基因克隆是指分离目标 DNA 序列以复制多个副本的过程。目标基因被分离(通过 PCR),然后插入质粒载体(通过消化和连接)。质粒载体能够在宿主细胞内自主复制,确保序列被克隆。重组载体可用于创建转基因生物 (GMO),进而可用于生产大量治疗性蛋白质(生物制药)。基因克隆的过程涉及多个步骤:•用聚合酶链式反应(PCR)分离和扩增目的基因(和质粒载体)•如果要将基因整合到细菌细胞中,则需要 cDNA 拷贝(逆转录)•用相同的特异性限制性酶(平端或粘端)消化基因和质粒载体•通过将目的基因连接到质粒载体(使用 DNA 连接酶)来创建重组质粒•通过凝胶电泳将重组质粒与正常质粒(没有目的基因)分离•通过载体递送方法(例如电穿孔)将重组质粒引入靶细胞•在抗生素培养基中培养细胞以选择修饰细胞(只有带有质粒的细胞才具有抗生素抗性)