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为 Linden Renewable Energy, LLC 准备
项目将接收由第三方在场外卫星拆包设施中加工的转移有机废物或有机基质，但直接运送到项目的 FOG 或 DAF 除外。项目将仅接受与 Linden Renewable Energy, LLC 签订合同的第三方拆包设施加工的有机基质。所有此类拆包设施均应获得完全许可，并拥有开展业务所需的必要 NJDEP 许可/批准。如果任何拆包设施位于 Union 县，它们将遵守该县的固体废物管理计划。拆包过程会去除消费者包装并产生 AD 可行的泥浆原料。然后，第三方使用容量为 6,000 加仑的油罐车将该有机基质泥浆原料运送到项目现场，并最终通过驳船运送。尽管在离开拆包设施之前已经过测试，但到达项目后，如果一卡车或一驳船的有机基质浆液因任何原因被拒收，则应根据联合县的固体废物管理计划处理该浆液。项目将接收有机基质浆液原料，并利用厌氧消化产生可再生天然气、液体消化物和可销售的土壤改良剂（即脱水固体）。液体消化物随后将在现场加工以生产液体有机肥料。项目将产生三种形式的固体废物。第一种是行政大楼和其他建筑物和围墙内操作人员产生的典型城市固体废物，第二种是项目除砂作业捕获的砂砾。该操作旨在去除任何不可消化的材料，这些材料主要由小颗粒大小的沙子和砂砾组成。这样做是为了限制沙子/砂砾材料对所有泵送和管道系统的影响，并保持生物反应器容量的完整性。总体积小于每天 1 立方码。第三是废活性炭和金属氧化物介质。活性炭主要用于我们的气味控制单元和沼气升级系统 (BUS) 单元。BUS 单元需要活性炭来控制原料沼气中的少量 H2S。少量金属氧化物介质用作尾气抛光剂，可将 H2S 去除至 1 PPM，活性炭用于径向碳吸附器，以控制围墙/建筑物和工艺罐顶部空间中的气味。活性炭/金属氧化物介质将以每年 45-65 吨的速度更换。所有这些材料都是无害的，没有特殊处理要求，应按照联盟的规定进行处置
土壤生物学和生物化学 - NERC开放研究档案
硝化化是全局n周期研究最少的过程，这主要是由于区分n 2对高大气n 2背景所需的少量土壤通量所需的敏感性。我们旨在通过优化使用15 n - no 3示踪剂的数量和使用人工大气（包含5％n 2，20％O 2，75％o 2，75％He和0.11 ppm n n n 2 o），以提高15 n气通量方法的敏感性，以测量原位反硝化速率。我们首先进行了剂量反应实验室研究，以评估添加硝酸盐示踪剂的刺激效应。随后，我们开发了两种新颖的方法来测量原位反硝化速率，使用改良的静态腔室或塑料衬里内部完整的土壤核心。在这两种情况下，整个顶部空间都被孵化前的人造气氛所取代。此外，我们比较了15 N气通量方法的两种计算模型（“ Mulvaney＆Boast”和“ Arah”模型）以及基于N 2或N 2 O ISO TOPOLOGUE分布数据的土壤硝化池的15 N富集。结果表明，在我们的情况下，将环境硝酸盐的量增加一倍并不会导致对非硝化活性的显着刺激。但是，过度修改了硝酸盐（例如环境水平的20倍）通过刺激一氧化二氮的发射来增加反硝化产物比。在高分辨率仪器下，我们的N 2检测极限为160 ppb，比原始方法好5倍。我们的两种新型现场技术成功地测量了原位硝化率，但是，由于较高的N 2通量检测率（最高90％），较高的吞吐量（一次核心最多24个核心）和改善空间分辨率，因此优选衬里方法。Mulvaney＆Boast模型的性能优于Arah One，并始终产生更高的通量（最大值为17％），尤其是对于低15 n n富集的土壤硝化池和短时间孵育时间。用n 2或n 2 o数据计算出的15 n含量在统计上有所不同，但差异幅度很小（最大值为4.6％）。测量原位否定的三化必须量化现实的通量，此处介绍的衬里方法是廉价，可重复和高分辨率的候选者。为了提高灵敏度，我们建议使用Mulvaney＆Boast进行N 2 O排放的方法，并将结果与29 N 2数据（仅）结合使用15 n N富集来确定N 2排放。
