预期的阿拉伯糖盘用于区分细菌发酵碳水化合物的能力。总结于1949年,Soto使用碳水化合物浸渍的纸盘开发了微型发酵测试。 Sanders等。 随后开发了一种使用试剂浸渍椎间盘鉴定肠杆菌科的筛选方法。 有机体在基础培养基中掺入特定碳水化合物的特定碳水化合物的能力,导致酸和气体的产生,用于表征细菌并有助于分化。 将碳水化合物的主要碳水化合物浸入椎间盘上时,将培养基扩散到培养基中。 微生物发酵时会产生碳水化合物,酸或酸和气体,从而降低培养基的pH值。 介质中的指示器会改变颜色;例如,苯酚红从红色变为橙色,变成黄色。 标本样品光盘不用于测试混合菌群。 应首先将要测试的生物分离为单个菌落。 指示总结于1949年,Soto使用碳水化合物浸渍的纸盘开发了微型发酵测试。Sanders等。随后开发了一种使用试剂浸渍椎间盘鉴定肠杆菌科的筛选方法。有机体在基础培养基中掺入特定碳水化合物的特定碳水化合物的能力,导致酸和气体的产生,用于表征细菌并有助于分化。将碳水化合物的主要碳水化合物浸入椎间盘上时,将培养基扩散到培养基中。微生物发酵时会产生碳水化合物,酸或酸和气体,从而降低培养基的pH值。介质中的指示器会改变颜色;例如,苯酚红从红色变为橙色,变成黄色。标本样品光盘不用于测试混合菌群。应首先将要测试的生物分离为单个菌落。指示
图2。用于这些研究的大肠杆菌生物孢子菌株的一般示意图和初始表征。A.LASR活性的大肠杆菌生物孢子蛋白生物孢子蛋白具有质粒PSC11-L,具有LASR诱导的P LASI启动子,融合到LACZ Reporter和质粒PJN105-L和阿拉伯糖诱导的LASR中。该菌株响应3OC12 -HSL和0.4%阿拉伯糖产生β-半乳糖苷酶。3OC12-HSL诱导是剂量反应,半最大浓度为65 nm。B.大肠杆菌菌株组成型表达LACZ的质粒PVT19与融合到本构APHA-3启动子的LACZ。在存在或不存在3OC12 -HSL的情况下,该菌株会产生β-半乳糖苷酶。结果是两个(a)或三(b)独立实验的平均值,误差线代表标准偏差。
摘要:基因组编辑,特别是使用 CRISPR-Cas9,是操纵基因组(包括大肠杆菌)的有力工具。本研究旨在利用 CRISPR-Cas9 对大肠杆菌中的 lacZ 基因进行遗传工程改造,以评估其在红薯皮(Ipomoea batatas)深层发酵过程中在淀粉酶产生中的作用。在 37ºC、pH 6.2、7.0 和 8.4 条件下培养编辑型和野生型大肠杆菌,并使用硫酸铵纯化所得淀粉酶。使用淀粉作为葡萄糖源筛选淀粉酶的产生,并在不同温度和 pH 水平下进行酶表征。没有向导 RNA (gRNA) 和阿拉伯糖的 CRISPR-Cas9 编辑的大肠杆菌显示蓝色菌落,而有 gRNA、Cas9 但没有阿拉伯糖的 CRISPR-Cas9 编辑的大肠杆菌没有菌落。用 Cas9 和阿拉伯糖但不加 gRNA 编辑的大肠杆菌也产生了蓝色菌落。当暴露于 Cas9、gRNA 和阿拉伯糖时,菌落表现出白色表型。凝胶电泳显示,暴露于 Cas9 和阿拉伯糖的大肠杆菌在 650 bp 处有两条带,而暴露于不含 gRNA 和阿拉伯糖的 Cas9 的蓝色菌落则在 1,100 bp 处显示条带。阳性对照显示三条不同的条带,而阴性对照没有。淀粉酶筛选显示野生型大肠杆菌和 CRISPR 编辑的大肠杆菌有相似的透明区。在发酵 15 天期间,pH 8.4 为野生型大肠杆菌的生长提供了最有利条件,pH 7.0 为 CRISPR 编辑的大肠杆菌的生长提供了最有利条件。温度和 pH 值测定表明,野生型和 CRISPR 编辑的大肠杆菌在 45ºC 和 pH 7 下均表现出相似的最大淀粉酶活性,酶产量没有显着差异。这些结果表明 lacZ 基因对大肠杆菌中的淀粉酶产生没有显着影响。 