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An enzymatic method has been successfully es- tablished enabling the generation of partially base- modified RNA (previously named RZA) constructs, in which all G residues were replaced by isomorphic fluorescent thienoguanosine ( th G) analogs, as well as fully modified RZA featuring th G, 5-bromocytosine, 7- deazaadenine and 5-氯酸。被发现的Extigive RZA的转录效率从使用各种T7 RNA聚合酶变体中受益。此外,可以通过TAQ DNA聚合酶以及其他三个基型型核苷酸将D Th G掺入PCR产物中。值得注意的是,在体外CRISPR- CAS9裂解测定中,获得的RNA产物以及与5-溴细胞的RNA产物一起与天然SGRNA一样有效地发挥作用。n 1-甲基丙啶也被证明是尿苷的忠实非典型的肠道构造,当掺入SGRNA时,可以指导Cas9核酸酶切割。7-二氮嘌呤的CAS9失活表明,在SGRNA和PAM位点,嘌呤的7-氮原子的重要性对于实现了有效的Cas9裂解。与SGRNA-蛋白质和PAM的显着性讨论了这项研究的其他方面 - 蛋白相互作用,这些相互作用并未由Cas9 – Sgrna -DNA复杂晶体结构突出显示。这些发现 -

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