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人类 iPS 细胞衍生的肠上皮细胞中的转运蛋白和代谢...
[背景与目的] 小肠是负责口服食物和药物的吸收和代谢的消化器官。近年来，有报道称利用由人类iPS细胞分化而来的肠上皮细胞（F-hiSIEC）作为评价人体小肠吸收情况的体外模型，结果显示其转运载体和代谢酶的表达比通常用于该评价的Caco-2细胞更接近人体。然而，其功能的许多方面仍然未知。本研究提高了通量，并将运输载体和代谢酶的功能与Caco-2细胞进行了比较。 [方法] 利用在96孔Transwell中培养的F-hiSIEC和Caco-2细胞，评估了模型化合物从顶端到基底（A到B）和从基底到顶端（B到A）方向的细胞膜通透性，并同时确认了代谢物的产生。
苯丙烷代谢的进化
图1。Mizutani等人编辑的肉桂酸/单胞醇途径和衍生型苯丙烷的示例，“学习植物化学的基础知识”。酶缩写：4Cl，4-Coumaroyl CoA连接酶； c3'h，p -coumaroyl shikimate/quinate 3-羟化酶； C4H，肉桂4-羟化酶； CAD，肉桂醇脱氢酶； ccOaomt，咖啡因coA o-甲基转移酶； CCR，肉桂二氧化碳减少； comt，caffeate o -methyltransferase; CSE，咖啡酰shikimate酯酶； F5H，试染5-羟化酶； HCT，羟基nnamoyl COA：光泽羟基霉素转移酶； PAL，苯丙氨酸氨裂解酶；塔尔，酪氨酸氨裂解。
一致实验室结果的消耗品
无人DNA的不包括人DNA（检测极限：小于2 pg DNA）。如果产品被单个人类细胞（例如皮肤中的细颗粒）污染，则可能导致假阳性结果。 这在诊断和法医医学领域尤其重要。不包括无DNase DNase。 DNase是一种分解DNA的酶。用DNase污染会影响DNA分析。不包括无RNase RNase。 RNase是一种分解RNA的酶，对高压灭菌和辐射具有极大的抗性。 PCR抑制剂（PCR抑制剂）不含它不包含显着损害PCR反应（抑制剂）的物质。重要的是，PCR反应中使用的消耗品不会包含不利影响反应的杂质。 这对于痕量遗传物质的扩增和定量PCR尤为重要。
PCR清洁和智能消耗活动
无人DNA的不包括人DNA（检测极限：小于2 pg DNA）。如果产品被单个人类细胞（例如皮肤中的细颗粒）污染，则可能导致假阳性结果。 这在诊断和法医医学领域尤其重要。不包括无DNase DNase。 DNase是一种分解DNA的酶。用DNase污染会影响DNA分析。不包括无RNase RNase。 RNase是一种分解RNA的酶，对高压灭菌和辐射具有极大的抗性。 PCR抑制剂（PCR抑制剂）不含它不包含显着损害PCR反应（抑制剂）的物质。重要的是，PCR反应中使用的消耗品不会包含不利影响反应的杂质。 这对于痕量遗传物质的扩增和定量PCR尤其重要。
17K17879研究结果报告
因此，我们旨在通过反复进行目标AID的基本构建以及对反馈的评估和验证，以建立高度的技术。 （1）基本技术的构建：首先创建超级目标AID，为了使基因组编辑更有效，我们将创建一个改进的功能目标AID（超级目标AID）。研究主要考虑质粒方面的变化。我们旨在通过使用没有复制能力的瞬态质粒来控制温度敏感启动子和组成启动子的DCAS9和CRISPR-GRNA，使用快速降解酶（LVATAG）[参考2]，以及使用抑制DNA修复机制（UGIS）的系统。接下来，我们还将考虑修改酶本身。我们还考虑使用反遗传方法的改进，例如减少CAS9非特异性结合的突变[参考3]，增加辅助酶活性的突变[参考4]以及对融合酶的接头长度的修改。 （2）评估基础替代效率：基因组编辑中靶点效应的验证，关键点是如何抑制与目标序列不同的位点的意外诱变，以及如何验证这一点。意外突变包括通过类似于目标序列的靶向序列引入的突变，以及完全独立于序列的非特异性突变。为了验证脱靶，使用破坏RPOB基因的利福平抗药性菌株进行评估。在改进目标基因，培养条件和目标AID的编辑方法的同时，进行了非目标评估，并最终进行了大肠杆菌的整个基因组序列以验证测试。
植物における相同组换えを介した精密ゲノム编集...