在轨道上生产病毒：轨道震荡病毒疫苗制造的最新进展
关键词：轨道式振荡生物反应器 (OSB)、禽类 AGE1.CR.pIX 悬浮细胞、流感病毒、动物疱疹病毒、腺相关病毒 (AAV)、人胚胎肾 (HEK) 293 细胞、一次性灌注至高细胞密度、制造。悬浮细胞的预培养在摇瓶中成功完成。特别是新开发的设计细胞在高摇动频率下在摇瓶中传代多达 100 次，然后完美适应在具有 pH 控制和最大氧气供应（通常高于 80% pO 2 ）的 CO 2 培养箱中生长。当它们随后被转移到搅拌槽生物反应器进行扩大时，特定细胞生长率通常较低，并且细胞对通过酸/碱添加和由于潜水器放气（气泡）而产生的剪切应力的 pH 控制变得敏感。禽类 AGE1.CR.pIX 和人类 HEK 293 细胞也出现了这种情况。为了避免这些问题，评估了在振荡模式下的扩大规模。这里我们介绍了 SB10-X OSB 生物反应器在袋子设计和控制单元改进方面的最新进展。引入了一种新的控制策略，从而可以更快、更精确地控制 pH 和 DO。此外，还优化了灌注袋，以便可以轻松连接一个或两个 TFF ATF 系统。这两项发展都带来了更强大的 SB10-X 系统，可以轻松执行批量、补料分批或灌注运行。在 10 L 一次性标准袋中，在化学定义的培养基 CD-U3（Biochrom-Merck，德国）中以 70 rpm 的摇动频率培养 Avian AGE1.CR.pIX 细胞（ProBioGen AG，德国）。对于灌注，使用了交替切向流系统（ATF2，Repligen，500 kDa 截止值）。感染流感病毒 A/PR/8/34 (H1N1) 后，MOI 为 0.001，工作体积从 5 升增加到 9 升，同时保持灌注。使用不同的填充体积评估 25 和 50 x 10 6 细胞/毫升的细胞浓度，以了解顶部空间通气的影响。总体而言，可以获得 3500 个病毒体/细胞的非常高的细胞特异性病毒产量，导致 HA 滴度高达 3.7 log 10（HA 单位/100 µL），感染滴度高达 8.8 x 10 9 TCID 50 /毫升。基于重组 AAV 的载体不仅是基因治疗目的的合适载体，而且还能够诱导针对各种抗原的强烈、主要是细胞的免疫反应。到目前为止，AAV 生产主要使用瞬时转染的贴壁人类 HEK 293 细胞（例如在细胞堆栈中），这对大规模 AAV 生产来说是一个重大挑战。在这里，我们测试了内部适应悬浮生长的 HEK 293 细胞，以通过一种允许简单扩大规模的过程生产 AAV9 的能力。因此，HEK 293 悬浮细胞在 5 L 化学定义的无血清培养基中培养，细胞密度为 1 x 10 6 个细胞/毫升，使用 SB10-X OSB 生物反应器，摇动频率为 65 rpm。24 小时后以 70 rpm 的振荡频率进行聚乙烯亚胺 (PEI) 介导的三重转染（包括 GFP 报告基因）。最后，转染后 48 小时，收获细胞和上清液进行 AAV 分离，并测定裂解物中 DNase I 抗性载体颗粒 (DRP) 的数量。由于转染效率高（基于 GFP 报告基因的转染率 >90%）且 SB10-X 系统中整个批处理过程性能良好，因此达到了 1.4 x 10 12 DRP/ml 或 7 x 10 15 DRP/批（5 L）范围内的制造相关 AAV 滴度。总之，在轨道上生产病毒可能是创新疫苗制造的一种有吸引力的替代方案。