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DNA连接酶4抑制使前列腺癌敏感到体内免疫检查点阻滞
抽象背景/目标：前列腺癌是男性常见的恶性肿瘤。DNA连接酶IV（LIG4）表达与前列腺癌患者的预后不良相关。Lig4连接DNA双链断裂，是这些遗传病变的必不可少的或修复。前列腺癌尚未表现出对抗PD − 1免疫疗法的临床显着反应。前列腺癌表达较低的PD − L1水平，并表现出有限的细胞毒性T淋巴细胞浸润。为了确定lig4对前列腺肿瘤发生的抑制作用，我们创建了一种在体内模型中进行的新基因设计。材料和方法：LIG4+/+; TAG和LIG4 +/-; TAG前列腺和肿瘤进行了组织病理学。用抗PD1抗体或免疫前IgG治疗前列腺肿瘤的单独组。Lig4和Pd -L1表达。通过免疫组织化学和免疫荧光显微镜确定DNA损伤修复蛋白，细胞衰老和细胞死亡标记的表达。通过SCA1/CD49 F流式细胞仪和肿瘤培养物分析了前列腺癌干细胞F疗法。pd- L1蛋白表达通过蛋白质印迹确定。结果：LIG4抑制作用诱导前列腺和癌症中的DNA双链断裂和细胞衰老，并显着降低了前列腺内上皮内肿瘤和肿瘤发生。Lig4抑制作用降低了干细胞培养物中的前列腺癌干细胞F racte and Proli fration。前列腺癌对Lig4抑制作用抗性抗肿瘤免疫反应，这是由于PD − L1表达增加而导致的。PD − 1抗体治疗。结论：抑制Lig4敏化前列腺癌对免疫检查点抑制。关键字：DNA损伤，衰老，编程的死亡受体1，凋亡，癌症干细胞。
试用观察：肿瘤内免疫疗法
由癌症联盟标记的团队，Inserm U1138，Cordeliers研究中心，索邦大学，巴黎，巴黎，巴黎，巴黎大学； B代谢组学和细胞生物学平台，法国Vilejuif的Gustave Roussy Cance Campus； C蒙特利尔大学免疫与癌症研究所（IRIC），蒙特利尔大学，QC H3C 3J7，加拿大； D蒙特利尔大学医学系蒙特利尔，魁北克H3C 3J7，加拿大；他的医学院，巴黎 - 萨克莱大学，法国克里姆林利·比卡特（KremlinBicêtre）； F美国纽约市威尔·康奈尔医学院辐射肿瘤学系； G Sandra和Edward Meyer癌症中心，美国纽约，美国； H Caryl和Israel Englander精密医学研究所，美国纽约，美国； I耶鲁大学医学院皮肤科系，美国康涅狄格州纽黑文市； JPôleDeBiologie，欧洲医院Georges Pompidou，AP-HP，巴黎，法国； k法国巴黎的哥伦比亚大学； L KAROLINSKA研究所，瑞典斯德哥尔摩Karolinska大学医院妇女与儿童健康系；苏州系统医学研究所，中国医学科学院，苏州，中国
壳聚糖微粒鼻腔内免疫可增强缺乏DNA疫苗的保护作用并诱导针对内脏利什曼病的特定持久免疫力
开发针对利什曼原虫的保护性疫苗取决于抗原配方和诱导特异性免疫和持久免疫反应的佐剂。我们之前证明，鼻腔内接种编码 p36/LACK 利什曼原虫抗原 (LACK-DNA) 的质粒 DNA 的 BALB/c 小鼠在接种疫苗后可产生长达 3 个月的保护性免疫，这与疫苗 mRNA 在外周器官中的全身表达有关。在本研究中，LACK-DNA 疫苗与交联甘油醛 (CMC) 的生物相容性壳聚糖微粒相结合，以增强对晚期利什曼原虫攻击的持久免疫力。与未接种疫苗的对照组相比，接种疫苗后 7 天、3 或 6 个月感染导致寄生虫负荷显著降低。此外，接种 LACK-DNA-壳聚糖疫苗的小鼠在晚期时间点攻击后表现出长期保护作用。所获得的保护与脾细胞对寄生虫抗原的增强反应相关，其特点是增殖和 IFN-g 增加以及 IL-10 产生减少。此外，我们发现 TNF-a 的系统水平降低，这与 LACK-DNA/CMC 疫苗接种感染小鼠中观察到的较好健康状况相一致。总之，我们的数据表明壳聚糖微粒作为递送系统工具来延长 LACK-DNA 疫苗赋予的保护性免疫的可行性，这可以在针对利什曼原虫感染的疫苗制剂中进行探索。
复发/难治性 B 细胞非霍奇金淋巴瘤患者肿瘤内免疫细胞亚群的分子评估及其对 CD20×CD3 双特异性抗体 odronextamab 的潜在耐药机制
