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环境评估草案 - 坎农空军基地
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农杆菌介导的多重 CRISPR/...
摘要：在巴基斯坦，棉花作物占国内生产总值的 23%，其大量出口为贸易业务提供了 60% 的总利润。不幸的是，双子病毒以惊人的速度摧毁了棉花作物。现在，CLCuV 导致棉花作物发生棉花卷叶病毒病并降低其产量。这种病毒对棉花植物的攻击给巴基斯坦造成了 50 亿美元的损失。在这方面，使用了一些传统方法，如植物育种和特定的 RNA 编辑。同时，生物技术引入了一些非常有吸引力的技术，这些技术具有根除这种疾病的巨大潜力。这些技术包括 ZFN、TALEN 和 CRISPR/Cas9。在我的研究中，采用 CRISPR 方法是因为其具有出色的位点特异性诱变效率。不同 CLCuV 的 rep 基因的保守位置被确定为靶位点。这些特定位点为 3 个 gRNA 的建立提供了信息。克隆了具有多个引导RNA和1Cas9的单一表达载体pHSE-401。使用了特定的棉花品种coker-312。通过切除棉花植株的下胚轴并通过农杆菌EHA-105菌株进行传递感染来进行载体的转化。然后，将1000个感染性下胚轴转移到具有各自抗生素的MSB上，然后转移到将下胚轴边缘转化为愈伤组织的再生培养基上。仅获得两个转基因愈伤组织，转基因愈伤组织的百分比为0.02％，通过PCR筛选并在凝胶上进行电泳。200bp的条带证实了棉花愈伤组织中存在CRISPR/Cas9构建体。关键词：CRISPR/Cas9，多重载体，3gRNA和Cas9，农杆菌，转化，愈伤组织。版权所有 © 2020 作者：这是一篇开放获取的文章，根据知识共享署名 4.0 国际许可（CC BY-NC 4.0）分发，允许在任何媒体中无限制地使用、分发和复制，用于非商业用途，前提是注明原作者和出处。 1. 引言 巴基斯坦的经济主要依靠农业部门。其在 GDP 中的百分比为 19.82%，但农业部门的参与度从 1950 年的 50% 下降到 2014 年的 21% 左右。农产品、林业劳动力、牲畜养殖和农作物转化所赚取的收入养活了巴基斯坦 64% 的乡村人口。据统计，66% 的巴基斯坦人在农业部门就业。在 20 世纪的十年里，农产品的年增长率为 2.5%。在 1997 年的农业一揽子计划中，农作物产量增长了 5.9%。为了提高农业生产力，年产量从 2010 年的 0.2% 增加到 2015 年的 2.9%（匿名，2014-2015 年）。
农杆菌介导的基因转移
以下几点突出了植物中主要双齿茎的八个主要部分。零件为：1。表皮2。皮下三。一般皮层4。内胚层5。周环6。血管链7。髓质或髓射线8。髓或髓质。DICOT词干：第1部分。表皮：表皮是茎的最外层。它由紧凑型伸长的细胞细胞组成，它们看起来在横截面中看起来是矩形桶形。细胞是透明的，没有叶绿体。
章程对高尺度农林业和
习惯性做法，例如牲畜灌木丛和浏览树木，缺乏土地财产权是有效地提高自然资源管理（NRM）的重要制度限制，包括南部非洲的农业库存技术。通过与农民团体和发展组织的合作，赞比亚东部的传统领导人颁布了章程来管理约束。本文研究了章程制定和实施的过程，并评估其有效性以实现所预期的结果。然后，它使用196个家庭的样本来评估章程对社区家庭和社会群体的影响。的结果表明，章程导致布什火爆发和社区放牧的发生率显着降低。它还强调了传统机构如何为农村社区的NRM进行当地政策干预的重要切入点。章程对妇女的家庭和练习农林业的人产生了积极影响，但是儿童（男孩）和牲畜的所有者受章程的不利地位。从研究中学到的经验教训包括：（i）在社区中不同利益群体之间与自然资源共享相关的利益（或成本）的分配会影响章程对此类资源的有效性； （ii）社区中现有的权力结构的动态是对NRM的当地政策干预措施有效性的关键决定因素； （iii）私有化季节性共享是设计农村社区NRM政策干预措施的重要因素。从研究中学到的经验教训包括：（i）在社区中不同利益群体之间与自然资源共享相关的利益（或成本）的分配会影响章程对此类资源的有效性； （ii）社区中现有的权力结构的动态是对NRM的当地政策干预措施有效性的关键决定因素； （iii）私有化季节性共享是设计农村社区NRM政策干预措施的重要因素。得出的结论是，除了NRM干预措施的技术特征，当地的机构安排和农村社区中现有的权力结构以及NRM技术的福利分配方式（或成本）的模式对他们在农村社区中的广泛采用至关重要。
人工智能在农林业中的应用：
农林业被定义为一种集约化和互动式的土地利用系统，该系统优化了资源利用模式，并从生物成分的相互作用中实现互利，例如在同一块土地上按时间和空间安排有意使用树木和/或灌木与农作物和/或牲畜相结合。农林业是一种自给自足的绿色技术，旨在彻底改变印度农业的未来。印度农业是该国经济的支柱，60% 的人口直接或间接地依靠农业获得生计和收入。农林业是一门快速发展的科学，旨在解决气候变化和全球变暖以及碳封存问题。为了实现农业现代化，人工智能 (AI) 已开始应用于从播种到收获的各种农业技术。现在，需要在农林业中使用基于人工智能的技术来克服劳动力、成本、时间和准确性的问题
芽再生的优化及农杆菌...
