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World File Search System错配
使用 Dharmacon Edit- 对斑马鱼胚胎进行显微注射……
图 1：微注射 Edit-R Cas9 核酸酶 mRNA 和合成 crRNA:tracrRNA 的斑马鱼胚胎具有可检测的编辑事件。仅微注射 Edit-R Cas9 mRNA（+/+ 泳道）或微注射 Edit-R Cas9 mRNA 加靶向 GFP 的 crRNA:tracrRNA（+ 泳道）。注射后 2 天制备基因组 DNA，并使用位于切割位点两侧的引物进行 PCR。使用 T7EI 进行 DNA 错配分析，并在 2% 琼脂糖凝胶上分离样品。使用 ImageJ 软件估计由于基因编辑而导致的插入和缺失百分比 (Indel %)，并显示在泳道底部。在所分析的斑马鱼胚胎中，75% 实现了使用靶向 GFP 的 crRNA:tracrRNA 编程的 Cas9 mRNA 的靶向 DNA 切割。
B.E.电子和仪器工程B.E.电子和仪器工程
CMOS电路，寄生电容，MOS缩放技术，闩锁，匹配问题，布局中常见的质心几何形状。用于逻辑，算术和顺序块设计的数字电路设计样式；使用逻辑工作的设备尺寸；定时问题（时钟偏斜和抖动）和时钟分布技术；能源消耗的估计和最小化；功率延迟权衡，互连建模；内存体系结构，内存电路设计，感官放大器；集成电路测试的概述。基本和级联的NMOS/PMOS/CMOS增益阶段，差分放大器以及高级OPAMP设计，设备的匹配，错配分析，CMRR，PSRR和SLEW速率问题，偏移电压，高级电流镜；电流和电压参考设计，共同模式反馈电路，频率响应，稳定性和噪声问题；频率补偿技术。
通过两性离子聚合物结合和肽融合最大限度地降低 CRISPR/Cas9 系统的脱靶频率
目前，CRISPR/Cas9 系统已广泛应用于各类生物和细胞的基因组编辑。1,2 遗憾的是，它还会在与靶序列相似的非靶位点引起不必要的突变。3 非靶突变是由 CRISPR/Cas9 RNPs 对 DNA 序列的非特异性识别引起的。4 已证明，除了最佳 PAM 序列 5-NGG-3 之外，Cas9 还可以切割具有 5-NAG-3 或 5-NGA-3′PAM 的位点，尽管效率较低。5 此外，20 nt 的单向导 RNA（sgRNA）可以识别与 sgRNA 存在多达 3 - 5 个碱基对错配的 DNA 序列，这表明在人类基因组中特定核酸酶的可能结合位点多达数千个。 3 此外，CRISPR/Cas9 可以诱导与 RNA 引导链相比含有一些额外碱基（“ DNA 凸起”）或一些缺失碱基（“ RNA 凸起”）的 DNA 序列进行非靶向切割。6 非靶向 DNA 切割可导致
经济增长的过去和未来：半...
思想的非竞争性带来了收益递增，保罗·罗默最近获得诺贝尔奖就是为了赞扬这一事实。这意味着长期经济增长率是收益递增程度和研究努力增长率的乘积；这是半内生增长理论的本质。这篇评论从半内生的角度解释了过去和未来的增长。50 多年来，由于教育水平的提高、错配的减少和（全球）研究强度的提高，美国的增长率大大超过了其长期增长率，这意味着未来前沿增长可能会明显放缓。其他力量则朝着相反的方向推动。首先是“发现新爱因斯坦”的前景：历史上，我们因为中国和印度的落后以及阻碍女性发明家的障碍而错过了多少才华横溢的研究人员？其次是人工智能可以增强甚至取代人类研究人员的长期前景。自始至终，这篇评论都强调了许多进一步研究的机会。
经济增长的过去和未来：半...