摘要 背景 复发/难治性 B 细胞非霍奇金淋巴瘤 (R/R B-NHL) 患者迫切需要有效的治疗方案。Odronextamab 是一种 Fc 沉默的人类 CD20×CD3 双特异性抗体，通过 T 细胞介导的细胞毒性靶向表达 CD20 的细胞，不依赖于 T 细胞/主要组织相容性复合体相互作用。R/R B-NHL 患者的 I 期结果表明，odronextamab 单药治疗可实现深度和持久的缓解，且安全性一般可控 (ELM-1；NCT02290951)。作为同一项研究的生物标志物分析的一部分，我们研究了对 odronextamab 产生耐药性的潜在生物标志物和机制。方法 参加 ELM- 1 的 R/R B-NHL 患者每周接受一次静脉注射 odronextamab，共 4×21 天，之后每 2 周注射一次。在基线、治疗期间和进展时获取患者肿瘤活检样本。通过免疫组织化学、流式细胞术、单细胞 RNA 测序和全基因组测序分析免疫细胞标志物。结果 基线肿瘤活检显示几乎所有患者都有高比例的 B 细胞表达 CD20 靶抗原，而其他 B 细胞表面抗原（CD19、CD22、CD79b）的表达差异较大。弥漫性大 B 细胞淋巴瘤患者对 odronextamab 的反应与基线 CD20 表达的相对水平、细胞来源或高危分子亚型无关。肿瘤程序性细胞死亡配体 1 表达增加与对 odronextamab 的反应可能性增加之间存在潜在联系。类似地，临床反应与基线时 CD8 T 细胞和调节性 T 细胞水平升高之间存在趋势。我们还发现肿瘤内免疫细胞亚群在治疗过程中药效学发生了变化。最后，通过失活基因突变导致 CD20 表达丧失被确定为潜在的
工程的T细胞分泌抗BCMA T细胞Endager控制多发性骨髓瘤并促进体内免疫记忆
Laura Díez-Alonso 1,2,3 †, Aïda Falgas 4.5 †, Javier Arroyo-Rodenas 1,2,3 †, Paola A. Romencín 4, Alba Martínez 4, Marina Gómez-Rosel 1,2,3, Belén Blanco 1,2,3,5, Anaïs Jiménez-Reininoso 1,2,3，Andrea Mayado 6,7,7,8，AlbaPérez-Pons 6,7,8，ÓscarAguilar-Sopeña9,10，ÁngelRamírez-Fernánánánandez1,2,3，1,2,3，Alejandrosegura-segura-ututela 1,2,3，loreena pererea pereio 1,2,3，CarmenDomínguez-Alonso 1,2,3，Laura Rubio-Pérez1,2,3,12，Maria Jara 6,7,8，FrancescSolé4，Oana Hangiu 1,2，Oana Hangiu 1,2，Laura Almagro 9,10 Anguita 16,17, Antonio Valeri 18,19, Almudena García-Ortiz 18,19, Paula Río 5,20,21,22, Manel Juan 5,11,23,24,25, Joaquín Martínez-López 5,18,18 Pedro Roda-Navarro 9,10, Beatriz Martín-Antonio 26, Alberto Orfao 6,7,8，PabloMenéndez4,5,7,27,28，Clara Bueno 4,5,7 *，Luisálvarez-Vallina-vallina 1,2,3,12 *
评论文章当代景观和肿瘤内免疫疗法的未来方向
全身给药的免疫疗法彻底改变了癌症患者的护理。但是，对于许多癌症类型，大多数患者没有表现出客观反应。肿瘤内免疫疗法是一种新兴的策略，旨在提高癌症免疫疗法在各种恶性肿瘤范围内的有效性。通过将免疫激活疗法局部施用到肿瘤本身中，可以断裂肿瘤微环境中的免疫抑制作用。此外，可以安全地给予目标位置的疗法，无法安全地给予全身性递送，以最大程度地提高功效并最大程度地减少毒性。为了使这些疗法有效，必须有效地将其递送到靶肿瘤病变中。在这篇综述中，我们总结了当前的肿瘤内免疫疗法的景观，并突出了影响肿瘤内递送的关键概念，并通过扩展的功效。我们还概述了认可的微创递送设备的广度和深度，这些设备可以被认为以改善肿瘤内疗法的交付。
基于电穿孔的 CRISPR/Cas9 基因工程使幼稚原代小鼠 CD8+ T 细胞保留体内免疫反应性
