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World File Search System锥虫
转运蛋白而非药物靶标的差异是刚果锥虫和锥虫亚属锥虫对二脒和三聚氰胺苯砷剂具有不同先天敏感性的主要决定因素
摘要：动物锥虫病是感染各种非洲锥虫种类的动物的疾病，例如布氏锥虫、伊氏锥虫、刚果锥虫、马背锥虫和间日锥虫。症状因宿主和感染物种以及感染阶段而异，可使用数十年前的少量锥虫杀虫剂进行治疗。一个复杂的问题是，并非所有锥虫物种对所有药物都同样敏感，而原因至多只是部分了解。在这里，我们研究药物转运蛋白（主要在布氏锥虫中发现）是否决定了不同的药物敏感性。我们报告称，氨基嘌呤转运蛋白 TbAT1 和水通道蛋白 TbAQP2 的同源物在刚果锥虫中不存在，而它们的引入使该物种对二脒（喷他脒、二脒氮）和三聚氰胺苯（美拉索明）类药物非常敏感。这些药物在转基因株系中的积累速度要快得多。刚果锥虫对苏拉明的敏感性本质上也低于布氏锥虫，尽管它对苏拉明的积累速度更快。在刚果锥虫中表达位于布氏锥虫溶酶体中的一种拟议的苏拉明转运蛋白并没有改变其对苏拉明的敏感性。我们得出结论，对于几类最重要的锥虫药而言，特定转运蛋白的存在，而不是药物靶标，才是药物疗效的决定性因素。
酪蛋白酶水解物（锥虫），类型I预期用途
酪蛋白酶水解剂（锥虫），I型使用锥虫类型I类型I用于制备各种培养基，例如无菌测试培养基，诊断媒体和培养基以进行生化特征。摘要和原理胰酮是通过酪蛋白的酶水解获得的。酪蛋白是主要的牛奶蛋白，也是氨基氮的丰富来源。胰酮I型用于支持挑剔的微生物的生长，也适用于发酵研究。存储和稳定存储在紧密闭合的容器中脱水的介质脱水。避免冷冻和过热。在标签上到期日之前使用。打开后，保持粉末状培养基闭合以避免补水。注意：可应要求提供TSE/BSE证书。指示指的是要制备的介质公式中的最终浓度。质量控制测试规格外观浅黄色 /淡黄色棕色粉末。完全溶于水中的溶解度。颜色和清晰度为1％w/v浅黄色，透明溶液。在高压灭菌的15 psi / 15分钟pH值6.12 - 7.02的灰分含量不超过12％的灰分损失（水分含量）不超过5％α-氨基氮含量不超过12％没有金黄色葡萄球菌没有文化反应：细菌在30°C-35°C下孵育18-24小时后观察到的文化特征，在20°C-25°C生物体（ATCC）生长葡萄球菌（6538）良好的ESCHERICHIA（6538）良好的葡萄球菌（873）中真菌的真菌为2-5天。 （9027）良好的链球菌（19615）良好的白色念珠菌（10231）良好的巴西曲霉（16404）好
使用有效的无克隆CRISPR/CAS9系统在锥虫质质量
*通信。M.A.Chiurillo，辛辛那提大学生物科学系，辛辛那提，俄亥俄州45221-006，美国。电话号码：（+1）513-556-9758传真号码：（+1）513-556-5299电子邮件：chiurima@ucmail.uc.uc.uc.uc.uc.uc.edu N. Lander，辛辛那提大学，辛辛那提大学的生物科学系，辛辛那提大学，俄亥俄州俄亥俄州4522221-11-纽约州。电话号码：（+1）513-556-9798传真号码：（+1）513-556-5299电子邮件：landernm@ucmail.uc.uc.uc.edu
基于 CRISPR/Cas9 的非洲锥虫血液中必需基因的精准标记
