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蛋白质工程方法增强酿酒酵母真菌漆酶的产量
摘要：腐生担子菌分泌的漆酶是一种多功能生物催化剂，仅需氧气即可氧化多种芳香族化合物。酿酒酵母是真菌漆酶工程的首选宿主。为了帮助酵母分泌活性酶，天然信号肽通常被酿酒酵母α交配因子（MF α 1）的前原前导序列取代。然而，在大多数情况下，只能获得基础酶水平。在酿酒酵母中与α因子前原前导序列融合的漆酶的定向进化过程中，我们证明了信号肽中积累的突变显著提高了酶的分泌。在这里，我们描述了为增强在酿酒酵母培养物液体提取物中检测到的漆酶活性而实施的不同蛋白质工程方法。我们通过使用实验室中连续进行的漆酶进化活动获得的适应性最强的突变 α 因子前导序列，证明了天然和工程漆酶的分泌得到改善。我们还特别关注了蛋白质 N-糖基化在漆酶生产和特性中的作用，以及通过共识设计引入保守氨基酸，从而能够表达酵母原本不会产生的某些漆酶。最后，我们修改了在之前的定向进化活动中积累的漆酶编码序列 (CDS) 突变的贡献，这些突变促进了酶的生产。
CRISPR/CAS9用于开发酿酒酵母细胞工厂的系统
合成酵母细胞工厂为一系列产品的可持续供应提供了一个显着的解决方案，从大型工业化学品到高价值药品化合物。合成生物学是一个领域，在其中对代谢途径进行了深入研究和设计。群集，定期间隔，短，全文重复相关（CRISPR）/CRISPR相关蛋白9（CAS9）技术已成为合成生物学的最新基因编辑技术。最近，使用不同的CRISPR/CAS9系统的使用已扩展到酵母工程领域，用于单核苷酸分辨率编辑，多基因编辑，转录调控和基因组规模的修改。这种进步系统导致了涉及减少劳动和时间的加速微生物工程，并增强了对细胞遗传学和生理学的理解。本评论简要概述了最新的研究进度以及CRISPR/CAS9系统在遗传操作中的使用，重点是酿酒酵母酿酒酵母细胞工厂工程的应用。
必需宿主基因MMS21的自然变体限制了酿酒酵母中的2-微米质粒
抽象的迷幻药物是有意识状态的有效调节剂，因此是研究其神经生物学的强大工具。n，n，二甲基丁胺（DMT）可以迅速诱导以生动且精致的视觉图像为特征的极端身临其境的意识状态。在这里，我们研究了DMT诱导的改变状态的电生理相关性，这些参与者接受了DMT和（分别）安慰剂（盐水），同时指示闭上眼睛。与我们的假设一致，结果表明，皮质激活的时空模式（即行进波）类似于视觉刺激引起的。此外，闭合眼静止的典型自上而下的α波段节奏显着下降，而底部向前波则显着增加。这些结果支持最近的模型，该模型建议迷幻药减少“先验的精确加权”，从而改变自上而下的信息与自下而上信息的平衡。这些发现的强大假设征服性质意味着发现了一个重要的机械原理，基于迷幻诱导的改变状态的基础。
酿酒酵母基因组必需基因的有效靶向突变
摘要 通过等位基因置换进行基因定点突变是功能基因组分析和代谢工程的重要内容，但传统的通过选择标记对必需基因进行定点突变的方法存在很大挑战，因为第一步必需基因敲除将导致致死的表型。本文利用CRISPR/Cas9系统，发展了一种两端选择标记（Two-ESM）方法对酿酒酵母中的必需基因进行定点突变，成功构建了酿酒酵母必需基因ERG20（编码法呢基二磷酸合酶）的单突变和双突变体，突变效率达100%。此外，与传统方法相比，Two-ESM方法显著提高了突变效率，简化了遗传操作程序。通过动态调控突变基因的表达和整合模块的优化，进一步提高了基因组整合和突变效率。这种 Two-ESM 方法将有助于构建酵母功能基因组分析和代谢通量调控所需的必需基因的基因组突变。
通过替换 PHO4 基因，利用工业工程酿酒酵母提高甘蔗糖蜜乙醇产量