CRISPR/Cas9 技术彻底改变了原代细胞的基因工程。尽管它在 CD8 + T 细胞生物学研究中的应用势头迅猛，但 CRISPR/Cas9 对 CD8 + T 细胞体内功能的影响程度仍不清楚。在这里，我们优化了基于核转染的 CRISPR/Cas9 基因工程，用于幼稚和体外激活的小鼠原代 CD8 + T 细胞，并测试了它们的体内免疫反应。幼稚 CD8 + T 细胞的核转染保留了它们体内抗病毒免疫反应，其程度与未核转染的细胞没有区别，而体外激活的 CD8 + T 细胞的核转染导致在过继转移后的早期时间点扩增/存活率略有受损，收缩更为明显。值得注意的是，不同的靶蛋白在基因编辑后显示出不同的衰减率。这与完成基因失活所需的相当一段时间形成了鲜明对比。因此，为了实现最佳实验设计，确定靶基因产物丢失的动力学以适应基因编辑后的潜伏期至关重要。总之，基于核转染的 CRISPR/Cas9 基因组编辑可高效、快速地生成突变 CD8 + T 细胞，而不会对其体内功能造成不利限制。
原位缺失揭示了拟南芥中细胞内免疫受体基因及其共表达基因表达的调控成分
图 8 LHY1 和 bHLH28 在 SNC1 表达调控中的作用。（a）来自 DAP-seq 数据库的 SNC1 基因座中两个转录因子 LHY1 和 bHLH28 的结合。这是从浏览器图像中重新绘制的。结合用彩色块表示，高度代表检测到的结合水平。（b）野生型或 bon1 中突变体 bhlh28 和 lhy1 的生长表型。植物在 22°C 下 16 小时/8 小时光照下生长。（c）通过定量实时聚合酶链反应 (qRT-PCR) 测定 bhlh28 和 lhy1 单突变体和双突变体与 bon1 的相对 SNC1 表达。肌动蛋白被用作参考基因，并将表达水平与 Col-0 进行比较。显示的是三次生物学重复的平均值，误差线表示标准差。不同字母表示基因型之间的统计学显著差异（p < 0.05，学生 t 检验）。（d）LHY1-GFP 和 bHLH28-GFP 与 SNC1 启动子区的染色质免疫沉淀 (ChIP)-qPCR 分析。分别在“A”位点和“B”位点（如 a 所示）检测到 LHY1-GFP 和 bHLH28-GFP 的结合。显示了两个独立生物学重复的数据。“N”位点（如 a 所示）是 SNC1 基因体上的一个区域，在 DAP-seq 数据库中未检测到 LHY1 或 bHLH28 的结合信号。“GFP”是用抗 GFP 抗体孵育的样品，“NoAb”是不含抗 GFP 抗体的样品。不同字母表示通过单因素方差分析（ANOVA）得出的基因型间统计学差异具有显著性（p < 0.05）[彩色图可在 wileyonlinelibrary.com 上查看]
体外和体内免疫抑制和抗...
1 Josep Carreras白血病人类，医学，默西亚，西班牙（ICREA），巴塞罗那，西班牙∗电话：（+34）93 5572810;电子邮件：pmenendez @warfshearch.org;黄金，Paola Alejandra，电话：（+34）93 5572810;电子邮件：有希望。
注射技术，药物配方和肿瘤微环境对肿瘤内免疫疗法递送和疗效的影响
免疫治疗剂的肿瘤内递送代表了一种令人信服的解决方案，可以直接解决局部肿瘤免疫力的障碍。但是，我们以前已经表明，脱靶传递是肿瘤内注射期间的一个重大问题。这可能导致药物疗效和全身毒性降低。我们已经确定了影响肿瘤内药物输送的三个变量：注射技术，制剂和肿瘤微环境。这项研究的目的是表征每个变量中修饰对肿瘤内药物递送和免疫疗法功效的影响。方法在大鼠和小鼠合成性肿瘤模型中具有超声，荧光镜和CT扫描能力的混合图像引导套件中进行了肿瘤内注射。通过CT体积成像对肿瘤内药物分布进行定量。使用流式细胞仪和单细胞RNA测序评估了不同针头设计和基于水凝胶的药物递送对干扰素基因（STING）激动剂的免疫反应的影响。我们还评估了肿瘤刚度对药物注射分布的影响。针头设计的结果变化，特别是使用多侧孔针的变化，相对于传统的终端针，导致肿瘤内药物沉积大约改善了三倍。同样，通过多侧孔针的刺激性激动剂的递送导致I型干扰素相关基因的表达显着增加，而“炎症”树突状细胞基因签名相对于端孔刺激性激动剂的递送。嵌入刺激性激动剂的多域肽基水凝胶导致肿瘤内沉积的显着改善。但是，发现水凝胶会在靶肿瘤内对自身产生强大的免疫反应。对肿瘤内药物递送的肿瘤基质的评估表明，与企业肿瘤（MC38结肠直肠）相比，软肿瘤（B16黑色素瘤）中肿瘤内分布的两倍改善。