目的蛋白质经常用融合标签来表达，以方便实验分析。在通常为二倍体的锥虫中，标签编码 DNA 片段通常与一个天然等位基因融合。然而，由于重组细胞在转染后占群体的 0.1% 以下，这些 DNA 片段还包含一个标记盒用于正向选择。因此，天然 mRNA 非翻译区 (UTR) 被替换，可能会扰乱基因表达；在锥虫中，UTR 通常会在广泛和组成性多顺反子转录的背景下影响基因表达。我们试图开发一种标记策略，以保留血流形式非洲锥虫的天然 UTR，在这里我们描述了一种基于 CRISPR/Cas9 的敲入方法来驱动精确和无标记的必需基因标记。使用简单的标签编码扩增子，我们标记了四种蛋白质：组蛋白乙酰转移酶，HAT2；组蛋白去乙酰化酶，HDAC3；切割和多聚腺苷酸化特异性因子 CPSF3；以及变体表面糖蛋白排除因子 VEX2。该方法保留了天然 UTR，并产生了表达功能性重组蛋白的克隆菌株，通常两个等位基因都被标记。我们展示了基于免疫荧光的定位和富集蛋白质复合物的实用性；在本例中是 GFP HAT2 或 GFP HDAC3 复合物。这种精确标记方法有助于组装表达必需重组基因的菌株，同时保留其天然 UTR。
基于 CRISPR/Cas9 核糖开关的克氏锥虫基因表达下调方法
在最近引入 CRISPR/Cas9 技术进行基因敲除、基因敲入、基因补充和内源基因标记之前，很少有基因工具可用于研究克氏锥虫。核糖开关是天然存在的自裂解 RNA（核酶），可被配体激活。我们实验室最近的研究结果证明了枯草芽孢杆菌中的 glmS 核酶可用于布氏锥虫的基因沉默，该核酶已被证明可控制响应外源葡萄糖胺的报告基因表达。在这项工作中，我们使用 CRISPR/Cas9 系统用活性（glmS）或非活性（M9）核酶对克氏锥虫糖蛋白 72（TcGP72）和液泡质子焦磷酸酶（TcVP1）进行内源性标记。通过 PCR 确认基因标记，并通过蛋白质印迹分析验证蛋白质下调。通过免疫荧光分析和体外生长定量进行进一步的表型表征。我们的结果表明，该方法成功地抑制了两种基因的表达，而无需培养基中的葡萄糖胺，这表明克氏锥虫在正常生长条件下产生足够水平的内源性葡萄糖胺 6-磷酸来刺激 glmS 核酶活性。该方法可用于敲除克氏锥虫中的必需基因并验证这种寄生虫中的潜在药物靶点。
对种子休眠和发芽中的小麦III类过氧化物酶基因基因锥虫基因的功能分析
怀孕期间的产前超声检查显示出正常的胎儿发育。此外，患者的肾功能正常和血压正常。在妊娠29周时，超声揭示了最深的垂直口袋10厘米的多氢化物。在妊娠33周时，膜和子宫收缩不经常发生过早破裂。然后，进行了紧急的下部CS，并输送了一个重2200克的单个活雌性胎儿。由于呼吸窘迫，该婴儿被送入新生儿重症监护病房（NICU），并接受了补充氧气治疗，最初是通过连续的阳性气道压力（CPAP）持续一天，然后再进行鼻氧。婴儿由专门的肾脏科医生评估，其肾脏和一般检查的结果正常。因此，她出院并跟进，表现出正常的发展里程碑。请求并获得适当的书面知情同意书，并获得了本案报告的个人医学信息。
甲烷摩托杆菌的质量和锥虫杆菌Piscolens共生说明了Transkingdom Symbiosis
摘要：在口服微生物毒素中，甲烷抗素的质量（M. assiliense）的研究次数少于良好的特征和培养的甲烷素甲烷素的Oralis和甲烷抗素的甲烷素化剂。M. assiliense与不同的口服病理相关，并与一种严重的牙周炎中与Synergistetes细菌Permidobacter Piscolens（P. piscolens）共隔离。在这里，报道另外两个坏死性纸浆病例，有机会表征两个共培养的M. assiliense分离株，均为P. piscolens，均为p. piscolens，为非运动，1-2- µ m长，0.6-0.8- µm-m-m宽gram-lam-wide gram-strosity coccobaccilli，它们在420 nmms中自动燃料。