甘蔗糖蜜（SCM）是制糖过程中的副产品，总糖浓度约为50%。8 由于含糖量高，SCM已成为中国、巴西等国家生产非食品生物乙醇的主要原料。9 中国每年的SCM产量约为380万吨，是广西等蔗糖主产区乙醇发酵的主要原料。10 利用该原料生产乙醇具有来源集中、成本低的优势，在一定程度上可以解决制糖工业对环境的直接污染问题，将废弃物转化为有用资源，从而有可能提高经济效益。然而，SCM生物乙醇行业仍存在乙醇发酵水平低和环境污染严重的两个难题，这主要是由于缺乏高性能的工业酵母菌株造成的。酿酒酵母是工业生产生物乙醇最常用的微生物。各种研究表明，酿酒酵母菌株从 SCM 发酵中获得的乙醇含量 (EC) 约为 79.25 – 96.29 g L 1 。11,12 巴西最佳工业酿酒酵母菌株为 CAT1 和 PE2，EC 分别为 79.25 g L 1 和 77.35 g L 1 。11,13 此外，苏格兰 M 型野生酿酒酵母的 EC 为 82.17 g L 1 。14
酿酒：品酒笔记：HURÉ FRÈRES- 记忆
这款混合酒的葡萄来自 Huré Frères 的所有地块。霞多丽来自兰斯山和维特里亚，而黑皮诺和莫尼耶皮诺来自兰斯山和阿德尔山谷。土壤通常是沙土覆盖石灰岩。Huré Frères 还在 Rilly la Montagne 购买了一些霞多丽，那里面朝南，土壤石灰岩丰富。葡萄栽培：
1869 年英格兰东北部的酿酒业...
本论文追溯了东北酿酒业从 1869 年引入限制性许可到第二次世界大战爆发的演变过程。第一部分评估了 1869 年东北酿酒业的状况，包括酿酒实践和技术、贸易结构、公共监管和公众关注程度以及竞争环境，尤其是区域产品和东北以外地区进口产品的作用。第二部分涵盖 1870-1890 年，涉及两个主要问题：生产组织，包括贸易结构和酿酒厂的规模和安排，以及该地区酿酒商试图通过更多地参与零售业以及加强管理、改进产品和营销来应对来自外部酿酒商的竞争挑战的背景下的竞争。第三部分涵盖 1891-1914 年，研究由于所有权集中、合并、合理化和进一步融入零售业而导致的贸易结构变化。还讨论了日益复杂的竞争环境、更专业的管理方法和财务绩效。第四部分涵盖 1914-1920 年，考虑在政府严格监管的特殊情况下的贸易组织、竞争和绩效。第五部分涵盖 1921-1939 年，首先讨论在行业整体萎缩的背景下，生产和零售贸易的结构变化。其次，讨论了这一时期的竞争和绩效；竞争环境的变化与反吸引力以及酿酒商改善酒吧和广告的反应，以及在艰难的经济环境下的绩效。最后，对结构变化的总体模式、竞争和市场行为的发展以及绩效、这些因素之间的因果关系以及收购和合并的决定性影响得出了一些一般性结论。
在酿酒酵母中交配类型切换过程中重组的中间体。
我们已经确定了从MATA到MATA的酵母交配型基因的同义转换的两个新型中间体。在HO核酸内切酶裂解后，观察到5'至3'的外核解消化，直到ho切割远端，产生了3'端的单链尾巴。在无法切换的RAD52应变中，此镜头更为广泛。令人惊讶的是，HO切割的近端受到保护，免受降解。这种稳定取决于无声复制供体序列的存在。通过定量应用聚合酶链反应（PCR）来鉴定第二个中间体。在MAT近端YA交界处出现之前，开关产物的YVA-MAT远端共价片段出现。未检测到MAT远端与HML远端序列的共价连接。我们建议，HO CUT远端的MAT DNA侵入完整的供体，并通过DNA合成扩展。在RAD52应变中阻止了此步骤。这些中间体与MAT开关的模型一致，在该模型中，HO切割的远端最初在链入侵和从供体中传递信息。关键词：重组机制/交配型/酵母/双链休息时间！rads2