DOI:https://dx.doi.org/10.4314/jasem.v28i10.5 许可证:CC-BY-4.0 开放获取政策:JASEM 发表的所有文章均为开放获取文章,任何人都可以免费下载、复制、重新分发、转发、翻译和阅读。版权政策:© 2024。作者保留版权并授予 JASEM 首次出版权。本文的任何部分均可未经许可重复使用,但必须引用原始文章。引用本文为:MINARI, J. B; NWOSU, GE; DADA, I. S; ABDULAZEEZ, DO (2024)。使用马铃薯皮(Ipomea batata)作为酶源,分离和表征由 CRISPR-Cas 9 编辑的 LacZ 基因和未编辑的大肠杆菌产生的淀粉酶。应用科学与环境管理杂志 28 (10) 2981-2989 日期:收到日期:2024 年 7 月 7 日;修订日期:2024 年 8 月 15 日;接受日期:2024 年 8 月 19 日出版日期:2024 年 10 月 5 日关键词:CRISPR Cas9 基因编辑、lacZ 基因、大肠杆菌、马铃薯皮发酵、淀粉酶理想的代谢催化剂是酶,它通过明确定义的途径提供各种内源性生化反应。(Singh 等人,2019 年)。由于酶存在于所有自然界物种中,包括植物、动物、和微观微生物,它们可用于工业用途。此外,在受控情况下,各种微生物酶被识别
生产菌株的遗传稳定性和代谢稳健性是通过工业规模微生物发酵生产生物基产品的关键标准之一。本文在一种工业乙醇生产菌株酿酒酵母中探索了这些标准,该菌株能够通过染色体整合几个关键基因拷贝来共同发酵 D-木糖和 L-阿拉伯糖与葡萄糖,从而利用这些戊糖 (C5) 糖。在模拟工业环境中长期发酵的受控生物反应器中使用批量顺序培养,发现该菌株早在第 50 代及以后就表现出 D-木糖和 L-阿拉伯糖消耗的显著波动。这些波动似乎与在整个连续批量培养中出现的频率低于 1.5% 的少数低消耗 C5 糖克隆无关,这是由于编码 C5 糖同化酶的转基因拷贝数减少造成的。此外,富含低或高 RAD52 表达的亚群(其表达水平据报道与同源重组率成正比)未表现出 C5 糖同化缺陷,这表明其他机制可能是造成转基因拷贝数变异的原因。总体而言,这项研究强调了工业酵母中存在遗传和代谢不稳定性,尽管在我们的条件下这种不稳定性并不大,但在更恶劣的工业条件下可能会更加有害,从而导致生产性能下降。
基因组编辑 CRISPR/Cas9 技术已导致人工转录抑制因子(也称为 CRISPR 干扰 (CRISPRi))的开发。由 crRNA 引导的失活 Cas9 (dCas9) 蛋白可以特异性地结合靶 DNA 序列,包括启动子和操纵子,而不会切割 DNA。原型间隔区相邻基序 (PAM) 序列依赖性在靶向特异性 CRISPRi 的设计中可能是不利的,因为 PAM 序列对于 CRISPR/Cas9 系统的 DNA 切割至关重要。我们在 L-阿拉伯糖诱导的 P BAD 启动子的控制下,在大肠杆菌中构建了一个染色体整合的 dCas9 系统 (1 araBAD : dcas9)。将携带各种 crRNA 的质粒转化到表达 dCas9 的大肠杆菌中,这些 crRNA 具有针对 gal 启动子(-10 区域)和 gal 操纵子中的 galETK 结构基因的靶序列。在有或没有无偿 L-阿拉伯糖的情况下监测细胞生长和/或半乳糖代谢率。靶向转录延长会部分减缓 D-半乳糖消耗和细胞生长,但靶向转录起始会完全抑制 D-半乳糖消耗和细胞生长。此外,RT-qPCR 分析表明,具有几种修饰 PAM 序列的 CRISPRi 可以抑制靶 DNA 的转录。这些结果表明,可以通过使用 CRISPRi 靶向结构基因或调控区域来控制细胞代谢率和细胞生长;此外,松散的 PAM 序列依赖性可以扩展 CRISPRi 的 DNA 靶标。