两个整个基因组序列具有31.3％的GC含量，无间隙为1,834,388-Base Pair染色体，表现为85.9％的编码率，编码甲酸甲酸盐脱氢酶，促进M. assiliense M. assiliense M. assiliense M. assiliense生长，而无需GG培养基中的氢。这些数据为理解与P. piscolens及其在口腔病理中的作用的共生性，跨性别的关联铺平了道路。
DNA损伤通过锥虫瘤的镶嵌变体表面糖蛋白（VSG）驱动抗原多样化。
图2。DNA双链破裂时，当同源性可用时触发镶嵌VSG形成a）沿Antat1.1转录本鉴定出的独特重组事件的直方图。Cas9 DNA断裂位点由垂直线表示。相对于VSG转录本的5'端的剪切位置为：243、369、694、894、978和1459。截面有色，以指示已确定的供体VSG。r表示与反向链结合的指南。绘制了ANTAT1.1与供体VSG之间的完美同源性的中点。如果镶嵌序列匹配> 1个潜在的供体VSG，则绘制平均重组位置。b）定量由DNA断裂引起的镶嵌重组事件。与从该区域的未经常规读数计数相比，该区域内检测到的250bp或下游中检测到的重组事件的数量被归一化，并具有最小的覆盖范围，以控制测序深度。（n = 2，两个独立的克隆）统计显着性是用带有事后Tukey HSD（** p <0.01）平均值的单向方差分析确定的。c）在ANTAT1.1内断裂后分离出的寄生虫克隆的镶嵌VSG示意图。显示的代表序列。d）在所有分离的镶嵌表达克隆中鉴定出的供体VSG插入长度的直方图。插入长度仅包括新插入的序列，不包括重组位点。e）atat1.1家族的示意图与antat1.1转录本排列。灰色序列与atat1.1的完美匹配。f）在每个重组位点，ANTAT1.1和供体VSG之间共享身份长度的直方图。g）量化Eatro1125和Lister427寄生虫的VSGNOM中VSG类型。lister427 vsgnome具有5个vsgs，可以完全复制，没有任何其他家庭成员。sl = 5'剪接领导者序列，14-mer = 3'序列在所有VSG转录本中保守
一开始就进行全编辑
锥虫原生动物参与一些奇怪的生物化学过程，最奇怪的莫过于 RNA 编辑。在这些生物（例如短膜虫、利什曼原虫和锥虫）的线粒体中，蛋白质编码转录本通过位点特异性删除某些基因组编码的尿苷残基并添加其他非编码的 U 而发生改变（参考文献 1）。该过程重新定制初始初级转录本（“预编辑 RNA”），以使最终产品指定完整的功能性蛋白质。除了对预编辑 RNA 的特定区域进行局部编辑（5'-编辑）之外，锥虫还进行一种引人注目的“泛编辑”，在某些情况下，这种编辑可占信使 RNA 成熟序列的 50% 或更多 1 。在本期第 345 页 2 ，Maslov 等人提出的证据表明，与人们的预期相反，泛编辑是锥虫谱系中的古老特性，而非最近获得的特性。RNA编辑系统的进化（它们如何出现以及为何持续存在）是进化生物学中的一个挑战性问题 3 。迄今为止，U添加/删除编辑仅在线粒体中发现，并且仅存在于动基体目（包括锥虫、博多虫和相关的隐虫）中。然而，其他类型的线粒体 mRNA 编辑也已被记录 4 ，以及线粒体转移 RNA S- 7 和核糖体 RNA 8 的编辑。这些系统的多样性和机制独特性，再加上它们的高度受限发生，强烈表明它们中的大多数（如果不是全部）都是最近在进化中获得的特性 3 。