思想的非竞争性带来了收益递增，保罗·罗默最近获得诺贝尔奖就是为了赞扬这一事实。这意味着长期经济增长率是收益递增程度和研究努力增长率的乘积；这是半内生增长理论的本质。这篇评论从半内生的角度解释了过去和未来的增长。50 多年来，由于教育水平的提高、错配的减少和（全球）研究强度的提高，美国的增长率大大超过了其长期增长率，这意味着未来前沿增长可能会明显放缓。其他力量则朝着相反的方向推动。首先是“发现新爱因斯坦”的前景：历史上，我们因为中国和印度的落后以及阻碍女性发明家的障碍而错过了多少才华横溢的研究人员？其次是人工智能可以增强甚至取代人类研究人员的长期前景。自始至终，这篇评论都强调了许多进一步研究的机会。
流感疫苗研发路线图 - CIDRAP
疫苗对于保护人群免受季节性流感和大流行性流感的侵害至关重要，但我们目前的流感疫苗和疫苗接种计划存在不足。首先，循环病毒和用于产生特定毒株疫苗的病毒之间可能会出现抗原错配，疫苗需要每年重新配制和重新接种。其次，即使在抗原匹配良好的年份，疫苗的有效性也往往不理想，尤其是在老年人中。第三，研究人员尚未解开开发产生持久免疫力的流感疫苗的钥匙——例如，持续 5 至 10 年。第四，研究人员还没有开发出能够预防多种流感毒株（包括新型大流行病毒）的广泛保护性疫苗。最后，尽管季节性流感疫苗广泛可用，但许多国家——尤其是中低收入国家 (LMIC)——没有实施强有力的季节性流感疫苗接种计划，疫苗
一种通用且快速的 CRISPR 脱靶位点检测工具
背景：II 型成簇的规律间隔短回文重复序列 (CRISPR) 和 CRISPR 相关蛋白 (Cas) 是一种强大的基因组编辑技术，在基因功能分析中越来越受欢迎。在 CRISPR/Cas 中，RNA 引导 Cas 核酸酶到靶位点进行 DNA 修饰。结果：CRISPR/Cas 的性能取决于精心设计的单向导 RNA (sgRNA)。然而，sgRNA 的脱靶效应会导致基因组中出现不良突变，从而限制了 CRISPR/Cas 的使用。在此，我们介绍了一种通用且快速的 CRISPR 脱靶检测工具 OffScan。结论：OffScan 不受错配数量的限制，并允许自定义原型间隔区相邻基序 (PAM)，这是 Cas 蛋白的靶位点。此外，OffScan 采用 FM 索引，可有效提高查询速度并减少内存消耗。
2021 – 2025 年战略声明
我们意识到，我们是在新冠疫情的背景下推出这一战略的，这场疫情对全球社会、经济、工人和企业的运营方式产生了深远的影响。某些行业，尤其是提供面向客户的服务的行业，在一段时间内将无法提供新冠疫情之前的就业潜力，从而导致工作流失、技能错配和高失业率。随着企业适应为员工和客户提供安全的环境，运营挑战仍在继续。工人们正在学习如何通过数字通信和协作工具远程完成新任务，但许多活动和组织并不适合远程工作。人们一直预计，未来的工作将主要由人工智能 (AI)、自动化和数字化应用的普及所定义。然而，现在很明显，新冠疫情加速了数字化转型的步伐，对工作组织和服务交付产生了根本性影响。
比较三种不同递送方法在菊苣中实现 CRISPR/Cas9 介导的基因组编辑。
菊苣根 ( Cichorium intybus L. var. sativum ) 用于提取菊粉，菊粉是一种用作天然甜味剂和益生元的果糖聚合物。然而，在菊粉提取过程中需要去除味道苦涩的倍半萜内酯，而菊苣正是因为这种内酯才具有其独特的风味。为了避免这种提取过程及其相关成本，最近通过灭活四个拷贝的 germacrene A 合酶基因 ( CiGAS-S1、-S2、-S3、-L )，创建了倍半萜内酯含量较低的菊苣变种，该基因编码的酶可启动菊苣中苦味倍半萜内酯的生物合成。在本研究中，对 CRISPR/Cas9 试剂的不同递送方法进行了比较，比较了它们在 CiGAS 基因中诱导突变的效率、脱靶突变的频率以及它们对环境和经济的影响。 CRISPR/Cas9 试剂通过农杆菌介导的稳定转化或使用相同 sgRNA 的质粒或预组装核糖核酸复合物 (RNP) 瞬时递送。所有使用的方法都会导致 CiGAS -S1 和 CiGAS -S2 基因中出现大量 INDEL 突变，这些基因与所用的 sgRNA 完全匹配；此外，与 sgRNA 有一个错配的 CiGAS -S3 和 CiGAS -L 基因也发生了突变，但突变效率较低。虽然使用 RNP 和质粒递送会导致双等位基因、杂合或纯合突变，但质粒递送会导致 30% 的质粒片段在基因组中不必要地整合。通过农杆菌转化的植物通常表现出嵌合现象和 CiGAS 基因型的混合。当植物生长较长时间时，这种基因镶嵌变得更加多样化。虽然瞬时和稳定递送方法中靶基因型各不相同，但在六种已识别的潜在脱靶中未发现脱靶活性，这些脱靶存在两到四个错配。这些方法对环境的影响（温室气体 (GHG) 排放和一次能源需求）在很大程度上取决于它们各自的电力需求。从经济角度来看 - 就像大多数研究和开发一样
引文：Fan, R., Chai, Z., Xing, S., Chen, K., Qiu, F., Chai, T., Qiu, JL, Zhang, Z., Zhang, H., and Gao, C. (2020). 缩短 sgRNA-DNA 介
2018 ；Chen 等人，2017 ；Kleinstiver 等人，2016 ；Lee 等人，2018 ；Slaymaker 等人，2016）。增加和减少 sgRNA-DNA 界面的长度都会显著降低五种 Cas9 变体中的四种的编辑效率，Sniper-Cas9 是个例外（Lee et al., 2018）。但这种影响的基础尚不清楚。最近，Fu 等人观察到与靶标存在大量错配的 sgRNA 能够引导 SpCas9 切口双链 DNA（Fu et al., 2019）。同样，Szczelkun 等人描述了截短的 sgRNA（互补区为 ∆ 7 nt）与嗜热链球菌 Cas9 (StCas9) 结合导致缺口分子的积累 ( Szczelkun 等人，2014 )。这些观察结果表明，截短/延长的间隔区衍生片段对核酸酶的 HNH 和 RuvC 切割域施加了不同程度的影响，使得它们在某些情况下会切开目标 DNA，而不是将其切割。在这里，我们试图检验这一假设。