成功的载体,许多经FDA批准的配方基于脂质体。在本文中,审查了用于靶向药物输送的适体功能化脂质体。我们从相关的适体选择的描述开始,然后是将适体与脂质体和体内这种结合物的命运相结合的方法。然后审查了一些申请的示例。除了静脉注射全身传递并希望在目标部位积累,对于某些应用,还可以使适体/脂质体共轭物直接在目标组织(如肿瘤内注射)(例如通过粘附到角膜上)在眼表面上掉落。虽然先前的评论集中在癌症治疗上,但当前的评论主要涵盖了过去四年中的其他应用。最后,本文讨论了适体定位和一些未来研究机会的潜在问题。
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体内和体外的定量转录调控研究通常使用报告基因蛋白。在这里我们表明,使用西兰花适体,可以在各种调节方案中对转录的定量研究,而无需翻译步骤。为了探索我们研究了使用基于热力学占用模型的几种调节方案,并与以前的研究发现了极好的一致性。在下一步中,我们表明非编码DNA可以对转录水平产生巨大影响,类似于与操作员站点具有很强亲和力的LAC阻遏物的影响。最后,我们指出了该方法的局限性,该延迟时间与适体折叠的关系。我们得出结论,西兰花适体适合定量转录测量。
1 荷兰乌得勒支大学医学中心 CDL 研究,乌得勒支大学,乌得勒支。2 荷兰乌得勒支大学乌得勒支药学研究所药剂学系。3 瑞典斯德哥尔摩卡罗琳斯卡医学院生物分子与细胞医学部实验室医学系。4 瑞典斯德哥尔摩卡罗琳斯卡大学医院胡丁厄细胞疗法和同种异体干细胞移植系 (CAST) 5 瑞典胡丁厄卡罗琳斯卡 ATMP 中心,ANA Futura 6 牛津大学儿科系,牛津,英国。7 英国牛津发育与再生医学研究所 (IDRM)。8 荷兰乌得勒支大学医学中心威廉敏娜儿童医院儿科呼吸医学系。 9 乌得勒支再生医学,乌得勒支大学医学中心,乌得勒支,荷兰。 * 通讯作者:ogdejong@uu.nl
图 4 . (A) 对表达逆转录子 Eco2 (67 nt) 或 4LE-v1 至 v4 (126 nt) 的细胞中提取的 RT-DNA 进行变性 PAGE 分析。基因组编码的逆转录子 Eco1 (90 nt) 作为内部控制。标记物 M1 是 4LE- v4 的化学合成 DNA 版本。(B) 通过长度标准化荧光带强度分析确定逆转录子 Eco2 (67 nt) 和 4LE 变体相对应的 RT-DNA 相对于内源性 Eco1 的富集倍数。所示数据来自 n = 3 个技术重复。(C) 用 DFHBI-1T 进行大量体内荧光测量。配对 t 检验,诱导与未诱导:Eco2,p = 0.86;4LE-v1,p = 0.27;4LE-v2,p = 0.003;4LE-v3,p = 0.007; 4LE-v4,p = 0.005;n = 3 个生物学重复。(D)表达 4Lettuce 位置变体的 DFHBI-1T 染色细胞的流式细胞术分析。153
化学和解决方案。氯化镁(MGCL 2),碳酸氢铵(NH 4 HCO 3),L-甘氨酸,Trizma®碱基,Tween-20,乙醇胺(EA),N-(3-二甲基氨基氨基丙基)-N'-乙基甲基二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二二酰基(EDC) bovine serum albumin (BSA), sodium hydroxide, sodium chloride, 4-morpholineethanesulfonic acid monohydrate (MES), hydrochloric acid, formic acid (FA), streptavidin-alkaline phosphatase from Streptomyces avidinii conjugate (Strep-ALP) and lysozyme from chicken egg white were purchased from Merck (意大利米兰)。磷酸钾(KH 2 PO 4),二氯磷酸二硫酸氢钾(K 2 HPO 4),磷酸钠二迪巴斯二硫酸二硫代十二碳水化酸盐(Na 2 HPO 4·12H 2 O),氯化钾和无rnase含水量和无RNase水的含量是从Carlo Erba(Cornaredo Erba(Cornaredo)(Cornaredo)(Cornaredo)(Cornaredo)(Cornaredo),Milan,Milan,Milan,Milan,Milan,Italan,Italan,Italy。氢喹酮双磷酸(HQDP)由Metrohm Italiana(Origgio,意大利Varese)提供。通过Milli-Q Element A10系统(Millipore,旧金山,加利福尼亚州,美国)获得了去离子水,并用于缓冲溶液制备。缓冲溶液的组成如下。无RNase缓冲液用于所有RNA适体的实验中。单链DNA序列购自Biomers.net(德国ULM),而C80RNA序列是从代替(Carlo Erba,Carlo Erba,Milan,意大利)。所有的寡核酸均处于干燥状态,适当地等分以避免反复的冻结/解冻周期。在Milli-Q水中以DNA寡核素进行了冻干等分试样的重悬,而C80RNA的无RNase水中的水则达到了供应商建议的100μM终浓度。库存溶液存储在-20°C。MES缓冲液:25毫米ME(pH 5.0); Tris缓冲液:0.1 MTrizma®基础,5 mm MGCL 2(pH 7.4); TRIS-T缓冲液:0.1 MTrizma®基础,5 mm MGCL 2,0.05%w/vtween®20(pH 7.4); TRIS盐水缓冲液:20 mMTrizma®基础,5 mM MGCL 2,0.1 M NaCl(pH 7.4);含镁离子(PBS-MG 2+)的磷酸盐缓冲盐盐水:1.5 mm kH 2 PO 4,8 mm Na 2 HPO 4,137 mm NaCl,2.7 mm KCl,1 mm MGCL 2(pH 7.4);从Thermo Fisher Scientific(美国马萨诸塞州沃尔瑟姆)购买磷酸盐缓冲盐水(PBS)作为干燥粉末,其溶解后具有以下成分:0.1 m Na 2 HPO 4,0.15 m NaCl(pH 7.2); Tris甘氨酸钾(TGK)缓冲液:25 mMTrizma®基础,192 mm L-甘氨酸,5 mm K 2 HPO 4(pH 8.3)。