CRISPR/CAS系统被发现是一种细菌免疫机制（一种驱除外毒病毒等的机制），而CRISPR/CAS9（近年来一直在世界上使用最广泛的CRISPR/CAS9）来自链球菌为增生链球菌（SPCAS9）。该系统由CAS9，一种裂解双链DNA的酶（内切酶）和一个称为“ Guide RNA（GRNA）”的短RNA分子组成。 GRNA由一个20碱基的序列互补，与位于5'端的目标序列和作为CAS9的支架的序列，当Cas9与脚手架序列结合时，形成了Cas9-grna络合物。为了使CAS9识别目标序列，需要一个称为原始的基序（PAM）的特定序列，将序列与GRNA的5'末端的20个基部互补（在SPCAS9的情况下为NGG），并且需要Cas9-guide RNA与指导rna + p Douplence rebs crement cremence extrent crement crement crements extrest rebists的互补序列的位置结合的位置。 CRISPR/CAS9系统不仅用于切割DNA，而且通过将各种效应子与Cas9蛋白相结合，而CAS9蛋白的DNA裂解活性部分或完全不足，而不需要DNA双链断裂的基因组编辑技术是一个接一个地开发的。 One of these is a technology called Prime editing, in which a fusion protein in which reverse transcriptase is linked to a Cas9 (nickase-type Cas9, nCas9) protein that has partially deficient in DNA cleavage activity and an RNA molecule in which a sequence that forms the template for reverse transcriptase is linked to the 3' end of gRNA, allowing an arbitrary modification to the target gene using RNA as a template.
真菌基因组编辑新技术
■知识产权：Tokugan 2022-196304“生产基因组编辑的细胞和促进杂交的方法”，Tokugan 2024-057389“核酸裂解酶，核酸，矢量，矢量，辅助套件，用于修改核酸和核酸的方法3。碎片，套件和方法用于产生基因工程的真核细胞”，未发表的应用，Tokugan 2024-057383“产生突变体，基因表达方法和真核生物细胞的方法”，未发表的应用，■公立资助的项目的名称，使用的名称：Young Scientist（a）：2017-2019，挑战2.2022.202 Ental Research b：2023-2027
Helix Extension Co.，Ltd。
正如2023年诺贝尔生理学和医学奖被授予mRNA疫苗的实际应用，核酸药物使用核酸（例如DNA和RNA）作为药物吸引了人们的注意。这种核酸是使用质粒DNA的耗时且昂贵的方法产生的，即通过大肠杆菌培养物生长和纯化。我们已经改进了PCR技术，以建立一种DNA生产方法，该方法通过化学反应（酶反应）以低成本和高速产生DNA，不依赖大肠杆菌的寿命活性。
开发DNA-蛋白质共价斑块
为了证明开发的D-PCLIP的有用性，我们创建了DNA适体酶复合物作为DNA蛋白复合物的模型。具体而言，我们认识到人类血红蛋白（HB），这是DNA适体的疾病标志物之一，旨在使用葡萄糖氧化酶（GOX）使用化学发光来检测它。使用制备的DNA适体配合物检测到Hb，并在缓冲液和血清中确认高线性范围为6.3-50 nm（图2）。这表明可以测量临床所需的检测范围。此外，已经证实，该系统在电化学检测中的应用（可以在较短的时间内进行测量）也可以测量临床所需的检测范围。此外，为了验证D-PCLIP的多功能性，使用三种类型的DNA适体和两种酶创建了总共四种类型的DNA适体 - 酶复合物，并进行了功能评估。结果，已经证实，这两个配合物都保留了两者的功能。未来的发展：在这项研究中，我们开发了一个D-PCLIP，它可以不可逆地复杂DNA和蛋白质一对一。络合反应仅通过在4°C下进行混合而进行，从而易于生产保持这两种功能的DNA蛋白质复合物。此外，由于UDGX的DNA结合反应在DNA的乌拉西尔组中特别进展，因此可以通过调整乌拉西尔基团的位置来轻松设计蛋白质的融合位置。 D-PCLIP可以自由地更改DNA和蛋白质的组合，因此预计将在各种未来的应用中使用。例如，通过在抗体和DNA之间创建复合物，可以将其应用于诊断技术，例如免疫PCR或药物，以递送细胞特异性DNA。