摘要：高效的植物转化和组织培养方法对于植物的遗传工程和先进的分子育种至关重要，但在栽培的八倍体草莓 (Fragaria × ananassa) 中，这两种方法都尚未得到很好的建立。在本研究中，针对两个基因不同的草莓品种 Sweet Sensation VR Florida 127 (FL127) 和 Florida Brilliance (FB) 建立并优化了一种芽再生方法。从温室生长的植物中获得的尖端、节点和叶柄的匍匐茎段被用作外植体，用于比较芽再生率。'FL127' 在优化条件下显示出最高的芽再生频率，而'FB' 在相同培养基类型中对较低浓度的 N6-苄基腺苷 (BA) (0.01 mg/L) 的反应最佳。 'FL127' 和 'FB' 中体细胞胚从匍匐茎尖 (RT) 向芽再生的平均转化频率分别为 42.8% 和 56.9%。利用这些优化的组织培养条件，进行农杆菌介导的 CRISPR/Cas9 基因编辑，以检查品种 FL127 中八氢番茄红素去饱和酶 FaPDS 的转化和靶基因编辑效率。总共 234 个外植体接种了含有 Cas9-FaPDS 的农杆菌，导致愈伤组织诱导效率为 80.3%，其中 13.3% 的再生植物表现出部分或完全的白化表型。编辑子代的扩增子测序表明，所有 FaPDS 同源拷贝的向导 RNA (gRNA) 靶位点或侧翼区域均发生了突变（替换、插入和缺失）。我们的研究结果为草莓功能基因组学研究和基因编辑指导的品种改良提供了有效的组织培养和转化方法。
农民和野生动物用水 - RSPB
为解决这些问题，我们开发了“农民和野生动物用水”合作项目，通过探索和评估各种多功能湿地栖息地创建和洪水储存技术的可行性。我们的目标是找出可以为汉伯黑德平原和汉伯河口内陆土地上的农业、洪水风险管理和野生动物带来重大利益的方案。这包括考虑小规模和大规模技术，例如“临时湿地”和生物多样性丰富的储水库。我们研究了将这些技术纳入盈利农业的核心业务原理的可能性，并评估了该地区典型土地持有的相对成本和收益。此外，我们还审查了应用这些技术所固有的潜在同意和立法挑战。
高效农杆菌介导的遗传...
使用含有 pCAMBIA 1301 载体的农杆菌菌株 AglI 感染新鲜芦荟外植体，以验证 GUS 基因的瞬时表达。与农杆菌共培养后，在进行外植体 GUS 组织化学染色的外植体上观察到几个明显的蓝点（图 5）。该载体在 GUS 基因中有一个内含子，确保其仅在转化组织中活跃表达，消除了假阳性的可能性。通过 GUS 组织化学染色评估了不同芦荟外植体在不同物理参数下的再生潜力和转化效率。在组 I 和组 II 中分别发现瞬时表达率为 91.3% 和 28.6%。芦荟茎（芽基部）表现出最大的再生潜力
农杆菌介导的番茄转化
番茄既是一种重要的粮食作物，也是用于各种研究（包括了解基因功能）的模型植物。转化通常与番茄的所有广泛遗传和基因组资源相结合，以促进这些研究。我们实验室常用的转化方案已应用于许多不同的番茄基因型，并依赖于农杆菌对幼子叶切片的感染。我们使用载体系统进行过度表达，使用 RNA 干扰进行基因沉默，使用 CRISPR/Cas9 进行基因组编辑。用于设计基因构建体的载体包含可选择的标记基因，这些基因赋予对卡那霉素、潮霉素和除草剂成分双丙氨膦的抗性。本章详细介绍了我们遵循的农杆菌介导的番茄栽培和野生品种转化方案。