|2024 年 8 月 - 至今| 使用果蝇幼虫脑,我们打算研究 AP1 因子(JNK 通路下游调节因子)在神经胶质瘤进展中的作用。我们还打算研究这些 AP1 因子是否以及如何在巨噬细胞的肿瘤浸润中发挥作用。• 使用 StrandNGS 对丙酮丁醇梭菌 ATCC 824 进行转录组分析 - RNA-Seq 分析 2020 年 6 月 RNA-Seq 分析以找出丙酮丁醇梭菌 ATCC 824 中阿拉伯糖诱导的戊糖层次背后的现象。整个分析都是使用内部工具 StrandNGS 进行的。• 小肽作为阿尔茨海默氏症的治疗方法 - 蛋白质工程 2021 年 6 月
通过短肽桥与Murnac残基交叉连接的N-乙酰葡萄糖和N-乙酰基氨基酸(MURNAC)的多个单位网络。真菌CWS(FCW)由几层原纤维组成。组成因物种而异,但是它们主要组成(1→3)/(1→6) - 𝛽 -glucan,(1→3) - 𝛼 -glucan,几丁质和糖蛋白。它由80-90%的糖蛋白,脂质和其他次要成分组成。酵母CWS由(1→3)/(1→6)-Glucan,甘露蛋白和几丁质组成。红色藻类含有带有亚硫酸盐残基的星系杂聚物以及甲基化的糖,甘露糖,阿拉伯糖和核糖等次要成分。但是,基本的构建块是醛酸3- o-(α-d-
纤维素有多种形式,其中很大一部分来自生活垃圾和工业垃圾 [28]。半纤维素可能是各种聚合单糖的混合物,如醛己糖、甘露糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、4-O-甲基葡萄糖醛酸和半乳糖醛酸残基 [39]。在硬木木聚糖中,主链由通过 β -(1,4)-糖苷键偶联并通过 α -(1,2)-糖苷键与 4-O-甲基葡萄糖醛酸基团分支的木糖单元组成 [38]。木质素是由苯丙烷类前体合成的芳香族化合物。聚合物的基本化学苯丙烷单元(主要是紫丁香基、愈创木基和对羟基苯酚)通过一组键连接在一起,形成基质。该基质含有多种有用的基团,如甲氧基和羰基,它们赋予聚合物有机化合物高极性[40]。
图3。用大肠杆菌LASR和构成记者的甲醛活性。a。灰色线,甲醛依赖性生长抑制,占无甲醛的细胞的百分比。在大肠杆菌中与100 nm 3OC12-HSL的甲醛的剂量反应曲线在大肠杆菌培养物中具有阿拉伯糖诱导的LASR和LASR依赖性Lasi-Lacz Reporter(Black Line)或E. coli,或具有组成型APHA-3-LACZ RACZ REPORTER(RED RED REDERTER)。IC50值在表1中给出。结果显示,五个(LASR)或三个(LACZ控制)独立实验的平均值,误差线代表标准偏差。B.来自A的平均值(降低%降低%与Lasi-Lacz报告基因的抑制%),这些值用于确定Pearson的相关系数(R值)和显着性(P),并使用简单的线性回归模型生成拟合线。
摘要Öz在这项研究中,细菌纤维素(BC)是从komagataeibacter xylinus s4获得的,并详细表征。确定了卑诗省生产的各种碳源和培养基,不同的pH条件,不同的pH条件,孵育温度,表面积/体积比和孵育持续时间。考虑到碳的类型,从高到低的BC生产量被实现为蔗糖,果糖,甘露醇,木糖,阿拉伯糖和乳糖。通过组合M1A05P5肉汤,30°C,1.06 cm -1表面积/体积比,pH 3.5和21天,可以实现最高的BC量(1.303 g/L)。根据扫描电子显微镜(SEM)分析,纤维素原纤维直径为pH 3.5时为34.87-45.97 nm,在M1A05P5中的pH 6.5时为29.71-102.3 nm。此外,TGA分析也表明,在去除50°C和150°C之间的水步骤中,BC的重量损失,以及在215°C和228°C之间初始化的降解步骤。最后,在27-137°C的温度尺度上确定BC样品的电导率值。观察到电导率取决于温度,并且随着温度的增加,电导率成倍增加。总而言之,K。xylinus S4的纤维素通常显示出半导体的行为。