摘要 组成性环氧合酶(COX-1;前列腺素内过氧化物合酶,EC 1.14.99.1)在生理条件下存在于细胞中,而 COX-2 则由某些细胞因子、有丝分裂原和内毒素诱导,可能是在病理条件下,如炎症。因此,我们评估了一些非甾体抗炎药对完整细胞、破碎细胞和纯化酶制剂中 COX-1(在牛主动脉内皮细胞中)和 COX-2(在内毒素激活的 J774.2 巨噬细胞中)活性的相对抑制作用(绵羊精囊中的 COX-1;绵羊胎盘中的 COX-2)。阿司匹林、吲哚美辛和布洛芬对破碎细胞和纯化酶制剂的效力相似,表明物种没有影响。在所有使用的模型中,阿司匹林、吲哚美辛和布洛芬对 COX-1 的抑制剂作用比对 COX-2 的抑制剂作用强。尽管 IC50 值不同,但阿司匹林和吲哚美辛的相对效力在不同模型之间仅略有不同。布洛芬对完整细胞中的 COX-2 的抑制剂作用比对破碎细胞或纯化酶中的 COX-2 的抑制剂作用强。水杨酸钠对完整细胞中的两种 COX 异构体都是一种弱抑制剂,对破碎细胞或纯化酶制剂中的 COX 均无效。双氯芬酸、BW755C、对乙酰氨基酚和萘普生对完整细胞中的 COX-1 和 COX-2 的抑制剂作用大致相同。BF 389 是一种目前正在人体中测试的实验药物,它是完整细胞中 COX-2 最有效和最具选择性的抑制剂。因此,这两种酶之间存在明显的药理学差异。利用这些 COX-1 和 COX-2 活性模型,可以鉴定出副作用可能小于现有疗法的 COX-2 选择性抑制剂。一些抑制剂在完整细胞中的活性比在纯化酶中的活性高,这表明纯酶制剂可能无法预测治疗作用。
冻干有几个优点,包括室温运输和存储,延长的保质期以及样品体积的灵活性提高。为了与冻干兼容,酶的制剂必须不含甘油,并包括专门的冻干 - 脱落,可在混合物暴露于各种冻干条件下,包括冷冻,温度升高,真空和脱水。理想的冻干配方应以冷冻干燥的格式稳定酶,并允许非常快速的酶制剂补液和重新激活,而不会影响其在补液后的性能。
菌丝蘑菇被人性用作数百年来的有用代谢产物和酶的来源。他们对其他工业微生物的无条件优势是通过相对简单,廉价且易于安排的发酵方案分泌大量(高达120-150 g/l)的蛋白质的能力。菌丝真菌的遗传不同图像决定了它们用作具有独特特性的新基因来源的可能性,还可以使您开发具有工业化蛋白质异源表达的新重组菌株[1,2]。现代生物技术过程中使用的菌丝蘑菇是曲霉[3-5],trichoderma [6-7],青霉[8-9,10],Acremonium [11]等。酶制剂
近年来,对消费者对自然行动的渴望减少环境足迹的渴望,对基于植物的产品的需求出现了。植物蛋白酶在分解Pro Teins和在所有生物体中产生氨基酸的作用中起着至关重要的作用,在这个市场中已成为幼体蛋白酶在营养型领域中最常使用的植物蛋白酶。尽管这些酶广泛流行,但在市场上可用的商业蛋白水解产品的控制和分析中存在显着差距,尤其是关于它们的表征和定量。本评论文章通过检查来源,催化性能,生产过程和可分析它们的技术来解决这一关键点,从而为行业中提供了新的可能性。此外,我们将探讨其中一些酶的特征以及影响半胱氨酸蛋白酶制剂作为人消化辅助物的有效性的关键因素。最后,我们将讨论未来的观点,并建议采取行动,以继续进入植物性蛋白酶在食品补充剂和消化辅助工具中的工业应用。
荧光太阳灯的紫外线确实能抑制 CHS 的诱发,而窄带 UVB(3 1 1-312 um)却不能,尽管这两种光源都会导致尿刊酸的光异构化 [26]。因此,尿刊酸是否是皮肤中唯一的光感受器仍存在疑问。Kripke 等人的研究表明,DNA 也可能充当光感受器。这些研究使用了两种实验方法。Apple gate 等人观察到,在紫外线暴露后用光复活光照射有袋动物 Monodelphis domestica 可逆转紫外线引起的 CHS 抑制 [63]。因为用可见光照射 M. domestica 会激活修复嘧啶二聚体的光复活酶 [64],所以这些研究表明 DNA 是光感受器。第二种方法是利用脂质体将噬菌体切除修复酶 T4 核酸内切酶 V 引入小鼠体内 [64]。动物暴露在 UVR 下,然后将悬浮在水凝胶载体中的脂质体涂到小鼠皮肤上。当将含酶的脂质体涂抹到受辐射动物的皮肤上时,紫外线诱导的 CHS 和 DTH 抑制均受到抑制。当将含有热灭活酶制剂的对照脂质体涂抹到皮肤上时,没有观察到抑制的抑制。此外,
