直到 2015 年,阐明利什曼原虫蛋白质功能的功能丧失研究都依赖于通过同源重组进行基因破坏。随后,CRISPR/Cas9 革命影响到了这些原生动物寄生虫,只需一轮转染即可实现有效的基因组编辑。此外,LeishGEdit 的开发(一种基于 PCR 的工具包,用于使用 CRISPR/Cas9 生成敲除和标记系)使基因组编辑更加直接有效。在此系统中,质粒 pTB007 被递送至利什曼原虫,在 b-微管蛋白基因座中进行游离表达或整合,并稳定表达 T7 RNA 聚合酶和 Cas9。在南美洲,尤其是在巴西,利什曼原虫 (Viannia) braziliensis 是皮肤利什曼病最常见的病原体。与利什曼原虫相比,L. braziliensis b-微管蛋白基因座表现出显著的序列差异,这阻碍了 pTB007 的有效整合和 Cas9 的稳定表达。为了克服这一限制,pTB007 中存在的 L. major b-微管蛋白序列被利什曼原虫 (Viannia) b-微管蛋白保守序列取代,从而产生了 pTB007_Viannia 质粒。这一修改使 pTB007_Viannia 盒式磁带成功整合到 L. braziliensis M2903 基因组中,并且计算机预测表明这也可以在其他 Viannia 物种中实现。通过敲除鞭毛蛋白 PF16 来评估 Cas9 的活性,这导致这些转染子中出现不动表型。内源性PF16也成功被mNeonGreen标记,并采用基因座互补策略将PF16基因的C端标记拷贝返回到原始基因座,从而恢复游泳能力。