机构名称：
¥ 2.0
nzyeasy克隆和表达系统旨在将任何PCR生成的片段定向克隆到由Nzyeasy酶混合物介导的单个连接酶独立的反应中，将任何PCR生成的片段定向到线性化的PHTP载体中。向量 - 互补的悬垂物，其中包含由Nzyeasy酶识别的特定序列，通过使用具有适当5'扩展的引物，将其掺入PCR产物中。在存在Nzyeasy酶的情况下与线性化的PHTP载体生成的插入物相结合时，两个DNA分子将通过单链区域的碱基对互补而退火。反应发生在单管沿三个温度依赖的步骤持续80分钟。含有感兴趣片段的圆形重组载体。该系统允许达到高克隆效率（80-100％），并且不需要使用DNA连接酶。此外，没有进一步的治疗（例如限制消化，磷酸化或钝性抛光剂）是需要插入物的。该系统还允许将先前克隆在其他质粒载体中的基因转移到PHTP载体中，只要两个向量具有不同的可选标记，并且要转移的基因侧翼是适当的克隆区域（请参阅第12页）。PCR生成的片段可以克隆到PHTP0克隆载体中（并入到Nzyeasy克隆套件中，CAT。编号MB281），它是一种标准的PUC衍生物，具有赋予大肠杆菌抗氨苄西林的基因。另外，插入物可以直接克隆到耐卡纳米霉素的PHTP表达向量之一中，而无需经过繁琐而费力的中间阶段。PHTP表达载体设计为实现大肠杆菌中高水平的重组基因表达。
nzyeasy克隆表达系统_userguide_v1902
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