在特定的植物家族中发现了抽象的结构上多样化的苄基喹啉生物碱(偏见),其中一些是由于其强大的生物学活性而有效产生的。corydalis植物(例如,Corydalis Yanhusuo)的豆豆科也会产生各种偏见;因此,它们已用于中医。由于使用微生物的代谢工程和合成生物学是有效生产有用代谢物的有前途的技术,因此阐明每个BIA的生物合成途径是必不可少的。尽管最近已经分离出了几种参与corydalis偏差的生物合成的酶基因,但许多酶基因仍然未知,例如蛋白酶碱Calkaloid c-甲基转移酶参与Corydaline的生物合成,这是Corydaline的生物合成,这是Corydalis植物中发现的主要偏见之一。在这项研究中,我们进行了转录组分析,并结合了Corydalis solida不同组织的代谢物分析。基于多种偏差的高积累,包括原生质,同种丙蛋白酶和corydaline,编码推定的生物合成酶的基因,包括细胞色素P450,甲基转移酶和氧化酶蛋白,在块茎中高度表达。在块茎中高度表达了两个OMT基因CSOMT1和CSOMT2,并使用粗酶制剂进行了进一步的表征,表明CSOMT1表现出7- O-甲基化活性,针对网状,而CSOMT2 2催化9- O-甲基化的Sculerine scoulerine,然后由2- o甲基化。我们的发现提供了有价值的信息,用于隔离Corydalis物种中新型生物合成酶基因。
1 (1) 用于工业、科学和摄影以及农业、园艺和林业的化学品;未加工的人造树脂,未加工的塑料;肥料;灭火组合物;回火和焊接制剂;用于保存食品的化学品;鞣制物质;工业用粘合剂;非医疗和兽医用细菌制剂;酿酒用杀菌剂[用于酿酒的化学制剂];醋酸化用细菌制剂;非医疗和兽医用微生物培养物;用于发酵葡萄酒的化学品;化学用途的发酵剂;非医疗和兽医用微生物制剂;化学用途的牛奶发酵剂;非食品用保存盐;食品用化学添加剂;工业化学品;蛋白质[原料];用于制造食品补充剂的蛋白质;肽[原料];非医用和兽医用神经酰胺;生化催化剂;工业用酶制剂;工业用酶;饮料工业用过滤制剂;非医用或兽医用实验室分析用化学制剂;农用化学品,但杀菌剂、除草剂、杀虫剂和杀寄生虫剂除外;乳化剂;卵磷脂[原料];工业用嫩肉剂;食品工业用乳发酵剂;食品工业用细菌培养物;食品工业用益生菌;食品工业用益生菌培养物;添加到食品中的细菌培养物;食品制造用乳酸杆菌;食品制造用细菌;食品制造用细菌。5(2)药品、医用和兽医用制剂;医用卫生制剂;医疗或兽医用营养食品及物质,婴儿食品;人和动物的膳食补充剂;人类和动物的营养补充剂;石膏,敷料;堵牙材料,牙蜡;消毒剂;杀虫剂;杀菌剂,除草剂;婴儿食品;婴儿饮料;婴幼儿奶粉;婴幼儿液体奶或奶粉;婴儿乳粉;医用营养物质;医用营养饮料;医用营养食品;医用营养食品制剂;矿物质食品补充剂;
摘要 背景 癌细胞实现免疫逃逸的一个重要机制是将细胞外腺苷释放到其微环境中。腺苷激活免疫细胞上的腺苷 A 2A 和 A 2B 受体,这是最强的免疫抑制介质之一。此外,细胞外腺苷促进血管生成、肿瘤细胞增殖和转移。癌细胞上调外核苷酸酶,最重要的是 CD39 和 CD73,它们催化细胞外 ATP 水解为 AMP(CD39)并进一步水解为腺苷(CD73)。因此,抑制 CD39 有望成为癌症(免疫)治疗的有效策略。然而,目前还没有适合 CD39 的小分子抑制剂。我们的目标是识别类药物 CD39 抑制剂并对其进行体外评估。方法我们通过筛选一组自行编制的、已获批准的、大多是 ATP 竞争性的人类 CD39 蛋白激酶抑制剂,采取了一种再利用方法。在各种正交试验和酶制剂以及人类免疫细胞和癌细胞中,进一步表征和评估了最佳命中化合物。结果酪氨酸激酶抑制剂色瑞替尼是一种用于治疗间变性淋巴瘤激酶 (ALK) 阳性转移性非小细胞肺癌的强效抗癌药物,被发现能强烈抑制 CD39,并表现出相对于其他外核苷酸酶的选择性。