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World File Search System亲和层析
工程小金属结合蛋白标签可提高大肠杆菌周质中重组人类生长激素的产量
融合蛋白在大肠杆菌重组蛋白的生产中起着重要作用。它们主要用于细胞质表达，因为它们可以设计为增加目标蛋白的溶解度，然后可以通过亲和层析轻松纯化。相反，融合蛋白通常不包含在用于周质生产的构建体设计中。相反，插入信号序列以将蛋白质转运到周质中，并添加 C 端 his-tag 以进行后续纯化。我们的研究小组提出从欧洲亚硝化单胞菌周质中分离的小金属结合蛋白 (SmbP) 作为一种新的融合蛋白，用于在大肠杆菌的细胞质或周质中表达重组蛋白。SmbP 还允许通过使用 Ni(II) 离子的固定化金属亲和层析进行纯化。最近，我们通过将 SmbP 标记蛋白的天然信号肽与取自果胶酸裂解酶 B (PelB) 的信号肽进行交换，优化了 SmbP 标记蛋白的周质生产，从而大幅增加了蛋白产量。在这项工作中，我们表达并纯化了 PelB-SmbP 标记的可溶性生物活性人类生长激素 (hGH)，并获得了迄今为止报道的该蛋白的最高周质产量。在 Nb2-11 细胞上测试的其活性相当于 50 ng mL 1 的商业生长激素。因此，我们强烈建议使用 PelB-SmbP 作为蛋白标签，用于大肠杆菌周质中 hGH 或其他可能的目标蛋白的表达和纯化。
神经科学研究技术指南
信号转导和细胞内信号转导简介 298 研究蛋白质的基本工具 300 抗体的制备和使用 300 纯化蛋白质 302 免疫沉淀 (IP) 304 研究蛋白质表达 30 蛋白质印迹 (WB) 306 酶联免疫吸附试验 (ELISA) 308 放射免疫测定 (RIA) 310 免疫组织化学 (IHC) 312 免疫电子显微镜 (IEM) 312 报告蛋白 312 研究蛋白质 - 蛋白质相互作用 313 免疫共沉淀 (Co-IP) 313 蛋白质亲和层析 313 酵母双杂交试验 314 研究翻译后修饰 317 PTM 特异性试验 317 PTM 特异性抗体 320 研究蛋白质-DNA 相互作用 321 电泳迁移率分析 (EMSA) 323 染色质免疫沉淀 (ChIP) 325 荧光素酶分析 327 结论 328 推荐阅读和参考文献 328
Pfu DNA 聚合酶综合综述
Pfu DNA 聚合酶是一种源自超嗜热古菌 Pyrococcus furiosus 的耐热酶，因其高保真度和强大的加工性而广受认可。它的 3'-5' 核酸外切酶活性使其成为正确扩增短链和复杂 DNA 链不可或缺的酶。Pfu DNA 聚合酶的这些生化特性促进了其提取和生产方法的重大进步。本综述涵盖了一些传统的纯化方法，包括蛋白质纯化和亲和层析，以及重组基因表达、自动化生产系统和基于膜的技术的最新进展。最近开发了新的酶工程方法，例如 CRISPR-Cas9 介导的基因优化，这提高了提取效率的标准以满足新兴需求。曾经具有挑战性的 Pfu DNA 聚合酶生产已通过在实验室和商业规模的大肠杆菌中重组表达得到了显着简化。涉及 IPTG 浓度和响应面方法的优化技术已将产量提高了 30%。自诱导意味着可以实现更高的生物量输出。如今，Pfu DNA 聚合酶的应用范围从标准 PCR 到分子生物学、法医分析、临床微生物学和生物技术领域的高级临床诊断。
RHAMM 靶肽作为分子成像探针对表达 RHAMM 的癌细胞进行成像
摘要 ：全球癌症发病率呈逐年上升趋势，开发新的癌症早期诊断方法势在必行。本研究致力于研究RHAMM靶肽在癌症分子诊断中的应用潜力。采用丙氨酸扫描法鉴定RHAMM靶肽的关键氨基酸，采用竞争性HA取代法，ELISA法评价肽与RHAMM-CT结合的特异性。通过基因工程方法获得RHAMM-CT，并用亲和层析法分离RHAMM-CT。用共聚焦显微镜评价RHAMM靶肽与肿瘤细胞表面受体的相互作用。结果表明，肽组成中的EEGEEZ片段是与RHAMM-CT结合所必需的。结果表明，RHAMM靶肽能特异性地与RHAMM-CT结合，并竞争性取代RHAMM上的HA。研究发现，聚集蛋白聚糖无法取代RHAMM-CT上HA结合位点的肽。研究结果表明，FITC肽能特异性地与前列腺癌细胞表面的RHAMM结合，因此，RHAMM靶向肽具有用于癌症早期分子诊断的潜力。
DNA 聚合酶μ兔多克隆抗体
产品名称 DNA Pol μ 兔多克隆抗体 宿主物种 兔 应用 WB;ELISA 物种交叉反应 人;大鼠;小鼠； 建议稀释度 Western Blot：1/500 - 1/2000。ELISA：1/40000。尚未在其他应用中测试。 免疫原 来自 DNA Pol μ 的合成肽。AA 范围：210-290 特异性 DNA Pol μ 多克隆抗体检测内源水平的 DNA Pol μ 蛋白。 制剂 含有 50% 甘油、0.5% BSA 和 0.02% 叠氮化钠的 PBS 液体。 储藏 储存于 -20°C。避免反复冻融循环。 蛋白质名称 DNA 指导的 DNA/RNA 聚合酶 mu 基因名称 POLM 细胞定位 细胞核。 纯化 使用表位特异性免疫原，通过亲和层析法从兔抗血清中亲和纯化抗体。克隆性 多克隆 浓度 1 mg/ml 观察到的条带 54kD 人类基因 ID 27434 人类 Swiss-Prot 编号 Q9NP87 别名 POLM；polmu；DNA 引导的 DNA/RNA 聚合酶 mu；Pol Mu；末端转移酶 背景催化活性：脱氧核苷三磷酸 + DNA(n) = 二磷酸 + DNA(n+1)。,辅因子：镁。,功能：似乎充当 Ig 变位酶，负责免疫球蛋白 (Ig) 基因超突变。,相似性：属于 DNA 聚合酶 X 型家族。,相似性：包含 1 个 BRCT