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iPSC 衍生巨噬细胞中的 CRISPR 敲除：优化的工作流程、优势和研究应用
人类 iPSC 衍生的巨噬细胞为研究先天免疫、炎症和疾病生物学提供了可扩展的模型。本文解释了优化的 CRISPR-Cas9 敲除工作流程如何改进这些特殊免疫细胞的功能基因组学研究。iPSC 衍生巨噬细胞中的 CRISPR 敲除后：优化的工作流程、优势和研究应用首先出现在《科学笔记》上。
来源:科学笔记人类巨噬细胞是先天免疫、炎症、组织修复、感染反应、癌症生物学和神经退行性疾病的核心参与者。由于巨噬细胞对环境信号做出快速反应并帮助协调免疫活动，因此通常用于研究涉及慢性炎症、病原体感知、免疫调节和细胞应激的疾病机制。
然而，巨噬细胞研究面临着持续的挑战：获得足够一致、实验上易于处理的人类巨噬细胞以进行大规模功能研究。源自血液单核细胞的原代巨噬细胞是有用的，但它们在供体和制剂之间可能有很大差异。这种变异性会使再现性变得复杂，特别是在混合遗传筛选或高通量功能基因组学实验中。
人类诱导多能干细胞衍生的巨噬细胞，通常缩写为 iPSC 衍生的巨噬细胞，提供了一种强大的替代方案。它们可以从多能干细胞系统中产生，通过受控的分化工作流程进行扩展，并以更标准化的方式用于模拟巨噬细胞生物学。当与 CRISPR-Cas9 基因敲除技术相结合时，这些细胞成为识别调节炎症、先天免疫激活、宿主-病原体相互作用和疾病相关巨噬细胞表型的基因的宝贵平台。
Navarro-Guerrero 及其同事在 2024 年 STAR Protocols 发表的一篇文章描述了一种使用 VPX 病毒样颗粒支持的慢病毒递送在人类 iPSC 衍生巨噬细胞中进行 CRISPR-Cas9 敲除的优化方法。该协议重点关注通常限制巨噬细胞样细胞中 CRISPR 筛选的实际问题，包括慢病毒转导效率、抗生素选择、文库滴定和细胞活力。