该药物表现出一种非竞争性、变构的 CD39 抑制机制,在低微摩尔范围内表现出效力,这与底物 (ATP) 浓度无关。我们可以证明色瑞替尼以剂量依赖性方式抑制外周血单核细胞中的 ATP 去磷酸化,导致 ATP 浓度显著增加并阻止 ATP 形成腺苷。重要的是,色瑞替尼 (1-10 µM) 显著抑制了 CD39 天然表达高的三阴性乳腺癌和黑色素瘤细胞中的 ATP 水解。结论 CD39 抑制可能有助于强效抗癌药物色瑞替尼发挥作用。色瑞替尼是一种新型 CD39 抑制剂,具有高代谢稳定性和优化的物理化学性质;据我们所知,它是第一个可穿透脑的 CD39 抑制剂。我们的发现将为 (i) 开发更有效、更平衡的双重 CD39/ALK 抑制剂和 (ii) 优化色瑞替尼支架与 CD39 的相互作用奠定基础,以获得强效且选择性的类药物 CD39 抑制剂,以供未来的体内研究。
蛋白质结构处于遗传控制之下;' - 3然而,DNAT影响蛋白质中特定氨基酸序列的形成的确切机制尚不清楚。几年前,发现具有某些有毒的噬菌体的大肠杆菌感染诱导了具有高代谢率的RNA馏分的形成,既具有高代谢率率,又是与感染病毒的DNA相对应的基础成分。4-6在非注射细胞中的存在中,也证明了无源性RNA成分的存在。然而,在这种情况下,RNA的基础组成类似于细胞DNA的基础组成。78这些观察结果集中在这种类型的RNA在蛋白质合成中的可能作用上,并且最近已经概述了与这种观点一致的某些证据。直到最近,最近还没有已知的DNA酶机制用于DNA指定的RNA的DNA酶机制。多核苷酸磷酸化酶'°11虽然催化了多吡丁而生核苷酸的合成,但本身并不能提供具有特定核苷酸序列的RNA的机制。产生独特的核苷酸序列的一个实例涉及核苷酸仅限于预先存在的多核苷酸链的结束。12-14因此,我们的努力是针对检查RNA合成的替代机制,尤其是DNA可能决定RNA的核苷酸序列的机制。实验过程。物质:未标记的核糖核苷二磷酸和三磷酸盐购自Sigma Biochemical Corporation和加利福尼亚州的生物化学研究公司。在本文中,我们希望报告来自大肠杆菌的RNA聚合酶的分离和某些特性,在DNA和四个天然存在的核糖核苷三磷酸中,它会产生与DNA的碱基成分相互补充的RNA。在过去的一年中,几个实验室报告了类似的发现,并从细菌以及动植物来源的酶制剂中进行了类似的发现。15-24在以下论文中,酶促合成的RNA对大肠杆菌核糖体在蛋白质核糖体中掺入氨基酸的速率和程度对蛋白质的蛋白质的影响。8-C14标签的ATP购自Schwartz生化公司; the other, uniformlv labeled, C14 ribonucleoside triphosphates were prepared enzymatically from the corresponding monophosphate derivatives25 isolated from the RNA of Chromatium grown on C1402 as sole carbon source.26 CTP labeled with p32 in the ester phosphate was obtained by enzymatic phosphorylation of CMP"2 prepared according to Hurwitz.27 The通过Lehman等人的过程获得了脱氧核苷三磷酸。25小牛胸腺和鲑鱼精子DNA通过Kay等人的方法分离。28DNA来自Perolocter Aerogenes Aerogenes Aerogenes,phlei和phlei phlei和细菌T5,T5,T5,T5,T5,T5,T5的phage。如前所述制备了来自大肠杆菌的未标记和p32标记的DNA。根据Schachman等人的32和Radding等人,制备了3'D-AT和D-GC聚体,“ 3”,“ 3,” 3。从枯草芽孢杆菌34的trans形成DNA是E. W. Nester的礼物,DNA来自噬菌体0x