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高通量应用的靶向基因整合
一种使用两种重组酶的新方法让科学家能够以前所未有的速度将更大的 DNA 有效载荷插入人类多能干细胞中。
来源:The Scientist近几十年来，靶向基因组编辑取得了长足进步，尤其是得益于基于核酸内切酶的基因编辑系统（如 CRISPR-Cas9）的出现。然而，靶向插入更大的有效载荷仍然存在问题，这限制了研究人员在能力和吞吐量方面的工作。莱顿大学医学中心 (LUMC) 干细胞研究员、诺和诺德基金会干细胞医学中心 (reNEW) 副研究员 Richard Davis 认为，一种名为丝氨酸和酪氨酸重组酶辅助基因整合高通量研究 (STRAIGHT-IN) 的新策略可以为科学家提供一种强大的新研究和临床应用工具。1
T Richard Davis 新策略 1精准基因组编辑依赖于同源定向修复 (HDR) 将供体 DNA 整合到目标区域。2 然而，随着插入片段大小的增加，HDR 靶向效率会显著降低，因此插入多千碱基的有效载荷仍然很困难。3 位点特异性重组可以解决这个问题，Davis 和他的 LUMC 团队利用两种主要位点特异性重组酶 (SSR) 类的优势构建了 STRAIGHT-IN。 “丝氨酸重组酶可以快速引入构建体，但整个载体（骨架、质粒、一切）都会整合，”戴维斯说。“我们从经验中知道，如果保留这些[不必要的]序列，那么将来就会出现沉默，从而阻止表达。因此，我们使用酪氨酸重组酶切除最终细胞系中不需要的这些辅助序列。”
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已发布 Cell Reports Methods 1 David Largaespada继续阅读下文...
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